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一种提高免疫组化效率的方法


技术摘要:
本发明公开一种提高免疫组化效率的方法,包括如下步骤:步骤一,切片的制备;步骤二,脱蜡和水化;步骤三,抗原修复;步骤四,冲洗;步骤五,加入一抗;步骤六,封闭;步骤七,加入二抗;步骤八,显色;其中,以上步骤均在电场环境下进行。该方法的特点在于整个免疫组  全部
背景技术:
免疫组织化学(IHC)是通过化学反应标记抗体的显色剂,利用抗原与抗体特异性 结合的原理,定性定量的研究组织或细胞中的未知抗原。近年来,随着免疫组化技术的发 展,许多疑难肿瘤得到了明确的诊断。免疫组化技术用于临床切片诊断肿瘤细胞上处于非 常重要的地位。我国免疫组化技术是从上个世纪60年代发展起来的,然而,现阶段我国免疫 组化用于临床诊断仍然存在许多技术瓶颈,例如,免疫组化所耗费的时间很长,通常情况 下,免疫诊断反应需过夜,时间超过24小时,无法达到现场快速检测的目的。 因此大大缩短反应时间尤为重要,如何在不损坏抗原抗体蛋白活性的前提下,提 高其反应结合率,减少反应所需时间,依然是现阶段免疫组化技术面临的挑战。
技术实现要素:
有鉴于此,本发明的目的是对以上不足进行了深度改良和机理分析,提供一种提 高免疫组化效率的方法,该方法的特点在于整个免疫组化过程在电场环境下进行,从而实 现低环境负荷型微量液滴无损搅拌,进而大幅度降低抗体的使用量,节约成本,更重要的是 能大幅度缩短组织免疫诊断的反应时间,甚至可将组织免疫诊断的反应时间由现今177min 的水平缩短到19  min,另外该方法还可以用在核酸快速诊断上,将反应时间由现今720min 的水平缩短到30  min,极大地提高诊断效率。具体技术方案如下: 一种提高免疫组化效率的方法,其特征在于,包括如下步骤: 步骤一,切片的制备:取组织切片,展片、捞片后固定2min,于低温下保存; 步骤二,脱蜡和水化:将蜡片置于二甲苯中浸泡后,甩去多余液体置于无水乙醇中浸 泡,再依次由自来水,PBS溶液冲洗; 步骤三,抗原修复:取配置好的抗原修复液放入抗原修复盒中,液体超过组织切片上边 缘0.5cm,盖上盖子锡箔纸外围封盖2min; 步骤四,冲洗:将步骤三中的组织切片用PBS溶液冲洗1min; 步骤五,加入一抗:甩去多余液体后,加入1mg/mL的一抗试剂50uL,室温孵育5min; 步骤六,封闭:加入封闭液封闭1min; 步骤七,加入二抗:甩去多余液体后,加入1mg/mL  的二抗酶标聚合物50μL,室温孵育 5min; 步骤八,显色:甩去多余的液体后,加入50uL  DAB显色液,室温孵育1min,显微镜下观察 染色结果,防止过染,自来水冲洗; 其中,以上步骤均在电场环境下进行。 进一步,步骤一中切片取4um,在45℃展片,于67℃固定2min,保存温度为-20℃。 进一步,步骤二中,于二甲苯中浸泡5s,于无水乙醇中浸泡5s×1次,自来水冲洗 3 CN 111551705 A 说 明 书 2/3 页 30min,PBS溶液冲洗5s×1次,其中PBS溶液为10mM  PBS,pH为7.2  。 进一步,步骤三中的抗原修复的温度范围为102-120℃。 进一步,步骤四中的PBS溶液为pH  7 .0  的10mM  PBS  溶液加0.8%NaCl和0 .02%  KCl。 进一步,步骤五后需用PBS溶液冲洗15s。 进一步,步骤六后需用PBS溶液冲洗15s。 进一步,步骤七后需用PBS溶液冲洗15s。 本发明附加的方面和优点将在下面的描述中进一步给出,部分将从下面的描述中 变得明显,或通过本发明的实践了解到。 附图说明 图1为结肠癌生物切片相同时间现有方法和本方法免疫组化对比图,其中左图为 现有技术染色后效果图,右图为本方法染色后效果图; 图2为是否加磁珠的抗体残留量示意图。
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