技术摘要：
本发明提供了一种采用气相‑质谱方法检测样品中1,3‑二氧杂环戊烷类杂质含量的方法，更具体的是采用气相‑串联质谱方法检测样品中反式‑4,5‑二氯‑4,5‑二甲基‑1,3‑二氧杂环戊烷‑2‑酮和顺式‑4,5‑二氯‑4,5‑二甲基‑1,3‑二氧杂环戊烷‑2‑酮；所述的样品为奥美 全部
背景技术：
4-氯甲基-5-甲基-1,3-二氧杂环戊烯-2-酮（DMDO-Cl）是一种重要的化学中间体， 其可用来合成奥美沙坦酯、阿齐沙坦酯、仑氨西林、普卢利沙星等，可改善药物的生物利用 度和稳定性。现有技术中制备DMDO-Cl，一般由4,5-二甲基-1,3-二氧杂环戊烯-2-酮（DMDO） 经氯化试剂氯化制备得到，反应过程中易产生反式-4,5-二氯-4,5-二甲基-1,3-二氧杂环 戊烷-2-酮（杂质B，式I）和顺式-4,5-二氯-4,5-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-酮（杂质C，式 II），并残留在DMDO-Cl中，进而传递到下一步反应的产物中，甚至残留在终产品中。 未见有报道杂质B和杂质C的检测方法，因此，开发针对杂质B和杂质C的检测方法， 对相关原料药工艺开发、质量控制具有重要的意义。
技术实现要素：
本发明提供了一种1,3-二氧杂环戊烷类杂质含量的检测方法，其中所述的1,3-二 氧杂环戊烷类杂质为反式-4,5-二氯-4,5-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-酮（杂质B，式I）和 顺式-4,5-二氯-4,5-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-酮（杂质C，式II），所述的检测方法采用 气相色谱-质谱法（GC-MS），该方法灵敏度高、准确性高、重复性好，可用于样品中杂质B和杂 质C的检测。 本发明提供的一种1,3-二氧杂环戊烷类杂质含量的检测方法，其特征在于采用 GC-MS/MS进行检测，包括如下步骤： 溶液配制：分别配制对照品溶液、灵敏度溶液和供试品溶液；所述的对照品溶液和灵敏 度溶液均为杂质B和杂质C的溶液； 其中，所述的对照品溶液和灵敏度溶液均为采用杂质B和杂质C溶解于稀释液配制而 成；供试品溶液采用供试样品溶解于稀释液配制而成； 所述的供试样品为含有或可能含有杂质B和杂质C或其中任何一种；所述的供试样品化 3 CN 111595982 A 说 明 书 2/15 页 学结构式中含有式III片段， ； 所述的供试样品为4-氯甲基-5-甲基-1,3-二氧杂环戊烯-2-酮、奥美沙坦酯、阿齐沙坦 酯、普卢利沙星、仑氨西林或仑氨西林药学上可接受的盐，其中所述的仑氨西林药学上可接 受的盐优选仑氨西林盐酸盐； 进样：待GC-MS/MS仪器系统稳定后，进空白溶液1针（必要时进多针），灵敏度溶液1针， 对照品溶液6针，供试品溶液1针，记录谱图; 其中， 所述的检测方法采用的色谱条件为：色谱柱为以（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷固定液的毛 细管柱，采用程序升温； 所述检查方法的质谱条件如表1所示： 所述的1,3-二氧杂环戊烷类杂质为反式-4,5-二氯-4,5-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷- 2-酮和顺式-4,5-二氯-4,5-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-酮； 所述对照品溶液中杂质B和杂质C的浓度均为100 ng/ml~300ng/ml，优选200ng/ml~ 250ng/ml；所述灵敏度溶液中杂质B和杂质C的浓度均为40ng/ml~80ng/ml，优选55ng/ml~ 65ng/ml；所述供试品溶液浓度为2 mg/ml~15mg/ml，优选5 mg/ml~8mg/ml。 所述的对照品溶液的配制方法为：精密量取对照品混合储备液适量于量瓶中，加 稀释液稀释至刻度，摇匀； 灵敏度溶液：精密量取对照品混合储备液适量置量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。 所述的对照品混合储备液得配制方法为：分别精密量取杂质B储备液适量、杂质C 储备液适量，置同一量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀； 所述的杂质B储备液的配制方法为：取杂质B对照品适量，精密称定，置量瓶中，加稀释 液稀释至刻度，摇匀。 4 CN 111595982 A 说 明 书 3/15 页 所述的杂质C储备液的配制方法为：取杂质C对照品适量，精密称定，置量瓶中，加 稀释液稀释至刻度，摇匀。 所述的供试品溶液：取供试品适量，精密称定，置量瓶中，加稀释液超声溶解并稀 释至刻度。 所述的的空白溶液和稀释液均为卤代烷烃，所述的卤代烷烃优选二氯甲烷。 其中所采用的卤代烷烃为AR及以上，杂质B对照品及杂质C对照品外购得到，为AR 级及以上。所述的以（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷固定液的毛细管柱为Agilent HP-5MS, 30 m x 0.25 mm, 0.25 μm ，或效能相当的色谱柱。 所述的程序升温为柱温初始温度为80℃，保持3分钟，以每分钟15℃的速率升温至 200℃，保持5min；进样口温度：150℃；载气：He；分流模式：分流，载气流速：1mL/min，分流 比：10：1，进样量：2µL； 更优选的，本发明所述的检测方法，包括以下步骤： 溶液配制：分别配制对照品溶液、灵敏度溶液和供试品溶液；所述的对照品溶液配制方 法为：精密量取对照品混合储备450µL置20mL量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。所述的灵 敏度溶液配制方法为：精密量取对照品混合储备液600µL置100m量瓶中，加稀释液稀释至刻 度，摇匀。所述的供试品溶液配制方法为：取供试品约120mg，精密称定，置20mL量瓶中，加稀 释液超声溶解并稀释至刻度。其中所述的供试品为含有或可能含有杂质B和杂质C或其中任 何一种；所述的供试样品为4-氯甲基-5-甲基-1,3-二氧杂环戊烯-2-酮、奥美沙坦酯、阿齐 沙坦酯、普卢利沙星、仑氨西林或仑氨西林药学上可接受的盐，其中所述的仑氨西林药学上 可接受的盐优选仑氨西林盐酸盐； 所述的对照品混合储备液的配制方法为：分别精密量取杂质B储备液1.0mL、杂质C储备 液1.0mL，置同一100mL量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀； 所述的杂质B储备液的配制方法为：取杂质B对照品约20mg，精密称定，置20mL量瓶中， 加稀释液稀释至刻度，摇匀。 所述的杂质C储备液的配制方法为：取杂质C对照品约20mg，精密称定，置20mL量瓶 中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。 进样：待GC-MS/MS仪器系统稳定后，进空白溶液1针（必要时进多针），灵敏度溶液1 针，对照品溶液6针，供试品溶液1针，记录谱图; 其中， 所述的检测方法采用的色谱条件为：色谱柱为Agilent HP-5MS, 30 m x 0 .25 mm , 0.25 μm ，采用程序升温；柱温初始温度为80℃，保持3分钟，以每分钟15℃的速率升温至 200℃，保持5min；进样口温度：150℃；载气：He；分流模式：分流，载气流速：1mL/min，分流 比：10：1，进样量：2µL； 所述的检测方法的质谱条件为如表1所示。 其中灵敏度溶液中杂质B、杂质C的S/N均应不小于10；6针对照品溶液中杂质B、杂 质C峰面积RSD均应不大于10.0%。 所述的的空白溶液和稀释液均为二氯甲烷，为AR及以上级别，，杂质B对照品及杂 质C对照品外购得到，为AR级及以上。 所采用的仪器为气相色谱仪、自动进样器、Agilent GC\MS QQQ 7000D配备EI离子 5 CN 111595982 A 说 明 书 4/15 页 源、电子分析天平。 根据以下公式计算杂质B和杂质C在供试样品中的含量， 结果（ppm）=(Ru/Rs) ×(Cs/Cu) 其中：Ru：Ru：供试品溶液图谱中杂质B或杂质C峰面积；Rs：6针对照品溶液图谱中杂质B 或杂质C峰的平均峰面积；Cs：对照品溶液中杂质B或杂质C峰的浓度(ng/ml)；Cu：供试品溶 液中的供试样品浓度(mg/ml)。 所述的检测方法采用奥美沙坦酯为供试品进行方法学验证，验证结果表明，符合 相关要求，其测试结果如下： 6 CN 111595982 A 说 明 书 5/15 页 本发明所述的GC-MS为气相色谱-质谱，GC-MS/MS为气相色谱-串联质谱。 本发明所提供的用于检测供试品中杂质B和杂质C的含量的方法，具有灵敏度高， 定量限低，根据相关指导原则，按照从严控制杂质含量，杂质B和杂质C在奥美沙坦酯中的限 度为37.5ppm，所述的检测方法采用奥美沙坦酯为供试品进行经系统适用性、专属性、精密 度、定量限、LOQ精密度、检出限等项目验证，均符合相关要求，本发明所提供的方法可用于 杂质B和杂质C在奥美沙坦酯中含量的检测,所述的方法也可用于4-氯甲基-5-甲基-1,3-二 氧杂环戊烯-2-酮、阿齐沙坦酯、普卢利沙星、仑氨西林或仑氨西林药学上可接受的盐中杂 质B和杂质C含量的检测，对于仑氨西林药学上可接受的盐可经处理得到游离的仑氨西林， 进而采用本方法进行检测。 附图说明 图1 实施例2中对照品溶液-1谱图 图2 实施例3中杂质B定位溶液谱图 图3实施例4中Precision-1谱图 图4实施例5中LOQ-1谱图 图5实施例5中LOD谱图 图6实施例6中线性溶液-100%-1谱图 图7实施例6中杂质B线性关系图 图8 实施例6中杂质C线性关系图 图9实施例7中准确度-100%限度溶液-1谱图
本发明提供了一种采用气相‑质谱方法检测样品中1,3‑二氧杂环戊烷类杂质含量的方法，更具体的是采用气相‑串联质谱方法检测样品中反式‑4,5‑二氯‑4,5‑二甲基‑1,3‑二氧杂环戊烷‑2‑酮和顺式‑4,5‑二氯‑4,5‑二甲基‑1,3‑二氧杂环戊烷‑2‑酮；所述的样品为奥美 全部
背景技术：
4-氯甲基-5-甲基-1,3-二氧杂环戊烯-2-酮（DMDO-Cl）是一种重要的化学中间体， 其可用来合成奥美沙坦酯、阿齐沙坦酯、仑氨西林、普卢利沙星等，可改善药物的生物利用 度和稳定性。现有技术中制备DMDO-Cl，一般由4,5-二甲基-1,3-二氧杂环戊烯-2-酮（DMDO） 经氯化试剂氯化制备得到，反应过程中易产生反式-4,5-二氯-4,5-二甲基-1,3-二氧杂环 戊烷-2-酮（杂质B，式I）和顺式-4,5-二氯-4,5-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-酮（杂质C，式 II），并残留在DMDO-Cl中，进而传递到下一步反应的产物中，甚至残留在终产品中。 未见有报道杂质B和杂质C的检测方法，因此，开发针对杂质B和杂质C的检测方法， 对相关原料药工艺开发、质量控制具有重要的意义。
技术实现要素：
本发明提供了一种1,3-二氧杂环戊烷类杂质含量的检测方法，其中所述的1,3-二 氧杂环戊烷类杂质为反式-4,5-二氯-4,5-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-酮（杂质B，式I）和 顺式-4,5-二氯-4,5-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-酮（杂质C，式II），所述的检测方法采用 气相色谱-质谱法（GC-MS），该方法灵敏度高、准确性高、重复性好，可用于样品中杂质B和杂 质C的检测。 本发明提供的一种1,3-二氧杂环戊烷类杂质含量的检测方法，其特征在于采用 GC-MS/MS进行检测，包括如下步骤： 溶液配制：分别配制对照品溶液、灵敏度溶液和供试品溶液；所述的对照品溶液和灵敏 度溶液均为杂质B和杂质C的溶液； 其中，所述的对照品溶液和灵敏度溶液均为采用杂质B和杂质C溶解于稀释液配制而 成；供试品溶液采用供试样品溶解于稀释液配制而成； 所述的供试样品为含有或可能含有杂质B和杂质C或其中任何一种；所述的供试样品化 3 CN 111595982 A 说 明 书 2/15 页 学结构式中含有式III片段， ； 所述的供试样品为4-氯甲基-5-甲基-1,3-二氧杂环戊烯-2-酮、奥美沙坦酯、阿齐沙坦 酯、普卢利沙星、仑氨西林或仑氨西林药学上可接受的盐，其中所述的仑氨西林药学上可接 受的盐优选仑氨西林盐酸盐； 进样：待GC-MS/MS仪器系统稳定后，进空白溶液1针（必要时进多针），灵敏度溶液1针， 对照品溶液6针，供试品溶液1针，记录谱图; 其中， 所述的检测方法采用的色谱条件为：色谱柱为以（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷固定液的毛 细管柱，采用程序升温； 所述检查方法的质谱条件如表1所示： 所述的1,3-二氧杂环戊烷类杂质为反式-4,5-二氯-4,5-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷- 2-酮和顺式-4,5-二氯-4,5-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-酮； 所述对照品溶液中杂质B和杂质C的浓度均为100 ng/ml~300ng/ml，优选200ng/ml~ 250ng/ml；所述灵敏度溶液中杂质B和杂质C的浓度均为40ng/ml~80ng/ml，优选55ng/ml~ 65ng/ml；所述供试品溶液浓度为2 mg/ml~15mg/ml，优选5 mg/ml~8mg/ml。 所述的对照品溶液的配制方法为：精密量取对照品混合储备液适量于量瓶中，加 稀释液稀释至刻度，摇匀； 灵敏度溶液：精密量取对照品混合储备液适量置量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。 所述的对照品混合储备液得配制方法为：分别精密量取杂质B储备液适量、杂质C 储备液适量，置同一量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀； 所述的杂质B储备液的配制方法为：取杂质B对照品适量，精密称定，置量瓶中，加稀释 液稀释至刻度，摇匀。 4 CN 111595982 A 说 明 书 3/15 页 所述的杂质C储备液的配制方法为：取杂质C对照品适量，精密称定，置量瓶中，加 稀释液稀释至刻度，摇匀。 所述的供试品溶液：取供试品适量，精密称定，置量瓶中，加稀释液超声溶解并稀 释至刻度。 所述的的空白溶液和稀释液均为卤代烷烃，所述的卤代烷烃优选二氯甲烷。 其中所采用的卤代烷烃为AR及以上，杂质B对照品及杂质C对照品外购得到，为AR 级及以上。所述的以（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷固定液的毛细管柱为Agilent HP-5MS, 30 m x 0.25 mm, 0.25 μm ，或效能相当的色谱柱。 所述的程序升温为柱温初始温度为80℃，保持3分钟，以每分钟15℃的速率升温至 200℃，保持5min；进样口温度：150℃；载气：He；分流模式：分流，载气流速：1mL/min，分流 比：10：1，进样量：2µL； 更优选的，本发明所述的检测方法，包括以下步骤： 溶液配制：分别配制对照品溶液、灵敏度溶液和供试品溶液；所述的对照品溶液配制方 法为：精密量取对照品混合储备450µL置20mL量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。所述的灵 敏度溶液配制方法为：精密量取对照品混合储备液600µL置100m量瓶中，加稀释液稀释至刻 度，摇匀。所述的供试品溶液配制方法为：取供试品约120mg，精密称定，置20mL量瓶中，加稀 释液超声溶解并稀释至刻度。其中所述的供试品为含有或可能含有杂质B和杂质C或其中任 何一种；所述的供试样品为4-氯甲基-5-甲基-1,3-二氧杂环戊烯-2-酮、奥美沙坦酯、阿齐 沙坦酯、普卢利沙星、仑氨西林或仑氨西林药学上可接受的盐，其中所述的仑氨西林药学上 可接受的盐优选仑氨西林盐酸盐； 所述的对照品混合储备液的配制方法为：分别精密量取杂质B储备液1.0mL、杂质C储备 液1.0mL，置同一100mL量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀； 所述的杂质B储备液的配制方法为：取杂质B对照品约20mg，精密称定，置20mL量瓶中， 加稀释液稀释至刻度，摇匀。 所述的杂质C储备液的配制方法为：取杂质C对照品约20mg，精密称定，置20mL量瓶 中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。 进样：待GC-MS/MS仪器系统稳定后，进空白溶液1针（必要时进多针），灵敏度溶液1 针，对照品溶液6针，供试品溶液1针，记录谱图; 其中， 所述的检测方法采用的色谱条件为：色谱柱为Agilent HP-5MS, 30 m x 0 .25 mm , 0.25 μm ，采用程序升温；柱温初始温度为80℃，保持3分钟，以每分钟15℃的速率升温至 200℃，保持5min；进样口温度：150℃；载气：He；分流模式：分流，载气流速：1mL/min，分流 比：10：1，进样量：2µL； 所述的检测方法的质谱条件为如表1所示。 其中灵敏度溶液中杂质B、杂质C的S/N均应不小于10；6针对照品溶液中杂质B、杂 质C峰面积RSD均应不大于10.0%。 所述的的空白溶液和稀释液均为二氯甲烷，为AR及以上级别，，杂质B对照品及杂 质C对照品外购得到，为AR级及以上。 所采用的仪器为气相色谱仪、自动进样器、Agilent GC\MS QQQ 7000D配备EI离子 5 CN 111595982 A 说 明 书 4/15 页 源、电子分析天平。 根据以下公式计算杂质B和杂质C在供试样品中的含量， 结果（ppm）=(Ru/Rs) ×(Cs/Cu) 其中：Ru：Ru：供试品溶液图谱中杂质B或杂质C峰面积；Rs：6针对照品溶液图谱中杂质B 或杂质C峰的平均峰面积；Cs：对照品溶液中杂质B或杂质C峰的浓度(ng/ml)；Cu：供试品溶 液中的供试样品浓度(mg/ml)。 所述的检测方法采用奥美沙坦酯为供试品进行方法学验证，验证结果表明，符合 相关要求，其测试结果如下： 6 CN 111595982 A 说 明 书 5/15 页 本发明所述的GC-MS为气相色谱-质谱，GC-MS/MS为气相色谱-串联质谱。 本发明所提供的用于检测供试品中杂质B和杂质C的含量的方法，具有灵敏度高， 定量限低，根据相关指导原则，按照从严控制杂质含量，杂质B和杂质C在奥美沙坦酯中的限 度为37.5ppm，所述的检测方法采用奥美沙坦酯为供试品进行经系统适用性、专属性、精密 度、定量限、LOQ精密度、检出限等项目验证，均符合相关要求，本发明所提供的方法可用于 杂质B和杂质C在奥美沙坦酯中含量的检测,所述的方法也可用于4-氯甲基-5-甲基-1,3-二 氧杂环戊烯-2-酮、阿齐沙坦酯、普卢利沙星、仑氨西林或仑氨西林药学上可接受的盐中杂 质B和杂质C含量的检测，对于仑氨西林药学上可接受的盐可经处理得到游离的仑氨西林， 进而采用本方法进行检测。 附图说明 图1 实施例2中对照品溶液-1谱图 图2 实施例3中杂质B定位溶液谱图 图3实施例4中Precision-1谱图 图4实施例5中LOQ-1谱图 图5实施例5中LOD谱图 图6实施例6中线性溶液-100%-1谱图 图7实施例6中杂质B线性关系图 图8 实施例6中杂质C线性关系图 图9实施例7中准确度-100%限度溶液-1谱图
