技术摘要：
一种同时测定噁唑酰草胺及其代谢物含量的超高效液相色谱‑串联质谱法，是取含噁唑酰草胺及其代谢物HFMPA、HPFMPA和6‑CBO的试样，用色谱乙腈溶解后稀释，作为试样溶液，采用超高效液相色谱‑串联质谱法的多反应监测(MRM)模式对试样溶液进行检测，以保留时间和离子对信 全部
背景技术：
噁唑酰草胺，英文通用名称：metamifop，化学名称：(R)-N-甲基-N-4-氟苯基-2- [4-(6-氯-苯并噁唑-2-氧基)苯基]苯氧基-丙酰胺，相对分子质量：440 .9，化学分子式： C23H18ClFN2O4。噁唑酰草胺为韩国化工技术研究院开发的芳氧苯氧丙酸脂类除草剂，作用机 理是通过抑制乙酰辅酶A羧化酶而发挥杀草作用，防除大多数年生禾本科杂草，例如稗草、 千金子、马唐等。噁唑酰草胺与其他农药的混配性非常强，因此，噁唑酰草胺的应用越来越 广泛。 噁唑酰草胺在植物和环境中主要通过化学和微生物两种途径降解，代谢产物主要 有：N-(2-fluorophenyl)-2-hydroxy-N-methylpropionamide(HFMPA)、6-chloro-3H- benzooxazol-2one(6-CBO)和N-(2-fluorophenyl)-2-(4–hydroxy phenoxy)-N- methylpropionamide(HPFMPA)等。其中HPFMPA，化学分子式：C16H13FNO3，相对分子质量：286； HFMPA，化学分子式：C10H12FNO2，相对分子质量：197；6-CBO，化学分子式：C7H4ClNO2，相对分子 质量：169。噁唑酰草胺与其代谢产物HFMPA、HPFMPA及6-CBO的化学结构式分别如下所示： 随着噁唑酰草胺应用越来越广，已有文献报道在籼稻上采用弥雾法施药时会出现 水稻药害情况，为了评价和监测噁唑酰草胺施后在环境中的残留状况和降解归趋，目前已 采用液相色谱法对噁唑酰草胺及其代谢产物进行检测分析，但该方法普遍存在灵敏度不 高，检测时间较长，需要的样品量较大等缺点。因此，开发一种快速、高效、灵敏度高的同时 测定噁唑酰草胺及其代谢物HFMPA、HPFMPA和6-CBO含量检测的方法尤为重要。 3 CN 111595979 A 说 明 书 2/7 页
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术中存在的上述诸多不足之处，提供 一种同时测定噁唑酰草胺及其代谢物含量的超高效液相色谱-串联质谱法，本发明采用超 高效液相色谱-串联质谱法，具有检测灵敏度高、检测时间短、所耗试剂少、选择性好、定性 定量同时进行、结果可靠等优点。 为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种同时测定噁唑酰草胺及 其代谢物含量的超高效液相色谱-串联质谱法，该方法步骤如下： A.梯度混合标准工作溶液的配制：取各待测组分噁唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA和6- CBO的标准品，配制梯度混合标准工作溶液； 具体配制过程为：准确称取噁唑酰草胺标准品，用色谱乙腈溶解并配制成质量浓 度为1000.0mg/L的噁唑酰草胺标准母液；同时分别准确称取HFMPA标准品、HPFMPA标准品和 6-CBO标准品，分别用色谱乙腈溶解，并用色谱乙腈配制成质量浓度为1000.0mg/L的HFMPA 标准母液、HPFMPA标准母液和6-CBO标准母液。然后采用梯度稀释法分别取噁唑酰草胺、 HFMPA、HPFMPA和6-CBO的标准母液，配制质量浓度为0.01、0.05、0.10、0.50、1.00mg/L的噁 唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA和6-CBO的系列混合标准溶液，用色谱乙腈定容，各混合标准溶液 中各待测组分噁唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA和6-CBO的质量浓度均为0.01、0.05、0.10、0.50、 1.00mg/L。 B.超高效液相色谱-串联质谱法检测条件： 色谱条件：流动相：以0.1％甲酸水溶液为A相，以乙腈为B相，等梯度洗脱，A:B＝ 20:80，流速0.2mL/min；进样量5.0μL；色谱柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱 (2.1mm×100mm，2.7μm)，柱温：35℃。 质谱条件：离子源:电喷雾离子(AJS ESI)源；扫描方式:6-CBO负离子扫描模式；噁 唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA正离子扫描模式。检测方式：多反应监测MRM模式；干燥气温度300 ℃；干燥气流量10.0L/min；雾化气压力45psi；鞘气温度250℃；鞘气流量10L/min；毛细管电 压3500V；喷嘴电压500V。 采用多反应监测(MRM)模式采集数据，以保留时间和离子对信息进行定性分析，以 母离子和响应值最高的子离子进行定量分析。噁唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA和6-CBO的离子选 择参数见表1。 表1MRM模式下噁唑酰草胺及其代谢物HFMPA、HPFMPA和6-CBO的离子选择参数 4 CN 111595979 A 说 明 书 3/7 页 上表中＊表示定量离子。 C.标准溶液检测及标准曲线的绘制：将配制的质量浓度为0.01、0.05、0.1、0.50、 及1.00mg/L的梯度混合标准溶液采用前述超高效液相色谱-串联质谱检测条件进行测定， 以噁唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA和6-CBO的质量浓度(x，mg/L)为横坐标、相应的监测离子峰面 积(y)为纵坐标绘制标准工作曲线。经统计分析处理得出噁唑酰草胺的标准曲线方程为：y ＝90047x 939.1(R2＝0.9999)，HFMPA的标准曲线方程为：y＝42398x 1183(R2＝1)；HPFMPA 的标准曲线方程为：y＝95888x 9186(R2＝0.999)，6-CBO的标准曲线方程为：y＝7742x 190.8(R2＝0.997)。结果表明，噁唑酰草胺及HFMPA、HPFMPA和6-CBO的质量浓度与其相对应 的监测离子峰面积之间呈良好的线性关系，故能用来进行样品的定性和定量分析。 D .试样溶液的配制和检测：取含各待测组分的试样，用色谱乙腈溶解并稀释，摇 匀，作为供试样溶液；采用前述超高效液相色谱-串联质谱检测条件对试样溶液进行检测， 记录色谱峰保留时间和色谱峰面积，以保留时间和两个离子对信息比较进行定性分析，以 母离子和响应值最高的子离子组成的离子对进行定量分析，采用外标法定量。通过色谱峰 保留时间和两个离子对信息比较进行定性后，测定试样溶液中噁唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA 和6-CBO的色谱峰面积，代入噁唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA和6-CBO的标准曲线方程中，即可得 到试样中噁唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA和6-CBO的质量含量。 本发明应用超高效液相色谱串联质谱仪进行检测，考察了噁唑酰草胺及其代谢物 HFMPA、HPFMPA和6-CBO测定时的检测限、精密度、准确度、线性范围等，分析结果表明所有的 参数均满足定量定性分析的要求，该检测方法检测时间短、通量高、检测灵敏度、精密度高， 成本低廉，线性范围宽，且线性相关性较好，采用本发明的方法可快速准确测定噁唑酰草胺 及其代谢物HFMPA、HPFMPA和6-CBO的含量，符合农药残检测方法的要求，适合于日常或科研 工作中噁唑酰草胺及其代谢物HFMPA、HPFMPA和6-CBO的检测。 附图说明 图1是6-CBO的离子色谱图。 图2是HPFMPA的离子色谱图。 图3是HFMPA的离子色谱图。 图4是噁唑酰草胺的离子色谱图。 图5是乙腈溶剂空白总离子色谱图。 图6是1mg/L噁唑酰草胺及其代谢物HFMPA、HPFMPA和6-CBO混合标准溶液总离子色 谱图。 图7是试样中噁唑酰草胺及其代谢物HFMPA、HPFMPA和6-CBO的总离子色谱图。 上述图1-图4中，上图为总离子色谱图，中图为待测物质的定性离子色谱图，下图 为待测物质的定量离子色谱图。
一种同时测定噁唑酰草胺及其代谢物含量的超高效液相色谱‑串联质谱法，是取含噁唑酰草胺及其代谢物HFMPA、HPFMPA和6‑CBO的试样，用色谱乙腈溶解后稀释，作为试样溶液，采用超高效液相色谱‑串联质谱法的多反应监测(MRM)模式对试样溶液进行检测，以保留时间和离子对信 全部
背景技术：
噁唑酰草胺，英文通用名称：metamifop，化学名称：(R)-N-甲基-N-4-氟苯基-2- [4-(6-氯-苯并噁唑-2-氧基)苯基]苯氧基-丙酰胺，相对分子质量：440 .9，化学分子式： C23H18ClFN2O4。噁唑酰草胺为韩国化工技术研究院开发的芳氧苯氧丙酸脂类除草剂，作用机 理是通过抑制乙酰辅酶A羧化酶而发挥杀草作用，防除大多数年生禾本科杂草，例如稗草、 千金子、马唐等。噁唑酰草胺与其他农药的混配性非常强，因此，噁唑酰草胺的应用越来越 广泛。 噁唑酰草胺在植物和环境中主要通过化学和微生物两种途径降解，代谢产物主要 有：N-(2-fluorophenyl)-2-hydroxy-N-methylpropionamide(HFMPA)、6-chloro-3H- benzooxazol-2one(6-CBO)和N-(2-fluorophenyl)-2-(4–hydroxy phenoxy)-N- methylpropionamide(HPFMPA)等。其中HPFMPA，化学分子式：C16H13FNO3，相对分子质量：286； HFMPA，化学分子式：C10H12FNO2，相对分子质量：197；6-CBO，化学分子式：C7H4ClNO2，相对分子 质量：169。噁唑酰草胺与其代谢产物HFMPA、HPFMPA及6-CBO的化学结构式分别如下所示： 随着噁唑酰草胺应用越来越广，已有文献报道在籼稻上采用弥雾法施药时会出现 水稻药害情况，为了评价和监测噁唑酰草胺施后在环境中的残留状况和降解归趋，目前已 采用液相色谱法对噁唑酰草胺及其代谢产物进行检测分析，但该方法普遍存在灵敏度不 高，检测时间较长，需要的样品量较大等缺点。因此，开发一种快速、高效、灵敏度高的同时 测定噁唑酰草胺及其代谢物HFMPA、HPFMPA和6-CBO含量检测的方法尤为重要。 3 CN 111595979 A 说 明 书 2/7 页
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术中存在的上述诸多不足之处，提供 一种同时测定噁唑酰草胺及其代谢物含量的超高效液相色谱-串联质谱法，本发明采用超 高效液相色谱-串联质谱法，具有检测灵敏度高、检测时间短、所耗试剂少、选择性好、定性 定量同时进行、结果可靠等优点。 为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种同时测定噁唑酰草胺及 其代谢物含量的超高效液相色谱-串联质谱法，该方法步骤如下： A.梯度混合标准工作溶液的配制：取各待测组分噁唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA和6- CBO的标准品，配制梯度混合标准工作溶液； 具体配制过程为：准确称取噁唑酰草胺标准品，用色谱乙腈溶解并配制成质量浓 度为1000.0mg/L的噁唑酰草胺标准母液；同时分别准确称取HFMPA标准品、HPFMPA标准品和 6-CBO标准品，分别用色谱乙腈溶解，并用色谱乙腈配制成质量浓度为1000.0mg/L的HFMPA 标准母液、HPFMPA标准母液和6-CBO标准母液。然后采用梯度稀释法分别取噁唑酰草胺、 HFMPA、HPFMPA和6-CBO的标准母液，配制质量浓度为0.01、0.05、0.10、0.50、1.00mg/L的噁 唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA和6-CBO的系列混合标准溶液，用色谱乙腈定容，各混合标准溶液 中各待测组分噁唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA和6-CBO的质量浓度均为0.01、0.05、0.10、0.50、 1.00mg/L。 B.超高效液相色谱-串联质谱法检测条件： 色谱条件：流动相：以0.1％甲酸水溶液为A相，以乙腈为B相，等梯度洗脱，A:B＝ 20:80，流速0.2mL/min；进样量5.0μL；色谱柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱 (2.1mm×100mm，2.7μm)，柱温：35℃。 质谱条件：离子源:电喷雾离子(AJS ESI)源；扫描方式:6-CBO负离子扫描模式；噁 唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA正离子扫描模式。检测方式：多反应监测MRM模式；干燥气温度300 ℃；干燥气流量10.0L/min；雾化气压力45psi；鞘气温度250℃；鞘气流量10L/min；毛细管电 压3500V；喷嘴电压500V。 采用多反应监测(MRM)模式采集数据，以保留时间和离子对信息进行定性分析，以 母离子和响应值最高的子离子进行定量分析。噁唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA和6-CBO的离子选 择参数见表1。 表1MRM模式下噁唑酰草胺及其代谢物HFMPA、HPFMPA和6-CBO的离子选择参数 4 CN 111595979 A 说 明 书 3/7 页 上表中＊表示定量离子。 C.标准溶液检测及标准曲线的绘制：将配制的质量浓度为0.01、0.05、0.1、0.50、 及1.00mg/L的梯度混合标准溶液采用前述超高效液相色谱-串联质谱检测条件进行测定， 以噁唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA和6-CBO的质量浓度(x，mg/L)为横坐标、相应的监测离子峰面 积(y)为纵坐标绘制标准工作曲线。经统计分析处理得出噁唑酰草胺的标准曲线方程为：y ＝90047x 939.1(R2＝0.9999)，HFMPA的标准曲线方程为：y＝42398x 1183(R2＝1)；HPFMPA 的标准曲线方程为：y＝95888x 9186(R2＝0.999)，6-CBO的标准曲线方程为：y＝7742x 190.8(R2＝0.997)。结果表明，噁唑酰草胺及HFMPA、HPFMPA和6-CBO的质量浓度与其相对应 的监测离子峰面积之间呈良好的线性关系，故能用来进行样品的定性和定量分析。 D .试样溶液的配制和检测：取含各待测组分的试样，用色谱乙腈溶解并稀释，摇 匀，作为供试样溶液；采用前述超高效液相色谱-串联质谱检测条件对试样溶液进行检测， 记录色谱峰保留时间和色谱峰面积，以保留时间和两个离子对信息比较进行定性分析，以 母离子和响应值最高的子离子组成的离子对进行定量分析，采用外标法定量。通过色谱峰 保留时间和两个离子对信息比较进行定性后，测定试样溶液中噁唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA 和6-CBO的色谱峰面积，代入噁唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA和6-CBO的标准曲线方程中，即可得 到试样中噁唑酰草胺、HFMPA、HPFMPA和6-CBO的质量含量。 本发明应用超高效液相色谱串联质谱仪进行检测，考察了噁唑酰草胺及其代谢物 HFMPA、HPFMPA和6-CBO测定时的检测限、精密度、准确度、线性范围等，分析结果表明所有的 参数均满足定量定性分析的要求，该检测方法检测时间短、通量高、检测灵敏度、精密度高， 成本低廉，线性范围宽，且线性相关性较好，采用本发明的方法可快速准确测定噁唑酰草胺 及其代谢物HFMPA、HPFMPA和6-CBO的含量，符合农药残检测方法的要求，适合于日常或科研 工作中噁唑酰草胺及其代谢物HFMPA、HPFMPA和6-CBO的检测。 附图说明 图1是6-CBO的离子色谱图。 图2是HPFMPA的离子色谱图。 图3是HFMPA的离子色谱图。 图4是噁唑酰草胺的离子色谱图。 图5是乙腈溶剂空白总离子色谱图。 图6是1mg/L噁唑酰草胺及其代谢物HFMPA、HPFMPA和6-CBO混合标准溶液总离子色 谱图。 图7是试样中噁唑酰草胺及其代谢物HFMPA、HPFMPA和6-CBO的总离子色谱图。 上述图1-图4中，上图为总离子色谱图，中图为待测物质的定性离子色谱图，下图 为待测物质的定量离子色谱图。
