技术摘要：
本披露提供了特异性结合至CD2、CD3和肿瘤相关抗原的三特异性结合分子，包含所述三特异性结合分子的缀合物，以及包含所述三特异性结合分子和所述缀合物的药物组合物。本披露进一步提供了使用所述三特异性结合分子治疗表达所述肿瘤相关抗原的癌症的方法。本披露又进一步  全部
背景技术：
重定向靶向T细胞裂解(RTCC)是用于一线治疗和难治性治疗的令人兴奋的机制。 具有出色选择性的抗体和抗体片段已成功地以多种形式进行了工程化，以实现将T细胞交 联到靶细胞上的单一受体所需的双重特异性。 针对一些适应症或适应症本身的一线治疗可能促进免疫抑制环境，以促进T细胞 无反应性，从而降低现有RTCC疗法的疗效。例如，急性骨髓淋巴瘤已被证明是一种在避免免 疫监测的情况下特别难以规避的疾病(Teague和Klein,2013,Journal  for  ImmunoTherapy  of  Cancer[癌症免疫治疗杂志]1:13)。实体肿瘤微环境还可以通过多种途径提供逃逸机制 并促进肿瘤细胞的存活(Vaney等人,2015,Seminars  in  Cancer  Biology[癌症生物学研讨 会]35:S151-S184)。 因此，需要改进的RTCC方法。 4.
技术实现要素：
本披露通过提供多特异性结合分子来扩展RTCC原理，除了CD3或T细胞上TCR复合 物的其他组分之外，所述多特异性结合分子接合肿瘤相关抗原(“TAA”)和CD2。 本发明至少部分地基于以下发现：除了TCR复合物的组分之外，接合CD2将通过活 化T细胞亚群来改善RTCC疗法的临床结果，所述T细胞亚群对于使用仅靶向TAA和TCR复合物 的双特异性接合物的刺激是难治性的。如实例中所示，与仅接合TAA和CD3相比，用接合TAA、 CD2和CD3的三特异性结合分子治疗肿瘤的结果导致抗肿瘤活性的提高，特别是在无反应T 细胞存在的情况下。不受理论的束缚，本发明人相信在单个多特异性分子中结合CD2-和TCR 复合物-接合可以刺激促进T细胞介导的肿瘤细胞裂解的主要信号通路(例如，通过聚集 TCR)和第二共刺激通路两者以诱导T细胞增殖并潜在地克服无反应性。 因此，本披露提供了结合至(1)肿瘤相关抗原(“TAA”)，(2)CD2，和(3)CD3或TCR复 合物的其他组分的三特异性结合分子(“TBM”)。所述TBM包含至少三个抗原结合模块 (“ABM”)，其可以结合TAA、CD2和TCR复合物的组分。在一些实施例中，每个抗原结合模块能 够在其他抗原结合模块中的每一个与其各自的靶结合的同时结合其各自的靶。每个ABM可 以是基于免疫球蛋白的或基于非免疫球蛋白的，并且因此本披露的TBM可以包括基于免疫 球蛋白的ABM、基于非免疫球蛋白的ABM、或其组合。可以用于本披露TBM的基于免疫球蛋白 5 CN 111601824 A 说　明　书 2/269 页 的ABM描述于下文中的6.2.1节和具体实施例31至406、575至583、591至660、662至667、671、 673至762和830至898中。可以用于本披露TBM的基于非免疫球蛋白的ABM描述于下文中的 6.2.2节和具体实施例2至30、403至406和584至589中。结合至TCR复合物的组分的示例性 ABM的其他特征描述于下文中的6.5节和具体实施例38至106、590至667、和1045中。结合至 CD2的示例性ABM的其他特征描述于下文中的6.6节和具体实施例2至37、403至406、575至 589、和1044中。结合至TAA的示例性ABM的其他特征描述于下文中的6.7节和具体实施例107 至276、346至406、668至762、和1046中。 本披露TBM的ABM(或其部分)可以相互连接，例如，通过短肽接头或通过Fc结构域 相互连接。用于连接ABM以形成TBM的方法和组分描述于下文中的6.3节和具体实施例401至 453、763至829和899至957中。 本披露的TBM具有至少三个ABM(即，TBM至少是三价的)，但还可以具有多于三个 ABM。例如，TBM可以具有四个ABM(即四价)、五个ABM(即五价)、或六个ABM(即六价)，条件是 所述TBM具有至少一个可以结合TAA的ABM，至少一个可以结合CD2的ABM，和至少一个可以结 合TCR复合物的组分的ABM。示例性三价、四价、五价、和六价TBM构型示出于图1中并描述于 下文中的6.4节和具体实施例958至1042中。 本披露进一步提供了编码本披露TBM的的核酸(以单个核酸或多个核酸的形式)和 工程化以表达本披露的核酸和TBM的重组宿主细胞和细胞系。示例性核酸、宿主细胞、和细 胞系描述于下文中的6.8节和具体实施例570至573和1169至1176中。 本披露进一步提供了包含本披露的TBM的药物缀合物。为了方便起见，此类缀合物 在本文中被称为“抗体-药物缀合物”或“ADC”，尽管一些或全部ABM可能是非免疫球蛋白结 构域。ADC的实例描述于下文中的6.9节和具体实施例469至507和1054至1093中。 本披露进一步提供了包含本披露的TBM或缀合物的制剂。制剂的实例描述于下文 中的6.10节和具体实施例508至565和1094至1151中。 还提供了包含本披露的TBM和ADC的药物组合物。药物组合物的实例描述于下文中 的6.11节和具体实施例566和1152中。 本文进一步提供了使用本披露的TBM、ADC、和药物组合物的方法，例如用于治疗表 达TAA的增殖性病症(例如，癌症)。示例性方法描述于下文中的6.12节和具体实施例567至 568和1153至1155中。 本披露进一步提供了使用与其他药剂和疗法组合的本披露的TBM、ADC、和药物组 合物的方法。组合疗法的示例性药剂、疗法、和方法描述于下文中的6.13节和具体实施例 569和1156至1168中。 5.附图说明 图1A-1U：示例性TBM构型。图1A示出了图1B-1Z中示出的示例性TBM构型的组分。并 未示出连接每条链的不同结构域的全部区(例如，省略了连接scFv的VH结构域和VL结构域 的接头、连接Fc的CH2结构域和CH3结构域的铰链等)。图1B-1O和1V-Z示出了三价TBM；图1P- 1R示出了四价TBM；图1S示出了五价TBM，并且图1T-1U示出了六价TBM。 图2：实例1的双特异性和三特异性构建体的示意图。 图3A-3D：使用表达人CD-19的Nalm6靶细胞和靶向人CD3和人生长激素的双特异性 6 CN 111601824 A 说　明　书 3/269 页 构建体，靶向人CD3和人CD19的双特异性构建体，以及靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的重 定向T细胞毒性测定的结果。图3A-3B：在24小时(图3A)和48小时(图3B)孵育后，使用来自第 一供体的泛T效应细胞获得的结果。图3C-3D：在24小时(图3C)和48小时(图3D)孵育后，使用 来自第二供体的泛T效应细胞获得的结果。 图4A-4B：使用表达人CD-19的Daudi靶细胞和靶向人CD3和人生长激素的双特异性 构建体，靶向人CD3和人CD19的双特异性构建体，以及靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的重 定向T细胞毒性测定的结果。图4A：在48小时孵育后，使用来自第一供体的泛T效应细胞获得 的结果。图4B：在48小时孵育后，使用来自第二供体的泛T效应细胞获得的结果。 图5：使用阴性对照人K562靶细胞和靶向人CD3和人生长激素的双特异性构建体， 靶向人CD3和人CD19的双特异性构建体，以及靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的重定向T细 胞毒性测定的结果。 图6A-6E：使用表达人CD-19的Nalm6靶细胞和靶向人CD3和人生长激素的双特异性 构建体，靶向人CD3和人CD19的双特异性构建体，以及靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的重 定向T细胞毒性测定的结果。图6A-6E示出了使用来自五个不同供体的泛T效应细胞获得的 结果。 图7：使用表达人CD-19的Nalm6靶细胞和靶向人CD3和人生长激素的双特异性构建 体，靶向人CD3和人CD19的双特异性构建体，以及靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的重定向 T细胞毒性测定的结果。图7示出了使用来自诊断为急性髓性白血病的患者的人冷冻保存的 PBMC获得的结果。 图8A-8D：使用表达人CD-19的Nalm6靶细胞和靶向人CD3和人生长激素的双特异性 构建体，靶向人CD3和人CD19的双特异性构建体，以及靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的重 定向T细胞毒性测定的结果。图8A-8D示出了分别在48小时、72小时、96小时、和120小时从靶 细胞再考验获得的结果。 图9A-9B：细胞增殖测定结果。CD4 分选的细胞示出于图9A中，并且CD8 分选的细 胞示出于图9B中。 图10A-10F：使用表达人CD-19的Nalm6靶细胞和靶向人CD3和人生长激素的双特异 性构建体，靶向人CD3和人CD19的双特异性构建体，以及靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的 细胞因子释放测定的结果。图10A：IFNγ；图10B：TNFα；图10C：IL2；图10D：IL10；图10E：IL6； 图10F：图注说明。 图11：使用表达人CD-19的Nalm6靶细胞和靶向人CD3和人生长激素的双特异性构 建体，靶向人CD3和人CD19的双特异性构建体，以及靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的颗粒 酶B  ELISpot测定的结果。 图12A-C：实例2的三特异性构建体的示意图。图12A：AB2-1；图12B：AB2-2；图12C： AB2-3。 图13：使用表达人CD-19的Nalm6靶细胞和靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的重定 向T细胞毒性测定的结果(实例2)。 图14：使用表达人CD-19的Nalm6靶细胞和靶向人CD3和人生长激素的双特异性构 建体，靶向人CD3和人CD19的双特异性构建体，以及靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的重定 向T细胞毒性测定的结果(实例2)。图14示出了使用食蟹猴泛T效应细胞获得的结果。 7 CN 111601824 A 说　明　书 4/269 页 图15：使用靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的NFAT活化测定的结果(实例2)。 图16A-E：实例3的三特异性构建体的示意图。图16A：AB3-1；图16B：AB3-2；图16C： AB3-3；图16D：AB3-4；图16E：AB3-5。 图17：使用表达人CD-19的Nalm6靶细胞和靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的重定 向T细胞毒性测定的结果(实例3)。 图18：使用靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的NFAT活化测定的结果(实例3)。 图19A-C：实例4的三特异性构建体的示意图。图19A：AB4-1；图19B：AB4-2；图19C： AB4-3。 图20：使用表达人CD-19的Nalm6靶细胞和靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的重定 向T细胞毒性测定的结果(实例4)。 图21：使用靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的NFAT活化测定的结果(实例4)。 图22A-22D：使用靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的细胞因子释放测定的结果(实 例4)。图22A：IL-2；图22B：TNFα；图22C：IFNγ；图22D：图注说明 图23A-23B：实例5的双特异性和三特异性构建体的示意图。图23A：双特异性构建 体；图23B：三特异性构建体。 图24：使用表达人CD-19的Nalm6靶细胞和靶向人CD3和CD19的双特异性构建体或 靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的重定向T细胞毒性测定的结果(实例5)。 图25A-25B：使用表达人CD-19的Nalm6靶细胞和靶向人CD3和CD19的双特异性构建 体，以及靶向人CD3、人CD2和人CD19的TBM的细胞因子释放测定的结果(实例5)。图25A示出 了具有对应于BMA031的CD3结合臂的构建体的结果，并且图25B示出了具有对应于OKT3的 CD3结合臂的构建体的结果。三特异性构建体的结果以黑色显示；双特异性构建体的结果以 灰色显示。 图26A-26B：实例6的双特异性和三特异性构建体的示意图。图26A：双特异性构建 体；图26B：三特异性构建体。 图27：使用表达人Her2的HCC1954靶细胞和靶向人CD3和人Her2的双特异性构建体 或靶向人CD3、人CD2和人Her2的TBM的重定向T细胞毒性测定的结果(实例6)。 图28：使用表达人Her2的HCC1954靶细胞和靶向人CD3和人Her2的双特异性构建 体，以及靶向人CD3、人CD2和人Her2或GH的TBM的细胞因子释放测定的结果(实例6)。 图29A-B：实例7的双特异性和三特异性构建体的示意图。图29A：双特异性构建体； 图29B：三特异性构建体。 图30：使用表达人间皮素的OVCAR8靶细胞和靶向人CD3和人间皮素的双特异性构 建体或靶向人CD3、人CD2和人间皮素的TBM的重定向T细胞毒性测定的结果(实例7)。 图31：使用表达人间皮素的Ovcar8靶细胞和靶向人CD3和人间皮素(MSLN)的双特 异性构建体，以及靶向人CD3、人CD2和人间皮素或GH的TBM的细胞因子释放测定的结果(实 例6)。 图32：实例8的三特异性构建体的示意图。 6.