技术摘要：
本发明涉及中药领域，即治疗血栓闭塞性脉管炎的药物、制备方法及含量测定方法。商品名称：血痹通胶囊。其药用有效成分由以下重量份数的原料药制成：黄芪25‑35份，丹参12‑18份，赤芍15‑25份，蜈蚣12‑18份，地龙8‑12份，土鳖虫12‑18份，络石藤15‑25份，橘红12‑18  全部
背景技术：
在现有技术中，血栓闭塞性脉管炎（Thromboangitis  obliterans，TAO）又称 Buerger病，是一种常见的周围血管疾病，其病因复杂多样尚无定论，相关因素可归纳为内 在因素和外在因素两方面。外在因素主要包括生活环境寒冷潮湿、吸烟、感染以及慢性损伤 等，内在因素主要为自身免疫系统紊乱、前列腺激素紊乱以及遗传等。各种因素致使内皮功 能障碍即受内皮依赖性的血管舒张功能受到了损伤，致病因子诱导炎性因子释放，造成免 疫细胞及内皮细胞黏附，最终诱发血管内血栓与血管炎的形成。血栓闭塞性脉管炎主要临 床表现为肢体青紫冰冷，麻木不仁，拘挛疼痛。至今对于血栓闭塞性脉管炎的主要病因并无 明确定论。从中医的角度来说，病因有：①感受外邪：寒邪侵入，易使经脉气血津液凝结。寒 性收引凝敛，寒邪伤人，则致气血痹阻，经脉不畅，引发肿痛诸症甚至脱疽。明•薛己《外科枢 要》曰:“足趾患之,肿焮痛赤,此三阳经虚,而外邪所乘也。”②湿热毒蕴：因湿有形，状类水， 性属阴，湿邪侵入一则下部先受湿为病，二则其为病多有留滞趋下。湿性重浊，他邪易于粘 着依附，热毒内生，湿热下注，而致此病。③正气亏虚：气为血之帅，气能生血、行血、摄血。血 为气之母，血能养气和载气。气血亏虚，不能遍行经络，内不能壮养脏腑，外不能充养四肢， 而致趾(指)焦黑坏死,甚则脱落。④痰瘀外伤：脾主运化，脾胃失和，导致水谷不能运化，痰 瘀内生，瘀久成邪，脉络痹阻而至脱疽，或受外伤，气血瘀阻，导致气血不能通达四肢百骸， 无血供养则致坏死脱落（李满意,刘红艳,陈传榜等.脱疽的源流及历史文献复习[J].风湿 病与关节炎.2019）。通过改善血液流变学，抗血栓形成，溶栓，抑制内皮细胞增生和血管壁 炎症反应治疗本病将是未来的发展趋势。此类中药，种类繁多，疗效各异。
技术实现要素：
本发明的目的是针对上述不足而提供一种治疗血栓闭塞性脉管炎的药物、制备方 法及含量测定方法，对细胞氧化应激损伤的保护与治疗有较好作用。 本发明的技术解决方案是：治疗血栓闭塞性脉管炎的药物，其特征在于其药用有 效成分由以下重量份数的原料药制成：黄芪25-35份，丹参12-18份，赤芍15-25份，蜈蚣12- 18份，地龙8-12份，土鳖虫12-18份，络石藤15-25份，橘红12-18份，钩藤12-18份。生产中按 比例扩大。 优选，治疗血栓闭塞性脉管炎的药物，其特征在于由以下重量克数的原料药制成 胶囊：黄芪30g，丹参15g，赤芍20g，蜈蚣15g，地龙10g，土鳖虫15g，络石藤20g，橘红15g，钩藤 15g。浸膏粉与糊精比例6:4配比装胶囊。 治疗血栓闭塞性脉管炎的药物的制备方法，其特征在于步骤如下：药用原料用80% 乙醇溶液，料液比为1:8，提取2次，每次提取1  h，待冷却后用旋转蒸发仪蒸发提取液，直至 4 CN 111588762 A 说　明　书 2/22 页 提取液粘稠但不挂壁，将提取液移至蒸发皿中，75  ℃水浴蒸干，直至提取液呈膏状，将蒸发 皿放入减压干燥箱内55  ℃干燥制成粉末。 治疗血栓闭塞性脉管炎的药物的含量测定方法，其特征在于该方法中包括如下任 一种或几种组合： （1）黄芪甲苷含量测定 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱InertSustain  C18  柱（5 μm，4.6*250  mm），流动相选择乙腈-水（35:65），蒸发光散射检测器，流速为1.0  mL/min，柱温  40  ℃，漂 移管温度40  ℃。以黄芪甲苷标准品进样量（μg）为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲 线；精密称定黄芪甲苷标准品，加甲醇配制成浓度为0.05 μg/μ  L，0.10 μg/μL，0.25 μg/μ L，0.50 μg/μL，0.75 μg/μL的标准品溶液，依次进样10 μL，通过高效液相获得数据；得到黄 芪甲苷线性回归方程y=2157223.918x-609361 .5306，相关系数R2=0.9956，表明其在0.5- 7.5 μg之间线性关系良好（图2），带入三批（20190413、20190428、20190511）待测样品相应 峰面积，求得每1  g浸膏粉中黄芪甲苷含量分别为96.172 μg、98.557 μg、97.265 μg；三次 试验所得的黄芪甲苷含量相近，证明本提取工艺可行，效果稳定。 （2）丹参酮IIA含量测定 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱InertSustain  C18  柱（5 μm，4.6*250  mm），流动相选择乙腈与0.02%磷酸溶液，梯度洗脱，检测波长270  nm，流速为1.0  mL/min，柱 温20  ℃；精密称定丹参酮IIA标准品，加入甲醇溶液配制成浓度为0.05 μg/μL、0.10 μg/μ L、0.25 μg/μL、0.50 μg/μL、1.00 μg/μL的标准品溶液，依次进样10 μL，通过高效液相获得 数据。以丹参酮IIA进样量μg为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线；得到丹参酮IIA线 性回归方程y=42276x 4832，相关系数R2=0.9986，表明其在0.5-10.1μg之间线性关系良好， 带入三批待测样品相应峰面积，求得每1g血痹通浸膏粉中丹参酮IIA含量为2 .968mg、 2.979mg、2.894mg；三次试验所测得的丹参酮IIA含量相近，血痹通浸膏粉中对有效成分丹 参酮IIA的提取效果稳定。 （3）芍药苷含量测定： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱InertSustain  C18  柱（5 μm，4.6*250  mm），流动相选择甲醇与0.05  mol/L磷酸二氢钾溶液（40:60），检测波长230  nm，流速为1.0  mL/min，柱温40  ℃；精密称定芍药苷标准品，加入甲醇溶液配制成浓度为1.00 μg/μL、2.50  μg/μL、5.00 μg/μL、10.10 μg/μL、20.00μg/μL的标准品溶液，依次进样10μL，通过高效液相 获得数据。以芍药苷进样量μg为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线；得到芍药苷线性 回归方程y=24914x 11078，相关系数R2=0.9996，表明其在10.0-200.0μg之间线性关系良 好，带入三批待测样品相应峰面积，求得每1  g血痹通浸膏粉中芍药苷含量为39.650  mg、 40.121  mg、39.244  mg；三次试验所测得的芍药苷含量相近，血痹通浸膏粉中对有效成分芍 药苷的提取效果稳定。 （4）络石苷含量测定： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱InertSustain  C18  柱（5 μm，4.6*250  mm），流动相选择乙腈与水（30:70），检测波长280  nm，流速为1.0  mL/min，柱温40  ℃；精密 称定络石苷标准品，加甲醇配制成浓度为0.50μg/μl、1.00μg/μl、2.50μg/μl、5.10μg/μl、 10.00μg/μl的标准品溶液，依次进样10μl，通过高效液相获得数据。以芍药苷进样量μg为横 5 CN 111588762 A 说　明　书 3/22 页 坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线；得到络石苷线性回归方程y=36362x-4853.4，相关 系数R2=0.9818，表明其在5.0-100.0μg之间线性关系良好，带入三批待测样品相应峰面积， 求得每1  g浸膏粉中络石苷含量为2.750  mg、2.631  mg、2.668  mg。三次试验所测得的络石 苷含量相近，血痹通浸膏粉中对有效成分络石苷的提取效果稳定。 黄芪：补气固表，利尿脱毒，排脓，敛疮生肌。丹参：祛瘀止痛，凉血消痈。赤芍：清热 凉血，活血。蜈蚣：息风止痉，通络止痛。地龙：平肝，止喘，通络。土鳖虫：破血逐瘀，续筋接 骨。络石藤：祛风通络，凉血消肿。橘红：理气宽中，燥湿化痰。钩藤：清热平肝，息风止痉。 方解：君药：黄芪。臣药：丹参赤芍蜈蚣地龙土鳖虫络石藤。佐药：橘红钩藤。血栓闭 塞性脉管炎属祖国医学脱疽范畴，多因寒湿及外伤血瘀等瘀阻静脉，致气血不能到达肢端， 肢端失去气血之濡养所致。中医认为：寒湿侵袭，凝滞脉络；外伤血瘀，阻滞脉络；情志失调， 气滞血瘀，以上诸因素闭阻经脉，使气血运行不畅，不能到达肢端，肢端失去气血之温养，而 造成疼痛，溃烂，甚至坏死是脱疽的主要病机。黄芪补气排脓，敛疮生肌。丹参、赤芍活血凉 血。虫类药破血逐瘀，络石藤祛风通络，钩藤息风止痉，全方体现，养气活血，凉血，通利经 脉，而达到治疗脉管炎的目的。 功效：祛风通络、破血逐瘀、息风止痉。 药物剂型不限于此，按上述各药用原料与制药上常用的药用载体，如赋形剂或辅 料可以混合制成片剂、胶囊剂（软胶囊剂）、颗粒剂、散剂、丸剂或其它常规口服制剂。 本发明的优点是：1、通过实验，证实了血痹通是通过改善机体炎症环境，恢复血管 舒张能力，抑制血管平滑肌增生来达到治疗目的的。2、中药方剂血痹通具有血痹通胶囊具 有抗血小板聚集、抗血小板粘附以及抗血栓形成的作用。血痹通胶囊对血栓闭塞性脉管的 作用机制与调节血管舒张、抑制血管平滑肌增生有关。对血栓闭塞性脉管炎具有一定的治 疗作用。3、最佳提取工艺参数用80%乙醇溶液，料液比为1:8，提取2次，每次提取1  h，提取工 艺可行，效果稳定。4、有效成分含量测定优点是简单易行，能够客观真实全面地监控药品的 质量。5、经血栓闭塞性脉管炎50例患者用本药累计临床观察：治愈率72％，显效率92％，有 效率98％，无效率2％。疗效显著。 下面将结合实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。 附图说明 图1游离大鼠股动脉，夹闭股动脉近心端。 图2  黄芪甲苷标准曲线。 图3制剂中黄芪在紫外灯(365  nm)下薄层色谱（TLC）鉴别图谱。 图4  丹参酮IIA标准曲线。 图5  芍药苷标准曲线。 图6络石苷标准曲线。 图7：除生理盐水组外，每组加800 μM  H #2O2损伤，，P＜0.05，##，P＜0.01与生理盐水 组比较；*，P＜0.05，**，P＜0.01与H2O2损伤组比较。 图8：除生理盐水组外，每组加800 μM  H O 损伤，# ##2 2 ，P＜0.05，，P＜0.01与生理盐水 组比较；*，P＜0.05，**，P＜0.01与H2O2损伤组比较。 图9：除生理盐水组外，每组加800 μM  H O 损伤，#，P＜0.05，##2 2 ，P＜0.01与生理盐水 6 CN 111588762 A 说　明　书 4/22 页 组比较；*，P＜0.05，**，P＜0.01与H2O2损伤组比较。 图10：除生理盐水组外，每组加800 μM  H2O2损伤，#，P＜0.05，##，P＜0.01与生理盐 水组比较；*，P＜0.05，**，P＜0.01与H2O2损伤组比较。 图11：除生理盐水组外，每组加800 μM  H # ##2O2损伤，，P＜0.05，，P＜0.01与生理盐 水组比较；*，P＜0.05，**，P＜0.01与H2O2损伤组比较。 图12：除生理盐水组外，每组加800 μM  H2O2损伤，#，P＜0.05，##，P＜0.01与生理盐 水组比较；*，P＜0.05，**，P＜0.01与H2O2损伤组比较。 图13：除生理盐水组外，每组加800 μM  H #2O2损伤，，P＜0.05，##，P＜0.01与生理盐 水组比较；*，P＜0.05，**，P＜0.01与H2O2损伤组比较。