技术摘要：
本发明涉及一种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，属于体外检测技术领域。该试剂盒包括：校准品、磁颗粒反应液R1、示踪结合物反应液R2和捕获抗体反应液R3；所述的磁颗粒反应液R1包含链酶亲和素磁珠、缓冲液和防腐剂；所述的示踪结合物反应液R2包含吖 全部
背景技术：
前列腺癌是危害中老年男性健康的常见恶性肿瘤，血清前列腺特异性抗原 (prostate–specific antigen，PSA)检测联合直肠指检是较早期发现前列腺癌的初筛方 法，对于筛查可疑的病例可进行前列腺穿刺活检以助诊断。但当患者总PSA(total PSA， tPSA)在4.0～10.0μg/L，即传统观点的灰区时，难以用PSA进行明确的鉴别诊断。虽然可同 时进行游离PSA(free PSA，fPSA)检测并计算fPSA与tPSA的比值(f/tPSA)加以鉴别，但收效 并不明显。 血清前列腺特异性抗原同源异构体2(isoform[-2]proprostate-specific antigen，p2PSA)是PSA前体的一种同源异构体，具有不被水解的稳定性、肿瘤特异性、组织 区域特异性的特点，目前越来越多的研究表明：与传统的PSA等相比，检测及经计算得到的 百分p2PSA(％，p2PSA)和前列腺健康指数(prostate health index,PHI)能显著提高前列 腺癌(Prostate cancer,PCa)的诊断特异性，减少不必要的前列腺穿刺活检，并且在肿瘤恶 性度预测及低风险、局限性的PCa患者的主动监测中均显示出良好的应用价值。 定量检测血清中的前列腺特异性抗原同源异构体(p2PSA)，对前列腺癌的诊断起 辅助作用。在国内，血清前列腺特异性抗原同源异构体(p2PSA)检测临床主要以国外贝克曼 公司试剂应用为主，国外进口试剂价格非常昂贵，给患者带来很大的经济负担，不利于在基 层普及。因此，有待开发一种检测灵敏度高、可靠性好的血清前列腺特异性抗原同源异构体 检测试剂盒，以降低患者使用成本，并提高推广使用。
技术实现要素：
本发明要解决现有技术中的技术问题，提供一种检测灵敏度高、可靠性好的前列 腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，以降低患者使用成本， 并提高推广使用。 为了解决上述技术问题，本发明的技术方案具体如下： 本发明提供一种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，包括： 校准品、磁颗粒反应液R1、示踪结合物反应液R2和捕获抗体反应液R3； 所述的磁颗粒反应液R1包含链酶亲和素磁珠、缓冲液和防腐剂； 所述的示踪结合物反应液R2包含吖啶酯标记的p2PSA抗体或吖啶酯标记的tPSA抗 体、NaCl、缓冲液、防腐剂、阻断剂、蛋白稳定剂和表面活性剂； 所述的捕获抗体反应液R3包含生物素标记的tPSA抗体或生物素标记的p2PSA抗 体、NaCl、缓冲液、防腐剂、蛋白稳定剂和表面活性剂。 4 CN 111596060 A 说 明 书 2/13 页 在上述技术方案中，所述的磁颗粒反应液R1中链酶亲和素磁珠的质量浓度为 0.03％-0 .1％；所述的示踪结合物反应液R2中吖啶酯标记的p2PSA抗体或吖啶酯标记的 tPSA抗体的浓度为0.1-3μg/mL；所述的捕获抗体反应液R3中生物素标记的tPSA抗体或生物 素标记的p2PSA抗体的浓度为0.5-8μg/mL。 在上述技术方案中，所述的磁颗粒反应液R1、示踪结合物反应液R2、及捕获抗体反 应液R3中防腐剂为NaN3、Proclin 300或Proclin 950，所述的防腐剂的质量浓度为0.01％- 1％。 在上述技术方案中，所述的示踪结合物反应液R2、及捕获抗体反应液R3中的NaCl 的浓度为0.15mol/L。 在上述技术方案中，所述的示踪结合物反应液R2、及捕获抗体反应液R3中的蛋白 稳定剂为BSA、酪蛋白、及BGG中的一种或几种，所述的蛋白稳定剂的质量浓度为0.1％- 10％。 在上述技术方案中，所述的示踪结合物反应液R2、及捕获抗体反应液R3中的表面 活性剂为吐温、聚乙二醇或者曲拉通，所述的表面活性剂的质量浓度为0.01％-1％。 在上述技术方案中，所述的磁颗粒反应液R1、示踪结合物反应液R2、及捕获抗体反 应液R3中缓冲液为2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)、哌嗪-NN-双(2-乙磺酸)(PIPES)、3-(N-码啡 基)-2-羟基丙磺酸钠(MOPSO)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)或者Tris-盐酸，其pH6.0-8.0， 浓度为10-600mmoL/L。 在上述技术方案中，所述的示踪结合物反应液R2中的阻断剂为IgG、罗氏、或者 Scantibody，所述阻断剂的浓度范围为10-500μg/mL。 本发明还提供一种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒的制 备方法，包括以下步骤： 步骤一：磁颗粒反应液R1的制备 将缓冲液和防腐剂混合，配制成R1基础缓冲液； 取链酶亲和素磁珠，用PBS缓冲液清洗三次，然后将磁珠重悬至R1基础缓冲液中， 配成磁颗粒反应液R1； 步骤二：示踪结合物反应液R2的制备 将NaCl、缓冲液、防腐剂、阻断剂、蛋白稳定剂和表面活性剂混合，配制成R2基础缓 冲液； 取p2PSA抗体或tPSA抗体，与溶解于溶剂中的吖啶酯溶液进行标记，标记时间1-12 小时，反应过程需要避光，标记反应结束后，纯化，收集纯化后的原液进行抗体定量，得到吖 啶酯标记的p2PSA抗体或吖啶酯标记的tPSA抗体； 取吖啶酯标记的p2PSA抗体或吖啶酯标记的tPSA抗体置于R2基础缓冲液中，配成 示踪结合物反应液R2； 步骤三：捕获抗体反应液R3的制备 将NaCl、缓冲液、防腐剂、蛋白稳定剂和表面活性剂混合，配制成R3基础缓冲液； 取tPSA抗体或p2PSA抗体，与溶解于溶剂中的生物素溶液进行标记，标记时间2- 24h，反应过程需要避光，标记反应结束后，纯化，收集纯化后的原液进行抗体定量，得到生 物素标记的tPSA抗体或生物素标记的p2PSA抗体； 5 CN 111596060 A 说 明 书 3/13 页 取生物素标记的tPSA抗体或生物素标记的p2PSA抗体置于R3基础缓冲液中，配制 成捕获抗体反应液R3； 步骤四：配制校准品。 在上述技术方案中，步骤二中p2PSA抗体或tPSA抗体和吖啶酯溶液按照摩尔浓度 1：1-20的比例进行标记；步骤三中tPSA抗体或p2PSA抗体和生物素溶液按照摩尔浓度1：1- 50的比例进行标记。 本发明的有益效果是： 本发明的前列腺特异性抗原同源异构体(p2PSA)化学发光免疫检测试剂盒，该试 剂盒以链霉亲和素磁颗粒作为固相载体，双抗体夹心原理进行检测，结合发光强度和灵敏 度都较高的化学发光物质对p2PSA抗体(或tPSA抗体)进行标记，采用硝酸/氢氧化钠化学发 光体系，以双抗体夹心法实现对p2PSA的定量检测，该试剂盒选择吖啶酯为化学发光免疫分 析系统的标记材料，该材料有激发态回到基态时产生的能量跃迁为直接化学发光，不需要 酶的参与，节约时间及成本；采用链霉亲和素磁珠与生物素标记的类似物可以牢牢的结合 在一起，减少非特异性吸附，提高测试样本的准确度，抗干扰能力强。本发明的前列腺特异 性抗原同源异构体(p2PSA)化学发光免疫检测试剂盒为全自动的测量样本，并直接给出数 值，减少人为操作误差，并且实现无人值守，缩短了临床检测所需的时间，同时检测精度较 高，试剂与仪器组成封闭系统，系统误差小。 本发明的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，工 艺简单，制得的试剂盒具有检测灵敏度高、可靠性好、成本低、适合推广使用的优点。 附图说明 下面结合附图和
