技术摘要：
本发明提供了一种核酸提取试纸条及其使用方法，属于分子生物学检测技术领域；所述核酸提取试纸条包括手持区和核酸结合区；所述核酸提取试纸条以带有不干胶薄膜的PVC底板为主体；PVC底板的一端粘附有纤维素滤纸，为核酸结合区；PVC底板上未粘附纤维素滤纸的区域为手持区  全部
背景技术：
生物样本的分子检测，一般先提取生物样本中的基因组，然后根据所需  检测的目 的基因设计上下游引物并利用PCR技术扩增目的基因。PCR检测  首先需要提取样本中的 DNA。目前实验室常用的DNA提取方法包括TPS  提取法、CTAB提取法以及SDS提取法等。以上 DNA提取方法需要用到水  浴锅、离心机、移液器等实验设备以及氯仿、异丙醇、乙醇等有机 试剂。提  取过程操作繁琐，难度系数较高，耗时较长；同时，有机试剂会对操作者的  身体健 康造成危害。目前需要一种操作简便、提取时间短的核酸提取方法。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种核酸提取试纸条及其使用方法，利用本发明  的核酸 提取试纸条，提取时间短且操作简便。 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案： 本发明提供了一种核酸提取试纸条，包括手持区和核酸结合区；所述核  酸提取试 纸条以带有不干胶薄膜的PVC底板为主体；PVC底板的一端粘附  有纤维素滤纸，为核酸结合 区；PVC底板上未粘附纤维素滤纸的区域为手持 区。 优选的，所述PVC底板的长×宽为：42～46mm×2mm；所述纤维素滤纸 的长×宽为： 3.8～4.2mm×2mm。 本发明提供了上述方案所述核酸提取试纸条的使用方法，包括以下步  骤： 1)将生物样品加入到核酸提取液中，得到混合液，对所述混合液研磨  8～15s，得 到核酸粗提液； 2)将上述方案所述核酸提取试纸条的核酸结合区浸入到步骤1)所述核  酸粗提液 中8～15s，得到第一试纸条； 3)将步骤2)所述第一试纸条浸入到洗脱液中3～8s，得到第二试纸条； 4)将步骤3)所述第二试纸条浸入到扩增体系中3～8s，释放提取到的  核酸，得到 完整扩增体系，进行扩增反应；所述扩增体系中缺少扩增模板。 优选的，步骤1)中所述核酸提取液包括以下摩尔浓度的组分：Tris  90～110mM、 KCl0.8～1.2M和EDTA8～12mM；所述核酸提取液的pH值为  7.8～8.2。 优选的，步骤1)中所述生物样品的质量和核酸提取液的体积的比例为  20mg：300μ L。 优选的，步骤3)中所述洗脱液包括以下浓度的组分：Tris9～11mM和  体积百分含 量为0.05％～0.15％的Tween-20。 优选的，步骤4)中所述扩增体系包括PCR扩增体系或LAMP扩增体  系。 3 CN 111549024 A 说　明　书 2/13 页 优选的，缺少扩增模板的LAMP扩增体系以24μL计，包括以下组分：  2×HNB  LAMP  Mix  12.5μL，10×LAMP  Primer  Mix  2.5μL，5M  Betain  3μL，  Bst2.0DNA  Polymerase  1μL 和ddH2O  4μL；扩增程序为：65℃，1h。 本发明的有益效果：本发明提供了一种核酸提取试纸条，所述核酸提取  试纸条包 括手持区和核酸结合区；所述核酸提取试纸条以带有不干胶薄膜的  PVC底板为主体；PVC底 板的一端粘附有纤维素滤纸，为核酸结合区；PVC  底板上未粘附纤维素滤纸的区域为手持 区(疏水端)。本发明的核酸提取试  纸条结构简单，使用过程中不需要复杂仪器。利用本发 明的核酸提取试纸条 能在25～50s内对生物样本中的核酸进行快速提取纯化，并基于该核 酸提取  试纸条，运用PCR、LAMP扩增技术对生物样品进行快速的分子检测技术。  相较于常 用的DNA提取方法，本发明的核酸提取试纸条能够节省大量的时  间和资金，能够广泛地应 用于未来的生物样品的现场分子检测上，推动了分  子检测走出实验室迈入市场的进程。 附图说明 图1-A为核酸提取试纸条的结构示意图；图1-A中的1为手持区  示意图，2为结合区 示意图； 图1-B为核酸提取试纸条的结构剖视示意图；图1-B中的1为手持区示  意图，2为结 合区示意图，3为PVC材质的底板，4为纤维素滤纸； 图2为本发明利用核酸提取试纸条对生物样品进行分子鉴定的流程图； 图3-A为实施例1中核酸提取试纸条的实物图，手持区域采用PVC底  板，规格为 44mm×2mm；DNA结合区域采用纤维素滤纸，规格为4mm×2mm； 图3-B为实施例1中核酸提取试纸条产品图；每只桶装有200条核酸提 取试纸条； 图4-A为实施例2中用川贝母特异性鉴定引物对样品的鉴定结果，浙贝  母超微粉 的占比分别为25％、20％、15％、10％、5％；C表示颜色对照(不  加酶以及模板DNA)；B表示空 白对照(无菌水作为模板DNA)；NZ表示阴  性对照(模板DNA为核酸提取试纸条纯化的浙贝母 超微粉的DNA)；1～5  分别表示5份混有浙贝母超微粉的川贝母超微粉样品的鉴定结果，浙 贝母超 微粉的占比分别为25％、20％、15％、10％、5％； 图4-B为实施例2中用浙贝母特异性鉴定引物对样品的鉴定结果；图4-B  中的C表 示颜色对照(不加酶以及模板DNA)；B表示空白对照(无菌水作  为模板DNA)；NC表示阴性对 照(模板DNA为核酸提取试纸条提取纯化的  川贝母超微粉的DNA)；1～5分别表示5份混有浙 贝母超微粉的川贝母超微  粉样品的鉴定结果，浙贝母超微粉的占比分别为25％、20％、 15％、10％、  5％； 图5是实施例3中利用核酸提取试纸条对转基因材料的外源基因的鉴定  结果；序 号1～8分别对应表3中的6种外源基因的扩增结果。M表示DL2000 的marker；P表示用核酸提 取试纸条提取纯化的转基因材料的DNA并进行  扩增的结果； 表示阳性对照(模板DNA为 10ng/μL的相对应的转基因材  料的基因组)；－表示阴性对照(模板DNA为相对应的非转基 因材料的基因 组)； 图6-A是实施例4中用提取试纸条转移的浓度为100ng/μL、10ng/μL、  1ng/μL、 0.1ng/μL、0.01ng/μL的DNA的PCR产物的凝胶电泳结果；序号  1～8分别对应表2中的6种外 源基因的扩增结果；M表示DL2000的marker；  B表示空白对照(模板DNA为无菌水)；N表示阴 4 CN 111549024 A 说　明　书 3/13 页 性对照(模板DNA为相  对应的非转基因材料的基因组)； 图6-B是实施例4中用移液枪转移的浓度为100ng/μL、10ng/μL、1  ng/μL、0.1ng/μ L、0.01ng/μL的DNA的PCR产物的凝胶电泳结果；序号  1～8分别对应表2中的6种外源基因的 扩增结果；M表示DL2000的marker；  B表示空白对照(模板DNA为无菌水)；N表示阴性对照(模 板DNA为相  对应的非转基因材料的基因组)； 图7为实施例5中核酸提取试纸条能够提取纯化较长的DNA的检测结 果； 图8中的A图是实施例6中R2期转基因大豆的根、茎、叶、花、种子 中g10-3序列的扩 增结果(g10-3是基因g10-epsps的一段序列)；M表示1000  bp的marker； 表示阳性对照(相 对应的组织的基因组，浓度为10ng/μL)；  P1～P3表示各个组织用核酸提取试纸条提取的 DNA的三次重复的扩增结果；  B表示空白对照(模板DNA为无菌水)，－表示阴性对照(模板 DNA用非 转基因大豆：华春三号的基因组)； 图8中的B图是实施例6中基因ACTIN部分片段的扩增结果；M表示  1000bp的 marker； 表示阳性对照(相对应的组织的基因组，浓度为10  ng/μL)；P1～P3表示各个组织 用核酸提取试纸条提取的DNA的三次重复的  扩增结果；B表示空白对照(模板DNA为无菌 水)，－表示阴性对照(模板  DNA用非转基因大豆：华春三号的基因组)； 图9为实施例7中核酸提取试纸条与LAMP技术相结合对转基因大豆各  组织进行分 子鉴定的结果；C表示颜色对照(不加酶以及模板DNA)；B表  示空白对照(模板DNA为无菌 水)；N表示阴性对照(模板DNA为核酸提  取试纸条提取纯化的华春大豆叶片的基因组)；R、 S、L、F、G分别表示转  基因大豆ZUTS-33的五个组织：根、茎、叶、花、种子；阳性扩增样品的  颜色为天蓝色，阴性扩增样品的颜色为紫罗兰。