技术摘要：
本发明公开了一种高效液相色谱法快速测定小麦粉及其添加剂中非食用物质三聚硫氰酸三钠盐的方法，样品中总三聚硫氰酸三钠盐用乙腈‑甲酸/甲酸铵缓冲溶液体系涡旋超声提取，以甲醇‑酸化醋酸铵为流动相梯度洗脱，Atlantis T3色谱柱进行分离，二极管阵列检测器检测，外标  全部
背景技术：
三聚硫氰酸三钠盐，又名三巯基均三嗪三钠盐，1,3,5-三嗪-2,4,6(1H,3H,5H)-三 硫醇三钠盐等，是一种纯白色结晶体，分子式为C3N3S3Na3，分子量为243.22，极易溶于水。三 聚硫氰酸三钠盐（TMT）是重金属离子去除剂，多年来一直用于含重金属离子的工业废水处 理。TMT最早由德固赛公司生产，能与水溶液中大多数一价和二价重金属离子，如Cu2 、Pd2 、 Hg2 、Zn2 、Ni2 、Ti2 、Cd2 等离子形成稳定的化合物而沉淀出来，从而达到去除重金属离子 的目的。尤其对传统碱中和方法不能处理的重金属离子具有很好的去除效果。随着工业废 水的大量排放，重金属污染的日益加剧，TMT在含重金属废水处理工业中得到广泛的应用。 小麦粉作为我国大宗消费食品，其质量一直是食品安全关注的重点，对于小麦粉中毒素、漂 白剂及重金属残留等常规监测项目不放松的同时，对于其他风险项目也一直在进行。最近 有检测到小麦粉中含有非食用物质TMT，引起了研究者的强烈关注。TMT的引入是污水处理 带来的二次污染引起，还是不发分子非法添加还不明确。食品中残留TMT这种化工产品，为 非食用物质，带了较严重的食品安全隐患。加强小麦粉及其相关产品中TMT的监测亟需开 展，建立检测方法是首要任务。 对TMT的检测研究极少，小麦粉及其处理剂中的研究目前未见报道。目前调研的文 献有三聚硫氰酸三钠盐药剂含量测定，分别利用酸碱滴定法和紫外分光光度计方法对其含 量进行测定。还有报道，利用高效液相色谱法对三聚硫氰酸作为橡胶助剂的检测，添加离子 对试剂增加其保留的反相色谱分离，该方法只是标准品的分析，不涉及前处理。高效液相色 谱法具有普及率高、定量准确、兼容性好等特点，对于有紫外吸收的化合物是常用检测手 段。三巯基均三嗪三钠根据溶液pH的不同，以4种形式存在：C N S 3（- pH≥12.5）、HC N 2（-3 3 3 3 3 pH= 8~10）、H2C3N3S（ - pH=5 8）、H 0~ 3C3N3S3（pH<5）。存在形式的复杂增加了对其提取的困难，如何将 不同形式的TMT都提取出来是我们研究的重点。小麦粉主要含有淀粉、糖、蛋白等成分，基质 已有较多研究。面粉处理剂（改良剂），能够改善国产面粉的品质，有面粉漂白剂、面团改良 剂和营养强化剂等。面粉处理剂成分较复杂，有碳酸钙、维生素C及各种酶制剂。基质简单的 面粉处理剂提取净化也较容易，而以食用玉米淀粉、淀粉酶等复合酶等基质为主的添加剂， 基质较复杂，遇水易成胶状不适于很多溶剂，给提取带来较大难度。如何兼顾TMT各种形式 的提取效率和基质的分散性是研究的关键。
技术实现要素：
本研究对小麦粉及其处理剂经乙腈-甲酸/甲酸铵缓冲溶液提取，以乙腈-酸化醋 酸铵为流动相梯度洗脱，Atlantis  T3色谱柱进行分离，二极管阵列检测器检测，外标法定 3 CN 111721864 A 说　明　书 2/8 页 量，建立了检测小麦粉及其处理剂中总三聚硫氰酸三钠盐的快速检测方法。优化的乙腈-甲 酸/甲酸铵缓冲溶液提取溶剂不仅有效的提取TMT的各种形式，还能很好的分散各种类型的 面粉处理剂。该方法简便快捷，灵敏度高，重现性好，检测效率高，特别适合小麦粉及其处理 剂中总三聚硫氰酸三钠盐的定性、定量检测。 本发明是通过以下技术方案实现的： 一种高效液相色谱法测定小麦粉及其添加剂中三聚硫氰酸三钠盐的方法，包括以下步 骤： （1）样品前处理：称取均匀样品于聚丙烯具塞离心管中，加入提取液乙腈-甲酸/甲酸铵 缓冲溶液，涡旋1  min，超声15  min，8000  r/min离心5  min，提取液过PTFE滤膜，得预处理样 品； （2）标准溶液的配制：准确称取10  mgTMT标准物质，用甲醇溶于10mL棕色容量瓶中，定 容至刻度，配制成浓度为1  mg/mL的标准储备液，0℃-4℃避光保存，移取标准储备液用乙 腈-甲酸/甲酸铵溶液稀释，得到标准工作液，0℃-4℃避光保存； （3）测定：试样用高效液相色谱进行检测分析计算。 优选地，所述的甲酸/甲酸铵缓冲溶液的pH为2.5-3，浓度为10-500  mmol/L。 更优选地，所述的甲酸/甲酸铵缓冲溶液的pH为2.5，浓度为100  mmol/L。 优选地，所述的提取液的加入量为：1  g样品中的加入20mL乙腈-甲酸/甲酸铵缓冲 溶液（体积比8:2）。 上述所述的高效液相色谱条件为： 色谱柱：Atlantis  T3  250  mm×4.6  mm,  5  µm；流动相: 甲醇(A)  和10  mmol/L  醋酸 铵缓冲溶液（pH4.0）(B)；梯度洗脱程序:  0~9.0  min:  30%保持；9.0~10:  30%~90%；10.0~ 15.0  min:  90%保持；15.0~16.0min:  90%~30%；16.0~25  min:  30%保持；检测波长：296  nm； 流速：1.0  mL/min；柱温：35℃；进样量：10  µL。 有益效果 本文首次建立了适用于小麦粉及其处理剂中TMT总量的测定方法。方法详细优化了影 响提取效率的几个因素，克服了基质复杂的面粉处理剂的特殊性和TMT存在形式的多样性 带来的提取效率低的难题，通过乙腈-甲酸/甲酸铵缓冲体系，结合定性定量准确的高效液 相色谱法，实现了不同面粉及其处理剂中TMT总量的检测方法。该方法样品前处理简便快 速，定性、定量准确，可满足小麦粉及其添加剂中非食用物质三聚硫氰酸钠盐总量的快速检 测，对于加强小麦粉质量控制提供技术支持。 附图说明 图1  Xbrige  C18柱分离小麦粉（a1）和面粉改良剂（a2）中TMT与干扰峰的色谱图； 图2不同色谱条件对TMT及杂质的分离效果图；a1：甲醇-酸化醋酸铵(10M,pH4.0)分离 小麦粉中TMT及杂质的色谱图；a2：甲醇-酸化醋酸铵(10M,pH4.0)分离面粉改良剂中TMT及 杂质的色谱图；a3：标准溶液中TMT色谱图；b1：甲醇-酸化醋酸铵(10M,pH5.0)分离小麦粉中 TMT及杂质的色谱图；b2：甲醇-酸化醋酸铵(10M,pH5.0)分离面粉改良剂中TMT及杂质的色 谱图；c1：甲醇-酸化醋酸铵(10M,pH6.1)分离小麦粉中TMT及杂质的色谱图；c2：甲醇-酸化 醋酸铵(10M,pH6.1)分离面粉改良剂中TMT及杂质的色谱图。 4 CN 111721864 A 说　明　书 3/8 页 图3不同pH条件下TMT的光谱图； 图  4不同影响因素对TMT提取效率的影响： 图5不同取样量对TMT提取效率比较。