技术摘要：
本发明涉及牡丹EST‑SSR引物组及其应用，属于基因工程技术领域，本发明从牡丹转录组EST‑SSR标记开发与引物筛选角度，筛选得到扩增稳定、多态性高的20对引物，采用所述20对引物，可对牡丹品种进行亲缘关系分析，为后续学者筛选更多的牡丹SSR位点提供了思路，为开展牡丹 全部
背景技术：
牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)隶属于芍药科、芍药属，为多年生落叶灌木。 因品种繁多，花冠硕大，花姿优美，色泽鲜艳，色味芳香，富丽堂皇，雍容华贵，具有很大的欣 赏价值，深受各族人民的喜爱。 SSR(Simple Sequence Repeats)标记又称微卫星DNA，由几个核苷酸(一般为1～6 个)的重复单位组成，总的串联重复序列可长达几十个核苷酸。SSR标记具有高度重复性与 可靠性、丰富的多态性、共显性等优点。在微卫星位点克隆和测序分析方面，传统的SSR分子 标记费时、费力和代价昂贵，一般很难实现的，因此限制了它的广泛应用。从目前来看，伴随 测序技术的发展，公共数据库中来源于不同物种的基因表达序列(expressed sequence tag，EST)的数目在快速增长。这些EST序列不仅在新基因发掘方面占有一席之地，而且为 SSR标记开发提供了一个巨大的、有价值的来源，这种基于EST序列开发的SSR称为EST-SSR 标记。 高通量测序技术的发展，为分子标记技术的迅速发展提供了有利条件，目前EST- SSR标记已被应用于性状定位，植物分类，品种鉴定，系统进化，遗传多样性分析，比较基因 组学方面，使得转录组EST-SSR标记开发在腊梅，杉木，棉花，文冠果，双须骨舌鱼，红松等植 物种属中均有开发应用。牡丹作为一种备受瞩目的植物，对其的研究也受到了各界学者的 青睐，寻找适用于牡丹品种相关遗传学研究的引物，是进一步开展牡丹种质资源管理、遗传 保护等研究的前提基础。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明的目的一在于提供牡丹EST-SSR引物组，目的二在于提供所 述引物组在牡丹品种遗传分析中的应用。本发明所提供的筛选引物扩增稳定，多态性高。 为了实现上述目的，本发明采用的具体方案为： 牡丹EST-SSR引物组，所述引物组包括20对引物，分别为如SEQ ID NO：1～2的 PS002、如SEQ ID NO：3～4的PS019、如SEQ ID NO：5～6的PS021、如SEQ ID NO：7～8的 PS030、如SEQ ID NO：9～10的PS031、如SEQ ID NO：11～12的PS034、如SEQ ID NO：13～14的 PS038、如SEQ ID NO：15～16的PS042、如SEQ ID NO：17～18的PS046、如SEQ ID NO：19～20 的PS057、如SEQ ID NO：21～22的PS061、如SEQ ID NO：23～24的PS062、如SEQ ID NO：25～ 26的PS070、如SEQ ID NO：27～28的PS071、如SEQ ID NO：29～30的PS074、如SEQ ID NO：31 ～32的PS075、如SEQ ID NO：33～34的PS085、如SEQ ID NO：35～36的PS086、如SEQ ID NO： 37～38的PS092和如SEQ ID NO：39～40的PS096。 本发明还请求保护所述引物组在牡丹品种亲缘关系分析中的应用。 进一步地，所述应用是指利用所述引物组进行牡丹品种的亲缘关系分析，所述分 3 CN 111733279 A 说 明 书 2/12 页 析方法包括以下步骤： (1)、提取待分析牡丹样本的基因组DNA； (2)分别采用所述20对引物对步骤(1)提取的基因组DNA进行扩增并进行凝胶电泳 分析； (3)通过牡丹样本的聚类树状图进行亲缘关系分析。 更进一步地，所述牡丹的品种包括：满江红、李园红、花王、乌龙捧盛、晨红、冠世墨 玉、奇花献影、世世之誉、满堂红、春红娇艳、夜光杯、烟绒紫、徽紫、川后同丹、魏紫、雪峰、墨 池手辉、杏花春雨、三变赛玉和宝康紫玟玉。 有益效果： 本发明从牡丹转录组EST-SSR标记开发与引物筛选角度，筛选得到扩增稳定、多态 性高的20对引物，采用所述20对引物，可对牡丹品种进行亲缘关系分析，为后续学者筛选更 多的牡丹SSR位点提供了思路，为开展牡丹种质资源管理，遗传保护及选育、分析牡丹的遗 传多样性等奠定基础。 附图说明 图1是不同串联重复单元类型的SSR在总SSR中所占比例的统计图； 图2～21是分别采用引物PS002、PS019、PS021、PS030、PS031、PS034、PS038、PS042、 PS046、PS057、PS061、PS062、PS070、PS071、PS074、PS075、PS085、PS086、PS092和PS096扩增 20种牡丹DNA的SSR凝胶电泳图； 图22是20种牡丹样本的聚类树状图； 图2～22中1～20号牡丹样本分别为：1：满江红；2：李园红；3：花王；4：乌龙捧盛；5： 晨红；6：冠世墨玉；7：奇花献影；8：世世之誉；9：满堂红；10：春红娇艳；11：夜光杯；12：烟绒 紫；13：徽紫；14：川后同丹；15：魏紫；16：雪峰；17：墨池手辉；18：杏花春雨；19：三变赛玉； 20：宝康紫玟玉。
