技术摘要：
提供一种能够增加源自血液的对象试样中含有的蛋白质的鉴定数量的蛋白质鉴定方法。将源自血液的对象试样中含有的蛋白质进行片段化，并且将与对象试样相比蛋白质的量比的失衡少的添加试样中含有的蛋白质进行片段化，将它们混合(步骤S101～S103)。由此，生成与对象试样相  全部
背景技术：
在进行蛋白质的详尽的解析的蛋白质组解析领域中，有时通过液相色谱仪将试样 中的各成分进行分离，对分离出的各成分依次进行MS/MS测定，由此基于得到的MS/MS谱来 鉴定各成分(例如参照下述专利文献1)。在该情况下，通过胰蛋白酶等消化酶来消化蛋白质 试样，对得到的肽片段的混合物(肽混合物)进行测定。 如上述那样的解析方法作为使用了质谱分析的被称为蛋白质全谱解析的方法而 被公知。具体地说，将通过液相色谱仪分离出的各成分进行离子化，对该离子化后的各成分 进行质谱分析，由此测定MS谱(MS测定)。然后，从所得到的MS谱的数据中选择强度强的峰， 使与该峰对应的离子(前体离子)断裂并进行质谱分析，由此测定MS/MS谱(MS/MS测定)。通 过使用像这样得到的MS/MS谱进行数据库检索，能够进行肽序列的鉴定以及蛋白质的鉴定。 现有技术文献 专利文献 专利文献1：日本特开2015-148461号公报
技术实现要素：
发明要解决的问题 在如上述那样的蛋白质全谱解析中，由于对通过液相色谱仪分离后送来的各成分 依次进行质谱分析，因此需要在比较短的时间间隔(例如几秒左右)的期间内反复进行MS/ MS测定。因此，能够作为前体离子选择的离子的数量是有限的，难以选择源自试样中含有的 所有蛋白质的峰来进行MS/MS测定。 特别是在试样中含有的多种蛋白质的量比存在失衡的情况下，优先选择源自大量 地含有的蛋白质的峰，将与这些峰对应的离子作为前体离子进行MS/MS测定。在该情况下， 难以选择源自少量的蛋白质的峰，有时无法获得与对应于这些峰的离子有关的MS/MS谱。 例如源自血液的试样具有大量地含有部分种类的蛋白质(例如白蛋白)的特性。在 对这样的源自血液的试样进行蛋白质全谱解析的情况下，由于优先选择源自试样中大量地 含有的蛋白质的峰来进行MS/MS测定，因此存在漏取与源自其它少量蛋白质的峰有关的MS/ MS谱的问题。 因此，用于去除血液试样中大量地含有的蛋白质的试剂盒/柱(例如安捷伦科技 (Agilent  Technologies)公司的“Multiple  Affinity  Removal  Column  Human  14”)等也 在市场上出售。但是，即使使用了这样的试剂盒/柱，蛋白质的去除效率也差，或者去除主要 蛋白质后残留的蛋白质的浓度也有失衡，因此现状是还没有完全解决问题。 本发明是鉴于上述实际情况而完成的，其目的在于提供一种能够增加源自血液的 3 CN 111587373 A 说　明　书 2/6 页 对象试样中含有的蛋白质的鉴定数量的蛋白质鉴定方法。 用于解决问题的方案 本发明所涉及的蛋白质鉴定方法包括第一预处理步骤、第二预处理步骤、混合步 骤、分离步骤、MS测定步骤、MS/MS测定步骤以及鉴定步骤。在所述第一预处理步骤中，对含 有多种蛋白质的源自血液的对象试样进行蛋白质的片段化和标记化。在所述第二预处理步 骤中，对添加试样进行蛋白质的片段化和标记化，该添加试样含有多种蛋白质且与所述对 象试样相比蛋白质的量比的失衡少。在所述混合步骤中，通过在进行所述第一预处理步骤 后的对象试样中混合进行所述第二预处理步骤后的添加试样，来生成混合试样。在所述分 离步骤中，利用液相色谱仪分离所述混合试样中含有的成分。在所述MS测定步骤中，将分离 出的所述混合试样的各成分进行离子化并对该离子化后的各成分进行质谱分析，由此测定 MS谱。在所述MS/MS测定步骤中，使基于所述MS谱选择出的前体离子断裂并进行质谱分析， 由此测定MS/MS谱。在所述鉴定步骤中，基于所述MS/MS谱来鉴定对象试样中含有的蛋白质。 根据这样的结构，将源自血液的对象试样中含有的蛋白质进行片段化，并且将与 对象试样相比蛋白质的量比的失衡少的添加试样中含有的蛋白质进行片段化，将它们混 合。由此，能够生成与对象试样相比降低了蛋白质的量比的失衡的混合试样。因而，通过使 用所生成的混合试样进行MS/MS测定，能够防止针对对象试样中含有的少量的蛋白质漏取 源自该蛋白质的峰的MS/MS谱，因此能够增加源自血液的对象试样中含有的蛋白质的鉴定 数量。 另外，源自血液的对象试样和要混合于对象试样的添加试样均在被进行了标记化 之后进行混合。由此，能够明确地区分源自对象试样的蛋白质和源自添加试样的蛋白质，因 此能够仅对源自血液的对象试样中含有的蛋白质可靠地进行鉴定。 所述添加试样也可以是通过施加刺激使蛋白质的量比发生了变化的试样。 根据这样的结构，将通过施加刺激使蛋白质的量比发生了变化的添加试样混合到 源自血液的对象试样中，使用所生成的混合试样进行MS/MS测定，由此能够鉴定因刺激而增 加的蛋白质。 所述添加试样也可以是源自细胞或源自组织的试样。 根据这样的结构，通过将与源自血液的对象试样相比蛋白质的量比的失衡少的源 自细胞或源自组织的试样用作添加试样，能够良好地增加源自血液的对象试样中含有的蛋 白质的鉴定数量。 发明的效果 根据本发明，能够生成与对象试样相比降低了蛋白质的量比的失衡的混合试样， 因此通过使用所生成的混合试样进行MS/MS测定，能够增加源自血液的对象试样中含有的 蛋白质的鉴定数量。 附图说明 图1是示出在进行本发明的一个实施方式所涉及的蛋白质鉴定方法时使用的分析 装置的结构例的框图。 图2A是概念性地示出对象试样中含有的多种蛋白质与存在量的关系的图。 图2B是概念性地示出添加试样中含有的多种蛋白质与存在量的关系的图。 4 CN 111587373 A 说　明　书 3/6 页 图2C是概念性地示出混合试样中含有的多种蛋白质与存在量的关系的图。 图3是示出本发明的一个实施方式所涉及的蛋白质鉴定方法的一例的流程图。 图4A是示出仅使用作为对象试样的血浆进行蛋白质的鉴定时的过程的流程的图。 图4B是示出在作为对象试样的血浆中混合作为添加试样的Hela细胞并进行了蛋 白质的鉴定时的过程的流程的图。