技术摘要：
本发明公开了一种激活红细胞中γ珠蛋白基因表达的方法，公开了转录因子ERF及其相关元件在提高红细胞中γ珠蛋白基因HBG表达中的应用。通过对造血干细胞中转录因子ERF基因启动子区域的胞嘧啶脱氧核糖核苷酸位点甲基化修饰、敲除HBG2上游ERF的结合位点或者敲除HBG1下游ERF 全部
背景技术：
β-地中海贫血(thalassemia，简称β-地贫)是世界上最常见的孟德尔遗传病之一， 其特征是基因突变使组成血红蛋白的β-珠蛋白肽链合成减少(或缺乏)，导致严重致死性溶 血病。β-地贫患儿出生后二周岁内发病，需终生输血治疗，而不接受输血等治疗的患儿期望 寿命5岁，严重影响到生命质量。β-地贫的表型特征之一是α-与非α-珠蛋白链(含β-、γ-和 δ-链)的比例失衡，由于β-地贫的主要病因是β-珠蛋白基因突变使β珠蛋白合成下降，必然 会造成Hb四聚体(HbA:α2β2)合成中α-珠蛋白链的过剩，即α-与非α-珠蛋白链比例增高，这 是导致β-地贫红细胞损伤及一系列红系造血病理变化的基础。现有技术中，学者致力于通 过降低α与非α-珠蛋白链比例或改善α-与非α-珠蛋白链比例失衡状态从而缓解β-地贫病情 的治疗方案。 自上世纪50年代以来，虽然本发明已经深入了解人体Hb三个不同发育阶段(胚胎、 胎儿和成人)的β类珠蛋白链合成的成分和表达规律，如组成HbF的γ-链在胎儿出生时段会 迅速下降(γ-链合成关闭)，代之以成人血红蛋白(adult hemoglobin，HbA)的β-链快速合 成(β-链合成打开)。近年来通过GWAS、遗传家系和基因功能研究，首先发现了调节这一“转 换开关”效应的关键基因BCL11A，随后又逐步阐明了参与这一代谢途径调节的二个重要基 因—MYB和KLF1,这三个基因作为这一事件的主要遗传因素已被迅速应用于临床作为β-地 贫精确诊断的评价指标。新靶点特别是BCL11A是借助DNA Editing等技术用于β-地贫干细 胞/基因治疗潜在的重要应用靶点。现有技术中，重新激活γ珠蛋白的表达主要以BCL11A、 MYB和KLF1作为靶点，对靶点进行修饰或编辑来实现。 因此，寻求一种新的β-地贫干细胞/基因治疗潜在的重要应用靶点成为亟需解决 的问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供造血干细胞中转录因子ERF基因启动子区域的胞嘧啶脱氧 核糖核苷酸、HBG2上游或HBG1下游的结合位点的应用。 本发明的另一目的提供一种激活红细胞中γ珠蛋白基因(HBG)表达的方法。 现有技术中，未有HBG和ERF之间的作用关系的报道，本发明首次发现ERF可以调节 HBF的表达，并且探讨了其作用机理，即通过对其启动子甲基化的方式进行调节。为此，本发 明研究了ERF的作用靶点，对UEBS和DEBS这两个靶点分别进行了敲除处理，证实同样可以调 节HGB表达。 通过对造血干细胞中转录因子ERF(ETS2-repressor factor)基因启动子区域进 行甲基化修饰和/或对转录因子ERF在HBG2上游和/或HBG1下游的结合位点进行基因编辑， 3 CN 111575306 A 说 明 书 2/9 页 激活HBG的表达，提高HbF的含量，以解决上述
本发明公开了一种激活红细胞中γ珠蛋白基因表达的方法，公开了转录因子ERF及其相关元件在提高红细胞中γ珠蛋白基因HBG表达中的应用。通过对造血干细胞中转录因子ERF基因启动子区域的胞嘧啶脱氧核糖核苷酸位点甲基化修饰、敲除HBG2上游ERF的结合位点或者敲除HBG1下游ERF 全部
背景技术：
β-地中海贫血(thalassemia，简称β-地贫)是世界上最常见的孟德尔遗传病之一， 其特征是基因突变使组成血红蛋白的β-珠蛋白肽链合成减少(或缺乏)，导致严重致死性溶 血病。β-地贫患儿出生后二周岁内发病，需终生输血治疗，而不接受输血等治疗的患儿期望 寿命5岁，严重影响到生命质量。β-地贫的表型特征之一是α-与非α-珠蛋白链(含β-、γ-和 δ-链)的比例失衡，由于β-地贫的主要病因是β-珠蛋白基因突变使β珠蛋白合成下降，必然 会造成Hb四聚体(HbA:α2β2)合成中α-珠蛋白链的过剩，即α-与非α-珠蛋白链比例增高，这 是导致β-地贫红细胞损伤及一系列红系造血病理变化的基础。现有技术中，学者致力于通 过降低α与非α-珠蛋白链比例或改善α-与非α-珠蛋白链比例失衡状态从而缓解β-地贫病情 的治疗方案。 自上世纪50年代以来，虽然本发明已经深入了解人体Hb三个不同发育阶段(胚胎、 胎儿和成人)的β类珠蛋白链合成的成分和表达规律，如组成HbF的γ-链在胎儿出生时段会 迅速下降(γ-链合成关闭)，代之以成人血红蛋白(adult hemoglobin，HbA)的β-链快速合 成(β-链合成打开)。近年来通过GWAS、遗传家系和基因功能研究，首先发现了调节这一“转 换开关”效应的关键基因BCL11A，随后又逐步阐明了参与这一代谢途径调节的二个重要基 因—MYB和KLF1,这三个基因作为这一事件的主要遗传因素已被迅速应用于临床作为β-地 贫精确诊断的评价指标。新靶点特别是BCL11A是借助DNA Editing等技术用于β-地贫干细 胞/基因治疗潜在的重要应用靶点。现有技术中，重新激活γ珠蛋白的表达主要以BCL11A、 MYB和KLF1作为靶点，对靶点进行修饰或编辑来实现。 因此，寻求一种新的β-地贫干细胞/基因治疗潜在的重要应用靶点成为亟需解决 的问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供造血干细胞中转录因子ERF基因启动子区域的胞嘧啶脱氧 核糖核苷酸、HBG2上游或HBG1下游的结合位点的应用。 本发明的另一目的提供一种激活红细胞中γ珠蛋白基因(HBG)表达的方法。 现有技术中，未有HBG和ERF之间的作用关系的报道，本发明首次发现ERF可以调节 HBF的表达，并且探讨了其作用机理，即通过对其启动子甲基化的方式进行调节。为此，本发 明研究了ERF的作用靶点，对UEBS和DEBS这两个靶点分别进行了敲除处理，证实同样可以调 节HGB表达。 通过对造血干细胞中转录因子ERF(ETS2-repressor factor)基因启动子区域进 行甲基化修饰和/或对转录因子ERF在HBG2上游和/或HBG1下游的结合位点进行基因编辑， 3 CN 111575306 A 说 明 书 2/9 页 激活HBG的表达，提高HbF的含量，以解决上述
