技术摘要：
本发明涉及免疫学和抗体制备技术领域，尤其涉及一种抗人新型冠状病毒肺炎的抗体及其制备方法。该抗体是通过用新冠肺炎病毒灭活疫苗免疫健康禽类动物，当被免疫的所述禽类动物血清或卵黄内抗新冠肺炎抗体滴度达到要求时，收集血清或卵黄中的水溶性组分，纯化后得到。所 全部
背景技术：
新型冠状病毒肺炎(COVID-19，中文简称：新冠肺炎)的病原体 SARS-COV-2，和 SARS、MARS是不同的冠状病毒，虽然患者病症有相近之 处但也有明显区别，各自的疫苗也 不相同，其抗体之间也没有交叉保护作用。 SARS-COV-2相比SARS和MARS而言，其毒力稍弱 一些，但其空间传播能力 却更强。研究发现SARS-COV-2主流行L亚型和S亚型毒株，其中L亚 型病毒 的毒力强于S亚型，但S亚型病毒抗失活能力更强，更容易在长距离上传播。 在实际 工作中，医务工作者和研究人员发现，无症状感染者(没有出现发烧、 干咳等眼观症状)或 者眼观症状不明显不就医的新型冠状病毒携带者在感染人 群中占比比较高，所以有专家 预计，此病可能会在全球人群中长期存在，甚至 持续传染十几年，年均感染能达到全球5％ 人口，直到达到全球人口的70％左 右即近50亿人感染后，才有可能被控制。如不尽快加以 阻止，此病有可能最后 成为人群中的背景性存在的疾病，所以非常急需研究和开发相关疫 苗和对抗药 物。 在对抗新冠病毒的药物中，抗新冠病毒(多克隆)抗体是效果最快也是效 果最好 的，比推荐用西药瑞德西韦和硫酸羟氯喹效果要好，单方中药及其复方 中药并不能在病毒 的细胞水平保护试验、确定靶向位点试验或阻抗病毒某个复 制步骤中给出明确有效的结 果，所以大多数国家并不考虑使用。但是，由于康 复人血清不易获得，实际可获得的血清很 少，而且康复人血清中有可能仍含有 新冠肺炎病毒，需要进一步做病毒灭活或祛除工作， 所以安全的人源抗新冠肺 炎的血清抗体很珍贵，根本不能满足大量患者的需要。由于普通 人的血液不可 能被用于制备血清，与人相近的猿猴数量比较少，且猿猴常携带对人有很大 威 胁的病原体，并不适合大量使用，所以人源、猿猴类源抗新冠肺炎血清抗体即 便制备， 也根本不可能满足将来几百万、几千万甚至上亿人的紧急使用。
技术实现要素：
针对目前人源、猿猴类源抗新冠肺炎血清抗体无法满足实际需求的问题， 本发明 提供一种抗人新型冠状病毒肺炎的抗体。 以及，本发明提供一种抗人新型冠状病毒肺炎的制备方法。 为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下技术方案： 一种抗人新型冠状病毒肺炎的抗体，所述抗体是通过用新冠肺炎病毒灭活 疫苗 (包括水剂灭活苗和油乳剂灭活苗)免疫健康禽类动物，当被免疫的所述 禽类动物血清或 卵黄内抗新冠肺炎抗体的OD值比阳性对照抗体OD值大于0.2 时，收集血清或卵黄中的水溶 性组分，纯化后得到。 3 CN 111574622 A 说 明 书 2/7 页 抗新冠肺炎抗体的OD值比阳性对照抗体OD值即S/P值。本ELISA检测 体系中阳性 对照抗体OD值为1.8。 禽类动物来源丰富，血清抗体易得，雌性禽类动物的禽蛋产量也很大，且 价格低 廉。禽类动物不感染人新冠肺炎病毒，且抗体制备使用完全灭活疫苗， 不存在散毒的可能。 本专利申请通过使用新冠肺炎病毒灭活疫苗免疫禽类动物， 使禽类动物血液中产生抗新 冠肺炎抗血清，或使其产的禽蛋中产生抗新冠肺炎 卵黄抗体，该抗体不会产生耐药性，安 全有效，给药方式可根据临床需要选择 口服或注射。 新冠肺炎抗体可大量应用于早期、中期患者，抗体被吸收后，能够较快中 和体内 病毒，同时避免患者转为重症，患者机体在不进入重症的情况下就会有 能力和时间产生正 常的抗体免疫反应，一旦人个体自身的抗体产生，病毒就会 更容易清除并建立免疫记忆， 在很长时间甚至几年内对此种病毒产生免疫性对 抗能力。 新冠肺炎引起患者严重症状的原因主要来自两部分，一是病毒本身给机体 结成 损害，二是病毒引起的细胞因子风暴(炎性风暴)常造成大量正常功能细 胞功能下降、凋亡 甚至破裂死亡，从而使机体没有能力和时间产生抗体类免疫 反应，这是普通患者转向重症 以至于死亡的重要原因，如果在重症早期能及时 使用该抗新冠肺炎抗血清或卵黄抗体中 和新冠肺炎病毒，一般在几十小时后， 患者体内致死性的的细胞因子风暴就会因为感染源 的大幅减少或消失而大幅降 低，从而起到抢救生命的作用。 对于早期和中期患者，该抗新冠肺炎抗血清或卵黄抗体的应用，能够让被 感染人 群在早期中和病毒，避免其转为重症患者。对于携带病毒的无症状感染 者或潜伏期感染 者，该抗新冠肺炎抗血清或卵黄抗体能清除体内病毒。人群大 规模预防性使用抗体，能够 大幅降低感染率，减少感染人数，遏制病毒扩散， 减少隐性传播造成的疫情二次或多次爆 发，阻抗疫情发展，避免大面积跨市、 跨省、甚至跨国和跨洲传播。 该抗新冠肺炎抗血清或卵黄抗体还可与新冠肺炎疫苗配合使用，增强新冠 肺炎 的防控效果：一方面，在人免疫新冠疫苗前使用该抗体可以中和人体潜伏 的大部分新冠肺 炎病毒野毒株，减少疫苗免疫的应激和其中的活疫苗激发潜伏 野毒株的作用；另一方面， 当疫苗接种者体内抗体水平较低，不足以抵御病毒 入侵或病毒突破人体免疫屏障时，该抗 体的使用可以阻止野毒株大量复制，为 补种疫苗提供有效免疫时间和安全保障。 由于禽类动物价廉易得，而本方法操作简单易行，因此可大大降低获得抗 体的成 本，能够将患者昂贵治疗费用从几千元至上百万元降低到几元钱至几十 元，大大减轻目前 沉重的医疗负担，适合占人口大多数的普通民众的预防和治 疗。 即使随着病毒的自然或非自然变异而出现新的流行野毒株并影响到普通民 众 时，也可以应用本发明的方法，选取流行株制备疫苗给禽类动物多次免疫， 在一个半月内， 即可大量制备出抗血清或卵黄抗体。 优选地，所述新冠肺炎病毒灭活疫苗包括L亚型疫苗和S亚型疫苗中的至 少一种。 新冠肺炎病毒主流行株L亚型株和S亚型株可分别制成L亚型和S亚 型灭活疫苗，也可以直 接制备成L亚型 S亚型二价疫苗。 优选地，所述新冠肺炎病毒灭活疫苗中病毒含量≥105TCID50/mL。一般经过 四到 六次免疫即可使血清和卵黄中的抗体滴度达到预期要求。无论单价还是二 价疫苗，每羽份 新冠肺炎病毒灭活疫苗中病毒含量均应不小于105TCID50/mL。 4 CN 111574622 A 说 明 书 3/7 页 优选地，所述禽类动物为家禽。我国家禽数量几十亿只，来源丰富，血清 和禽蛋均 易于获得，成本低。可选用无特定病原体鸡(SPF鸡)或健康产蛋鸡 进行新冠肺炎灭活苗免 疫。当拟收集卵黄抗体时，优选产蛋高峰期蛋鸡进行免 疫。 以及，本发明实施例还提供了上述抗人新型冠状病毒肺炎的抗体的制备方 法，具 体包括如下操作： 用新冠肺炎病毒灭活疫苗免疫健康禽类动物，5～7天免疫一次，每次免疫 剂量为 0.5～1mL，对血清或卵黄中的抗新冠肺炎抗体以间接ELISA方法测定， 当血清内抗新冠肺 炎抗体的OD值比阳性对照抗体OD值大于0.2时，收集血 清，当卵黄内抗新冠肺炎抗体的OD 值比阳性对照抗体OD值大于0.2时，收 集卵黄中的水溶性组分，即得。 用本发明所提供的制备方法可在一个半月左右时间内得到大量抗新冠肺炎 抗血 清或抗新冠肺炎卵黄抗体。 优选地，所述制备方法还包括当血清内抗新冠肺炎抗体的OD值比阳性对 照抗体 OD值大于0.2或当卵黄内抗新冠肺炎抗体的OD值比阳性对照抗体OD 值大于0.2后，每15～ 20天用所述新冠肺炎病毒灭活疫苗加强免疫一次，以维 持高水平抗体。 优选地，所述收集血清的方法为：采集家禽血液，静置0.5～1小时，以 4000～ 8000rpm离心5～15分钟，抽取上清液，过滤，收集滤液，即得所述血 清。血液静置0.5～1小 时后，血液凝固，并在上层出现淡黄色液体，离心则是 对凝固血液、淡黄色液体以及二者之 间的成分共同离心。 优选地，所述收集卵黄中的水溶性组分的方法为：收集卵黄，向所述卵黄 中加入3 ～5倍体积的纯净水，搅拌破乳，静置2～6个小时，收集上清液，过滤， 收集滤液，即得；所述 纯净水中含有破乳剂，促使卵黄破乳。滤液中即含有抗 新冠肺炎卵黄抗体。破乳剂可选择 医药标准的市售产品，如聚乙二醇6000、聚 氧乙烯聚氧丙烯等，用量为纯净水质量的1～ 3％。 优选地，所述过滤为采用孔径为0.22μm的滤膜过滤。 优选地，所述制备方法还包括将所述滤液在55～65℃浓缩成浓缩液。如， 可采用 低温真空浓缩罐进行浓缩，将所得滤液浓缩至原体积的1/3～1/4。浓缩后 的滤液便于进一 步加工为临床所需产品，如饮水剂、注射液等。 优选地，所述制备方法还包括将所述浓缩液进行干燥。干燥后可通过粉碎、 过筛 得到抗体粉末，收集得到的抗体粉末可以进一步制成片剂、胶囊、颗粒剂、 散剂和注射用无 菌粉末，便于临床应用。 优选地，所述干燥为高温离心喷雾干燥，干燥温度为155～165℃，离心喷 雾头转 速为8000～25000rpm。 优选地，所述干燥为冷冻干燥。冷冻干燥能够减少抗体在高温干燥过程中 造成的 损失，提高产品中有效抗体的含量。 优选地，所述干燥为低温离心真空喷雾，干燥温度为55～65℃，离心喷雾 头转速 为8000～25000rpm。该干燥方法中抗体损耗情况与冷冻干燥相近，对抗 体破坏较小，但生 产的时间成本和动力成本低于真空冻干。 5 CN 111574622 A 说 明 书 4/7 页
本发明涉及免疫学和抗体制备技术领域，尤其涉及一种抗人新型冠状病毒肺炎的抗体及其制备方法。该抗体是通过用新冠肺炎病毒灭活疫苗免疫健康禽类动物，当被免疫的所述禽类动物血清或卵黄内抗新冠肺炎抗体滴度达到要求时，收集血清或卵黄中的水溶性组分，纯化后得到。所 全部
背景技术：
新型冠状病毒肺炎(COVID-19，中文简称：新冠肺炎)的病原体 SARS-COV-2，和 SARS、MARS是不同的冠状病毒，虽然患者病症有相近之 处但也有明显区别，各自的疫苗也 不相同，其抗体之间也没有交叉保护作用。 SARS-COV-2相比SARS和MARS而言，其毒力稍弱 一些，但其空间传播能力 却更强。研究发现SARS-COV-2主流行L亚型和S亚型毒株，其中L亚 型病毒 的毒力强于S亚型，但S亚型病毒抗失活能力更强，更容易在长距离上传播。 在实际 工作中，医务工作者和研究人员发现，无症状感染者(没有出现发烧、 干咳等眼观症状)或 者眼观症状不明显不就医的新型冠状病毒携带者在感染人 群中占比比较高，所以有专家 预计，此病可能会在全球人群中长期存在，甚至 持续传染十几年，年均感染能达到全球5％ 人口，直到达到全球人口的70％左 右即近50亿人感染后，才有可能被控制。如不尽快加以 阻止，此病有可能最后 成为人群中的背景性存在的疾病，所以非常急需研究和开发相关疫 苗和对抗药 物。 在对抗新冠病毒的药物中，抗新冠病毒(多克隆)抗体是效果最快也是效 果最好 的，比推荐用西药瑞德西韦和硫酸羟氯喹效果要好，单方中药及其复方 中药并不能在病毒 的细胞水平保护试验、确定靶向位点试验或阻抗病毒某个复 制步骤中给出明确有效的结 果，所以大多数国家并不考虑使用。但是，由于康 复人血清不易获得，实际可获得的血清很 少，而且康复人血清中有可能仍含有 新冠肺炎病毒，需要进一步做病毒灭活或祛除工作， 所以安全的人源抗新冠肺 炎的血清抗体很珍贵，根本不能满足大量患者的需要。由于普通 人的血液不可 能被用于制备血清，与人相近的猿猴数量比较少，且猿猴常携带对人有很大 威 胁的病原体，并不适合大量使用，所以人源、猿猴类源抗新冠肺炎血清抗体即 便制备， 也根本不可能满足将来几百万、几千万甚至上亿人的紧急使用。
技术实现要素：
针对目前人源、猿猴类源抗新冠肺炎血清抗体无法满足实际需求的问题， 本发明 提供一种抗人新型冠状病毒肺炎的抗体。 以及，本发明提供一种抗人新型冠状病毒肺炎的制备方法。 为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下技术方案： 一种抗人新型冠状病毒肺炎的抗体，所述抗体是通过用新冠肺炎病毒灭活 疫苗 (包括水剂灭活苗和油乳剂灭活苗)免疫健康禽类动物，当被免疫的所述 禽类动物血清或 卵黄内抗新冠肺炎抗体的OD值比阳性对照抗体OD值大于0.2 时，收集血清或卵黄中的水溶 性组分，纯化后得到。 3 CN 111574622 A 说 明 书 2/7 页 抗新冠肺炎抗体的OD值比阳性对照抗体OD值即S/P值。本ELISA检测 体系中阳性 对照抗体OD值为1.8。 禽类动物来源丰富，血清抗体易得，雌性禽类动物的禽蛋产量也很大，且 价格低 廉。禽类动物不感染人新冠肺炎病毒，且抗体制备使用完全灭活疫苗， 不存在散毒的可能。 本专利申请通过使用新冠肺炎病毒灭活疫苗免疫禽类动物， 使禽类动物血液中产生抗新 冠肺炎抗血清，或使其产的禽蛋中产生抗新冠肺炎 卵黄抗体，该抗体不会产生耐药性，安 全有效，给药方式可根据临床需要选择 口服或注射。 新冠肺炎抗体可大量应用于早期、中期患者，抗体被吸收后，能够较快中 和体内 病毒，同时避免患者转为重症，患者机体在不进入重症的情况下就会有 能力和时间产生正 常的抗体免疫反应，一旦人个体自身的抗体产生，病毒就会 更容易清除并建立免疫记忆， 在很长时间甚至几年内对此种病毒产生免疫性对 抗能力。 新冠肺炎引起患者严重症状的原因主要来自两部分，一是病毒本身给机体 结成 损害，二是病毒引起的细胞因子风暴(炎性风暴)常造成大量正常功能细 胞功能下降、凋亡 甚至破裂死亡，从而使机体没有能力和时间产生抗体类免疫 反应，这是普通患者转向重症 以至于死亡的重要原因，如果在重症早期能及时 使用该抗新冠肺炎抗血清或卵黄抗体中 和新冠肺炎病毒，一般在几十小时后， 患者体内致死性的的细胞因子风暴就会因为感染源 的大幅减少或消失而大幅降 低，从而起到抢救生命的作用。 对于早期和中期患者，该抗新冠肺炎抗血清或卵黄抗体的应用，能够让被 感染人 群在早期中和病毒，避免其转为重症患者。对于携带病毒的无症状感染 者或潜伏期感染 者，该抗新冠肺炎抗血清或卵黄抗体能清除体内病毒。人群大 规模预防性使用抗体，能够 大幅降低感染率，减少感染人数，遏制病毒扩散， 减少隐性传播造成的疫情二次或多次爆 发，阻抗疫情发展，避免大面积跨市、 跨省、甚至跨国和跨洲传播。 该抗新冠肺炎抗血清或卵黄抗体还可与新冠肺炎疫苗配合使用，增强新冠 肺炎 的防控效果：一方面，在人免疫新冠疫苗前使用该抗体可以中和人体潜伏 的大部分新冠肺 炎病毒野毒株，减少疫苗免疫的应激和其中的活疫苗激发潜伏 野毒株的作用；另一方面， 当疫苗接种者体内抗体水平较低，不足以抵御病毒 入侵或病毒突破人体免疫屏障时，该抗 体的使用可以阻止野毒株大量复制，为 补种疫苗提供有效免疫时间和安全保障。 由于禽类动物价廉易得，而本方法操作简单易行，因此可大大降低获得抗 体的成 本，能够将患者昂贵治疗费用从几千元至上百万元降低到几元钱至几十 元，大大减轻目前 沉重的医疗负担，适合占人口大多数的普通民众的预防和治 疗。 即使随着病毒的自然或非自然变异而出现新的流行野毒株并影响到普通民 众 时，也可以应用本发明的方法，选取流行株制备疫苗给禽类动物多次免疫， 在一个半月内， 即可大量制备出抗血清或卵黄抗体。 优选地，所述新冠肺炎病毒灭活疫苗包括L亚型疫苗和S亚型疫苗中的至 少一种。 新冠肺炎病毒主流行株L亚型株和S亚型株可分别制成L亚型和S亚 型灭活疫苗，也可以直 接制备成L亚型 S亚型二价疫苗。 优选地，所述新冠肺炎病毒灭活疫苗中病毒含量≥105TCID50/mL。一般经过 四到 六次免疫即可使血清和卵黄中的抗体滴度达到预期要求。无论单价还是二 价疫苗，每羽份 新冠肺炎病毒灭活疫苗中病毒含量均应不小于105TCID50/mL。 4 CN 111574622 A 说 明 书 3/7 页 优选地，所述禽类动物为家禽。我国家禽数量几十亿只，来源丰富，血清 和禽蛋均 易于获得，成本低。可选用无特定病原体鸡(SPF鸡)或健康产蛋鸡 进行新冠肺炎灭活苗免 疫。当拟收集卵黄抗体时，优选产蛋高峰期蛋鸡进行免 疫。 以及，本发明实施例还提供了上述抗人新型冠状病毒肺炎的抗体的制备方 法，具 体包括如下操作： 用新冠肺炎病毒灭活疫苗免疫健康禽类动物，5～7天免疫一次，每次免疫 剂量为 0.5～1mL，对血清或卵黄中的抗新冠肺炎抗体以间接ELISA方法测定， 当血清内抗新冠肺 炎抗体的OD值比阳性对照抗体OD值大于0.2时，收集血 清，当卵黄内抗新冠肺炎抗体的OD 值比阳性对照抗体OD值大于0.2时，收 集卵黄中的水溶性组分，即得。 用本发明所提供的制备方法可在一个半月左右时间内得到大量抗新冠肺炎 抗血 清或抗新冠肺炎卵黄抗体。 优选地，所述制备方法还包括当血清内抗新冠肺炎抗体的OD值比阳性对 照抗体 OD值大于0.2或当卵黄内抗新冠肺炎抗体的OD值比阳性对照抗体OD 值大于0.2后，每15～ 20天用所述新冠肺炎病毒灭活疫苗加强免疫一次，以维 持高水平抗体。 优选地，所述收集血清的方法为：采集家禽血液，静置0.5～1小时，以 4000～ 8000rpm离心5～15分钟，抽取上清液，过滤，收集滤液，即得所述血 清。血液静置0.5～1小 时后，血液凝固，并在上层出现淡黄色液体，离心则是 对凝固血液、淡黄色液体以及二者之 间的成分共同离心。 优选地，所述收集卵黄中的水溶性组分的方法为：收集卵黄，向所述卵黄 中加入3 ～5倍体积的纯净水，搅拌破乳，静置2～6个小时，收集上清液，过滤， 收集滤液，即得；所述 纯净水中含有破乳剂，促使卵黄破乳。滤液中即含有抗 新冠肺炎卵黄抗体。破乳剂可选择 医药标准的市售产品，如聚乙二醇6000、聚 氧乙烯聚氧丙烯等，用量为纯净水质量的1～ 3％。 优选地，所述过滤为采用孔径为0.22μm的滤膜过滤。 优选地，所述制备方法还包括将所述滤液在55～65℃浓缩成浓缩液。如， 可采用 低温真空浓缩罐进行浓缩，将所得滤液浓缩至原体积的1/3～1/4。浓缩后 的滤液便于进一 步加工为临床所需产品，如饮水剂、注射液等。 优选地，所述制备方法还包括将所述浓缩液进行干燥。干燥后可通过粉碎、 过筛 得到抗体粉末，收集得到的抗体粉末可以进一步制成片剂、胶囊、颗粒剂、 散剂和注射用无 菌粉末，便于临床应用。 优选地，所述干燥为高温离心喷雾干燥，干燥温度为155～165℃，离心喷 雾头转 速为8000～25000rpm。 优选地，所述干燥为冷冻干燥。冷冻干燥能够减少抗体在高温干燥过程中 造成的 损失，提高产品中有效抗体的含量。 优选地，所述干燥为低温离心真空喷雾，干燥温度为55～65℃，离心喷雾 头转速 为8000～25000rpm。该干燥方法中抗体损耗情况与冷冻干燥相近，对抗 体破坏较小，但生 产的时间成本和动力成本低于真空冻干。 5 CN 111574622 A 说 明 书 4/7 页
