技术摘要：
本发明公开了仙鹤草内酯在拮抗缺氧引起的心肌细胞损伤中的用途。本发明研究发现，仙鹤草内酯能够通过促进心肌细胞增殖、抑制缺氧引起的细胞凋亡、维持细胞形态的完整性和增强线粒体的功能，从而实现对缺氧引起的心肌细胞损伤的保护作用，为开发新的治疗心肌梗死的药物  全部
背景技术：
缺氧，是指由于供氧不足或氧功能障碍导致组织代谢，功能和形态结构发生异常 变化的病理过程。缺氧是各种临床疾病中非常常见的一种病理过程，可损伤心肌细胞，诱导 细胞凋亡。心肌梗死(MI)是由心脏急性和持续缺血或缺氧引起的一种常见的临床心血管疾 病。虽然MI的治疗取得了很大的进展，但心肌梗死的发病率和死亡率仍然很高，严重威胁着 人类的健康。心肌细胞凋亡和损伤是MI的主要特征，因此，寻找一种有效的减轻心肌细胞损 伤和凋亡的新药物将有助于MI的治疗。 仙鹤草是一种传统中草药，收敛止血作用最早被古人发现。仙鹤草的主要成分有 仙鹤草素，木犀草素-7-葡萄糖苷，香豆素，单宁，甾醇等。这些提取物具有抗氧化，抗炎，抗 病毒，降血糖，抗肿瘤等药理活性。最近的研究发现，仙鹤草提取物可清除DPPH自由基，提示 仙鹤草具有较强的抗氧化活性；在链脲佐菌素糖尿病发展过程中，仙鹤草降低了高血糖水 平，延缓了小鼠糖尿病的发展；用仙鹤草乙醇提取物处理HepG2细胞，可抑制细胞增殖，激活 细胞凋亡相关蛋白，如XIAP、BIK、MCL-1、bcl-xl、bcl-2、BID、caspase-9、caspase-3和PARP， 表明仙鹤草乙醇提取物可诱导细胞凋亡；仙鹤草多糖及其硫酸化衍生物通过激活Wnt/β- catenin信号通路和抑制细胞凋亡，保护MC3T3-E1细胞免受DEX诱导的细胞损伤。 仙鹤草内酯(Agrimonolide，AM)是从仙鹤草中分离提取的一种异香豆素类化合 物，现有研究发现：仙鹤草内酯具有保肝、抗炎、降血糖、抗肿瘤等药理活性。但目前还未有 关于仙鹤草内酯对缺氧诱导的心肌细胞损伤作用方面的报道。
技术实现要素：
针对上述现有技术，本发明的目的是提供仙鹤草内酯在保护缺氧引起的心肌细胞 损伤方面的新的医药用途。 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 本发明的第一方面，提供仙鹤草内酯在制备治疗由缺氧引起的心肌细胞损伤的药 物中的应用。 上述应用中，所述仙鹤草内酯通过如下(1)-(4)至少一条途径来拮抗缺氧引起的 心肌细胞损伤： (1)降低G0/G1期细胞所占的比例； (2)提高PCNA蛋白的水平； (3)抑制缺氧诱导的细胞凋亡； (4)增强线粒体功能。 上述应用中，优选的，所述心肌细胞为H9C2细胞。 3 CN 111603464 A 说　明　书 2/7 页 本发明的第二方面，提供仙鹤草内酯在制备治疗由缺氧引起的心肌梗死的药物中 的应用。 本发明的第三方面，提供一种治疗由缺氧引起的心肌细胞损伤的药物，所述药物 以15μM的仙鹤草内酯为有效成分。 本发明的第四方面，提供仙鹤草内酯在制备用于提高缺氧条件下G0/G1期心肌细 胞所占比例的药物中的应用。 本发明的第五方面，提供仙鹤草内酯在制备用于提高缺氧条件下PCNA蛋白表达水 平的药物中的应用。 本发明的第六方面，提供仙鹤草内酯在制备用于增强缺氧条件下线粒体功能的药 物中的应用。 本发明的有益效果： 本发明研究发现，仙鹤草内酯能够通过促进心肌细胞增殖、抑制缺氧引起的细胞 凋亡、维持细胞形态的完整性和增强线粒体的功能，从而实现对缺氧引起的心肌细胞损伤 的保护作用，为开发新的治疗心肌梗死的药物提供了理论支持。 附图说明 图1：不同浓度的AM处理H9C2细胞24小时后对细胞活力的影响。 图2：不同处理组对H9C2细胞形态变化的影响(倒置显微镜，×200)；其中，Con：对 照组；Hypoxia：缺氧处理组；Hypoxia AM(15μM)：缺氧 AM处理组；AM：AM处理组。 图3：不同处理组对H9C2细胞周期的影响；其中，A：PI染色，流式细胞仪分析细胞周 期谱；B：不同处理组G0/G1期细胞和S G2/M期细胞比例；C：PCNA蛋白Western  Blot检测结 果；D：不同处理组PCNA蛋白的表达水平；Con(或NC)：对照组；Hypoxia：缺氧处理组；Hypoxia AM(15μM)：缺氧 AM处理组；AM：AM处理组。 图4：不同处理组对H9C2细胞凋亡的影响；其中，A：Annexin  V-FITC/PI染色，流式 细胞仪检测细胞凋亡率；B：流式细胞仪检测的细胞凋亡率结果；C：用TdT和DAPI染色，免疫 荧光显微镜观察凋亡细胞，图像放大倍数为400倍；D：免疫荧光检测的细胞凋亡率结果； Con：对照组；Hypoxia：缺氧处理组；Hypoxia AM(15μM)：缺氧 AM处理组；AM：AM处理组。 图5：不同处理组对H9C2细胞凋亡蛋白的影响；其中，A：Western  Blot检测结果；B： 不同处理组Bcl2蛋白表达水平；C：不同处理组Bax蛋白表达水平；D：不同处理组Cleaved  caspase3蛋白表达水平；Con：对照组；Hypoxia：缺氧处理组；Hypoxia AM(15μM)：缺氧 AM处 理组；AM：AM处理组。 图6：不同处理组对H9C2细胞ROS的影响；其中，Con：对照组；Hypoxia：缺氧处理组； Hypoxia AM(15μM)：缺氧 AM处理组；AM：AM处理组。 图7：不同处理组对H9C2细胞MMP的影响；其中，Con：对照组；Hypoxia：缺氧处理组； Hypoxia AM(15μM)：缺氧 AM处理组；AM：AM处理组。 图8：不同处理组对H9C2细胞线粒体功能蛋白的影响；其中，A：Western  Blot检测 结果；B：不同处理组DRP1蛋白表达水平；C：不同处理组OPA1蛋白表达水平；D：不同处理组 MFN1蛋白表达水平；E：不同处理组MFN2蛋白表达水平；F：不同处理组Tom20蛋白表达水平； Con：对照组；Hypoxia：缺氧处理组；Hypoxia AM(15μM)：缺氧 AM处理组；AM：AM处理组。 4 CN 111603464 A 说　明　书 3/7 页