技术摘要：
本发明提供一种快速注射型净化柱和检测猪皮中结晶紫含量的方法，所述快速注射型净化柱包括由以下重量份的组分组成的填料：多壁碳纳米管4～8份、PSA填料4～8份、C18填料2～4份、无水硫酸镁20～40份和弗罗里硅土0.5～1.5份。本发明提供的快速注射型净化柱具有良好的去脂  全部
背景技术：
目前，屠宰环节使用的动物屠宰检疫印章在畜禽产品质量安全监管中发挥了积极 作用。但是，检疫检验印章在实际应用过程中存在一些问题，一个重要问题是印油的使用存 在安全问题。由于国内对于印油的印色、配方没有统一的规定和标准，导致目前检疫检验印 章使用印油的成分不明确，但有资料报道称，印油成分多包含有结晶紫，从而也会导致猪皮 有检验检疫印章部位中存在结晶紫的残留。 结晶紫(Crystalviolet，CV)又称六甲基紫，属于碱性三苯甲烷类染料，分子式为 C25H30ClN3，CV为暗绿色粉末或带有青铜色光泽的片状晶体，溶于水，用作酸碱指示剂、生物 染色剂、工业染色剂，具有杀菌作用，因具有消毒杀菌作用，常用在水产养殖过程作为杀菌 剂和抗寄生虫药用于防治各种疾病。由于结晶紫具有较高毒性、致癌、致畸、致突变等特性， 在猪皮带有检验检疫印章部位中存在的结晶紫残留被人食用后会对人体带来较大危害。 目前，尚未见关于猪皮上检验检疫印章部位中残留结晶紫检测方法的报道，而且 猪皮中含有一定的油脂，基质效应干扰严重，也给准确检测结晶紫含量带来了困难。
技术实现要素：
针对现有技术存在的问题，本发明提供一种快速注射型净化柱和检测猪皮中结晶 紫含量的方法。 本发明第一目的为提供一种快速注射型净化柱，包括由以下重量份的组分组成的 填料：多壁碳纳米管4～8份、PSA填料4～8份、C18填料2～4份、无水硫酸镁20～40份和弗罗 里硅土0.5～1.5份。 本发明所述PSA填料为乙二胺-N-丙基硅烷，C18填料为十八烷基硅烷键合硅胶。 本发明将多壁碳纳米管、PSA填料、C18填料、无水硫酸镁和弗罗里硅土合理配伍， 得到的快速注射型净化柱具有良好的去脂效果，以及良好的降低基质效应干扰效果。 进一步地，所述快速注射型净化柱包括由以下组分组成的填料：30mg多壁碳纳米 管、30mg  PSA填料、15mg  C18填料、150mg无水硫酸镁和弗罗里硅土5mg；所述填料填充于所 述快速注射型净化柱的柱管内，所述柱管的直径为1.0±0.1cm。 更优选地，所述快速注射型净化柱柱管长约5.9cm，推杆长度7.5cm。 进一步地，所述弗罗里硅土为农残级。 本发明第二目的为提供上述快速注射型净化柱在含油脂待测样品前处理过程中 的应用。 其中，所述含油脂待测样品包括猪皮、牛皮、羊皮、马皮、驴皮、骡皮等含有油脂的 待测样品。 3 CN 111579659 A 说　明　书 2/6 页 本发明第三目的为提供一种检测猪皮中结晶紫含量的样品前处理方法，其包括使 用上述快速注射型净化柱。 具体地，包括以下步骤： 将待测猪皮匀浆后，加入内标、超纯水和有机溶剂，进行提取，再加入盐析剂和脱 水剂，涡旋后离心，得到上清液，冷冻除脂过膜，得到提取液；所述有机溶剂为乙腈、丙酮、乙 醚中的一种或多种； 将所述提取液用上述快速注射型净化柱净化，得到待测液。 上述技术方案中，通过在常规液液萃取的基础上加以改进，加入有机溶剂之前先 加入超纯水以水化样品，使结晶紫更容易被水-有机溶剂组成的提取液提取；在提取液里加 入盐析剂和脱水剂，盐析剂会促使结晶紫在水溶液中的溶解度降低，转移到有机溶剂层，脱 水剂吸水更有利于结晶紫全部转移到有机溶剂，从而提高结晶紫的回收率；再加上采用特 定净化柱，该方法操作简单、快速，成本低，回收率高，检测限低，适用于准确检测猪皮中残 留的结晶紫。 进一步地，所述提取液的用量为1ml。 进一步地，所述超纯水与猪皮匀浆的体积质量比为0.2～1ml:1g，优选为0.4ml: 1g。 进一步地，所述有机溶剂与猪皮匀浆的体积质量比为0.8～3.2ml:1g，优选为2ml: 1g。 本发明中，如果超纯水用量过少，达不到水化效果，结晶紫不能充分迁移到提取液 中，而用量过大，则不利于后续的盐析和脱水过程，使结晶紫的损失较大；有机溶剂用量过 小，不能有效地将结晶紫有效萃取出来，容易造成过饱和，降低萃取效率，而用量过大，降低 提取液中结晶紫浓度，造成方法灵敏度降低。因此本发明通过对超纯水和有机溶剂的限定 能够提高结晶紫的提取效率，提高结晶紫目标物在色谱图中的峰高。 优选地，当超纯水的用量限定为猪皮匀浆质量的0.2～1.0倍、有机溶剂的用量限 定为猪皮匀浆质量的0.8～3.2倍时，超纯水和有机溶剂混合后能进一步提高结晶紫的提取 效率。 进一步优选地，将猪皮匀浆后，先加入所述超纯水，再加入所述有机溶剂。 进一步地，进行提取时，采用震荡提取、涡旋提取、超声提取中的一种或多种；优选 地，提取时间为0.5～3分钟，更优选为1分钟。 进一步地，所述盐析剂为氯化钠、硫酸铵、硫酸钠中的一种或多种，其用量为所述 有机溶剂的质量的0.1～0.2倍。 进一步地，所述脱水剂为无水氯化钙、无水硫酸镁、无水硫酸铜中的一种或多种， 其用量为所述有机溶剂的质量的0.2～1.0倍。 进一步优选地，先加入所述盐析剂，再加入所述脱水剂。 进一步地，加入盐析剂和脱水剂后，涡旋转速为1000～3000转/分钟，时间为0.5～ 3分钟，离心转速为1000～6000转/分钟，时间为1～6分钟。 进一步地，所述冷冻除脂的温度为-80℃～-20℃，时间为10～60分钟。 作为本发明的优选实施方式，所述检测猪皮中结晶紫含量的样品前处理方法，包 括以下步骤： 4 CN 111579659 A 说　明　书 3/6 页 (1)将待测猪皮切丁匀浆后，加入超纯水和有机溶剂，进行提取0.5～3.0分钟；所 述有机溶剂为乙腈、丙酮、乙醚中的一种或多种，所述超纯水与猪皮匀浆的体积质量比为 0.2～1ml:1g，所述有机溶剂与猪皮匀浆的体积质量比为0.8～3.2ml:1g； (2)向步骤(1)得到的混合液中加入盐析剂和脱水剂，所述盐析剂质量为有机溶剂 质量的0.1～0.2倍，所述脱水剂质量为有机溶剂质量的0.2～1.0倍，盐析和脱水后，将样品 涡旋、离心，涡旋转速为1000～3000转/分钟，涡旋时间为0.5～3分钟，离心转速为1000～ 6000转/分钟，离心时间为1～6分钟，离心后得到上清液，再进行冷冻除脂、过膜，所述冷冻 除脂的温度为-80℃～-20℃，时间为10～60分钟； (3)将步骤(2)得到的过膜后的提取液加入到快速注射型净化柱净化，得到待测 液；所述快速注射型净化柱包括由以下组分组成的填料：30mg多壁碳纳米管、30mg  PSA填 料、15mg  C18填料、150mg无水硫酸镁和弗罗里硅土5mg，所述快速注射型净化柱的柱管直径 为1.0cm；所述提取液的用量为1ml。 本发明第四目的为提供一种检测猪皮中结晶紫含量的方法，包括：采用上述样品 前处理方法对待测猪皮进行处理，得到待测液；将所述待测液进行液相色谱-质谱分析。 进一步地，上述方法中采用内标法进行定量分析，以结晶紫与内标物的浓度比为 横坐标，峰面积比为纵坐标绘制标准曲线。 本发明提供的快速注射型净化柱具有良好的去脂效果，以及良好的降低基质效应 干扰效果。本发明提供的检测方法操作简单、快速，成本低，回收率高，可以达到81～95％， 检测限低，适用于准确检测猪皮中残留的结晶紫。 附图说明 图1为猪皮样品中结晶紫及内标提取离子流色谱图； 图2为结晶紫标准曲线； 图3为本发明实施例3猪皮样品中结晶紫提取离子流色谱图； 图4为本发明实施例4猪皮样品中结晶紫提取离子流色谱图； 图5为本发明实施例5猪皮样品中结晶紫提取离子流色谱图。