技术摘要：
本发明公开了一种基于GC‑MS技术分析金铁锁中挥发油及脂肪酸的方法，该方法采用水蒸气蒸馏法提取金铁锁中挥发油，通过GC‑MS对其挥发油化学成分进行分析与鉴定；利用索氏提取法提取金铁锁中脂肪酸，通过GC‑MS对甲酯化后的脂肪酸进行分析。通过峰面积归一化法计算各成 全部
背景技术：
金铁锁为石竹科单属种植物金铁锁Psammosilene tunicoides W .C .Wu et C.Y.Wu的干燥根，异名独丁子、独定子、蜈蚣七等，是我国西南部特有的单种属植物和传统 的药用植物，首载于《滇南本草》，其后又被列入《中国药典》和《中华本草》[1-2]。主要分布于 四川、贵州、云南、西藏等地，主治跌打损伤、风湿病、胃痛、痈疽疮疖、创伤出血等[1]。 金铁锁具有良好的临床应用价值，随着市场需求增大，由于人为过度采挖和生境 遭到破坏，金铁锁野生资源枯竭，已作为稀有濒危物种列于《中国植物红皮书》中，现已列入 国家二级重点保护植物[1 ,3]。金铁锁的主要化学成分是三萜、三萜皂苷、环肽、内酰胺、氨基 酸和有机酸等[4]。现代药理研究表明，金铁锁具有较好的镇痛和抗炎作用[5]。 目前，对于金铁锁中化学成分研究的报道较多[6-7]，金铁锁挥发油的研究偶见报道 且分析成分较少[8]，而对于金铁锁脂肪酸的提取和分析未见国内外文献报道。现代研究发 现，脂肪酸在人体中有着极其重要的作用，饱和脂肪酸有着其独特的生理作用，不饱和脂肪 酸有促进细胞生长、免疫调节、抗癌、保肝、降血糖等作用[9]。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种基于GC-MS技术分析金铁锁中挥发油及脂肪酸的方 法，采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MC)研究分析金铁锁药材中挥发油和脂肪酸成分，建 立一种简单、迅速、灵敏、准确度高的分析方法，为金铁锁的品质评价、药理作用的深入研究 及进一步开发利用提供了科学依据。 本发明的技术方案是这样实现的； 一种基于GC-MS技术分析金铁锁中挥发油及脂肪酸的方法，该方法是采用水蒸气 蒸馏法提取金铁锁中挥发油，通过GC-MS对其挥发油化学成分进行分析与鉴定；利用索氏提 取法提取金铁锁中脂肪酸，通过GC-MS对甲酯化后的脂肪酸进行分析；通过峰面积归一化法 计算各成分的相对含量，鉴别金铁锁的化学成分。 其中，水蒸气蒸馏法提取金铁锁中挥发油包括如下步骤：采用《中国药典》2015年 版四部挥发油提取装置，采用水蒸气蒸馏法提取；称取干燥金铁锁粗粉200g，置于圆底烧瓶 中，加入1200mL超纯水；加入3mL正己烷置于挥发油提取器中，连接挥发油提取器和蒸馏装 置后，采用水蒸气蒸馏法蒸馏8h，收集正己烷层，经无水硫酸钠脱水干燥后，密封、-20℃保 存，作为供试品溶液。 新一步的，索氏提取法提取金铁锁中脂肪酸包括如下步骤：称取干燥金铁锁粗粉 5g，装入由定性滤纸折叠成的滤纸筒置于索氏提取器中，加入50mL石油醚，回流萃取8h，得 到淡黄色萃取液，减压回收石油醚，得到黄色油状液体。 3 CN 111551665 A 说 明 书 2/9 页 新一步的，脂肪酸的甲酯化包括如下步骤：在黄色油状液体中加入0.5mol/L氢氧 化钠甲醇溶液5mL，水浴回流皂化30min，至油珠全部消失；再加入体积分数14％三氟化硼乙 醚甲醇溶液2mL，酯化30min，放冷；精密加入正己烷5mL，水浴上继续回流5min，放冷；转移至 分液漏斗中，加饱和氯化钠溶液5mL，振摇，静置分层，吸取上清液，用少量水洗涤，无水硫酸 钠干燥，密封、-20℃保存，作为供试品溶液。 新一步的，测定挥发油成分GC-MS测定条件包括： 色谱条件：色谱柱：DB-5MS，30m×250μm，膜厚0.25μm，毛细管柱，升温程序：50℃保 持2min，以3℃/min升温至110℃，以2℃/min升温至180℃，以5℃/min升温至270℃，再以10 ℃/min升温至315℃，保持5min；进样口温度250℃；载气He，流速1mL/min；进样模式为不分 流进样，进样量1μL； 质谱条件：离子源温度230℃；四极杆温度150℃；接口温度280℃；电离方式为电子 轰击离子源；电子能量70eV；质量数扫描范围：30-400amu；溶剂延迟3.5min；SCAN全扫描模 式。 新一步的，测定脂肪酸成分GC-MS测定条件包括： 色谱条件：色谱柱：DB-5MS，30m×250μm，膜厚0.25μm，毛细管柱，升温程序：50℃保 持2min，以3℃/min升温至110℃，以2℃/min升温至180℃，以5℃/min升温至270℃，再以10 ℃/min升温至315℃，保持5min；进样口温度250℃；载气He，流速1mL/min；进样模式为不分 流进样，进样量1μL； 质谱条件：离子源温度230℃；四极杆温度150℃；接口温度280℃；电离方式为电子 轰击离子源；电子能量70eV；质量数扫描范围：30-400amu；溶剂延迟3.5min；SCAN全扫描模 式。 按照本发明的方法可以从金铁锁挥发油中共鉴定出50种化学成分，其相对含量占 挥发油总量78 .69％。金铁锁根挥发油主要含有成分是己醛(16 .48％)、2-戊基-呋喃 (10.69％)、棕榈酸(9.05％)、2,4-癸二烯醛(6.21％)等。从金铁锁提取的甲酯化溶液中共 鉴定出26种化学成分，其中脂肪酸有23种，占总成分相对含量91.249％。金铁锁中脂肪酸的 主要成分为棕榈酸甲酯(30.29％)、反油酸甲酯(18.53％)、反亚油酸甲酯(17.32)、硬脂酸 甲酯(4.4％)等。结论：所建立的金铁锁挥发油和脂肪酸化学成分GC-MS分析方法操作简单、 迅速灵敏、准确度高，可为金铁锁质量评价提供参考。 附图说明 图1金铁锁的挥发油化学成分的GC-MC总离子流图； 图2金铁锁中脂肪酸化学成分的GC-MC总离子流图。
本发明公开了一种基于GC‑MS技术分析金铁锁中挥发油及脂肪酸的方法，该方法采用水蒸气蒸馏法提取金铁锁中挥发油，通过GC‑MS对其挥发油化学成分进行分析与鉴定；利用索氏提取法提取金铁锁中脂肪酸，通过GC‑MS对甲酯化后的脂肪酸进行分析。通过峰面积归一化法计算各成 全部
背景技术：
金铁锁为石竹科单属种植物金铁锁Psammosilene tunicoides W .C .Wu et C.Y.Wu的干燥根，异名独丁子、独定子、蜈蚣七等，是我国西南部特有的单种属植物和传统 的药用植物，首载于《滇南本草》，其后又被列入《中国药典》和《中华本草》[1-2]。主要分布于 四川、贵州、云南、西藏等地，主治跌打损伤、风湿病、胃痛、痈疽疮疖、创伤出血等[1]。 金铁锁具有良好的临床应用价值，随着市场需求增大，由于人为过度采挖和生境 遭到破坏，金铁锁野生资源枯竭，已作为稀有濒危物种列于《中国植物红皮书》中，现已列入 国家二级重点保护植物[1 ,3]。金铁锁的主要化学成分是三萜、三萜皂苷、环肽、内酰胺、氨基 酸和有机酸等[4]。现代药理研究表明，金铁锁具有较好的镇痛和抗炎作用[5]。 目前，对于金铁锁中化学成分研究的报道较多[6-7]，金铁锁挥发油的研究偶见报道 且分析成分较少[8]，而对于金铁锁脂肪酸的提取和分析未见国内外文献报道。现代研究发 现，脂肪酸在人体中有着极其重要的作用，饱和脂肪酸有着其独特的生理作用，不饱和脂肪 酸有促进细胞生长、免疫调节、抗癌、保肝、降血糖等作用[9]。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种基于GC-MS技术分析金铁锁中挥发油及脂肪酸的方 法，采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MC)研究分析金铁锁药材中挥发油和脂肪酸成分，建 立一种简单、迅速、灵敏、准确度高的分析方法，为金铁锁的品质评价、药理作用的深入研究 及进一步开发利用提供了科学依据。 本发明的技术方案是这样实现的； 一种基于GC-MS技术分析金铁锁中挥发油及脂肪酸的方法，该方法是采用水蒸气 蒸馏法提取金铁锁中挥发油，通过GC-MS对其挥发油化学成分进行分析与鉴定；利用索氏提 取法提取金铁锁中脂肪酸，通过GC-MS对甲酯化后的脂肪酸进行分析；通过峰面积归一化法 计算各成分的相对含量，鉴别金铁锁的化学成分。 其中，水蒸气蒸馏法提取金铁锁中挥发油包括如下步骤：采用《中国药典》2015年 版四部挥发油提取装置，采用水蒸气蒸馏法提取；称取干燥金铁锁粗粉200g，置于圆底烧瓶 中，加入1200mL超纯水；加入3mL正己烷置于挥发油提取器中，连接挥发油提取器和蒸馏装 置后，采用水蒸气蒸馏法蒸馏8h，收集正己烷层，经无水硫酸钠脱水干燥后，密封、-20℃保 存，作为供试品溶液。 新一步的，索氏提取法提取金铁锁中脂肪酸包括如下步骤：称取干燥金铁锁粗粉 5g，装入由定性滤纸折叠成的滤纸筒置于索氏提取器中，加入50mL石油醚，回流萃取8h，得 到淡黄色萃取液，减压回收石油醚，得到黄色油状液体。 3 CN 111551665 A 说 明 书 2/9 页 新一步的，脂肪酸的甲酯化包括如下步骤：在黄色油状液体中加入0.5mol/L氢氧 化钠甲醇溶液5mL，水浴回流皂化30min，至油珠全部消失；再加入体积分数14％三氟化硼乙 醚甲醇溶液2mL，酯化30min，放冷；精密加入正己烷5mL，水浴上继续回流5min，放冷；转移至 分液漏斗中，加饱和氯化钠溶液5mL，振摇，静置分层，吸取上清液，用少量水洗涤，无水硫酸 钠干燥，密封、-20℃保存，作为供试品溶液。 新一步的，测定挥发油成分GC-MS测定条件包括： 色谱条件：色谱柱：DB-5MS，30m×250μm，膜厚0.25μm，毛细管柱，升温程序：50℃保 持2min，以3℃/min升温至110℃，以2℃/min升温至180℃，以5℃/min升温至270℃，再以10 ℃/min升温至315℃，保持5min；进样口温度250℃；载气He，流速1mL/min；进样模式为不分 流进样，进样量1μL； 质谱条件：离子源温度230℃；四极杆温度150℃；接口温度280℃；电离方式为电子 轰击离子源；电子能量70eV；质量数扫描范围：30-400amu；溶剂延迟3.5min；SCAN全扫描模 式。 新一步的，测定脂肪酸成分GC-MS测定条件包括： 色谱条件：色谱柱：DB-5MS，30m×250μm，膜厚0.25μm，毛细管柱，升温程序：50℃保 持2min，以3℃/min升温至110℃，以2℃/min升温至180℃，以5℃/min升温至270℃，再以10 ℃/min升温至315℃，保持5min；进样口温度250℃；载气He，流速1mL/min；进样模式为不分 流进样，进样量1μL； 质谱条件：离子源温度230℃；四极杆温度150℃；接口温度280℃；电离方式为电子 轰击离子源；电子能量70eV；质量数扫描范围：30-400amu；溶剂延迟3.5min；SCAN全扫描模 式。 按照本发明的方法可以从金铁锁挥发油中共鉴定出50种化学成分，其相对含量占 挥发油总量78 .69％。金铁锁根挥发油主要含有成分是己醛(16 .48％)、2-戊基-呋喃 (10.69％)、棕榈酸(9.05％)、2,4-癸二烯醛(6.21％)等。从金铁锁提取的甲酯化溶液中共 鉴定出26种化学成分，其中脂肪酸有23种，占总成分相对含量91.249％。金铁锁中脂肪酸的 主要成分为棕榈酸甲酯(30.29％)、反油酸甲酯(18.53％)、反亚油酸甲酯(17.32)、硬脂酸 甲酯(4.4％)等。结论：所建立的金铁锁挥发油和脂肪酸化学成分GC-MS分析方法操作简单、 迅速灵敏、准确度高，可为金铁锁质量评价提供参考。 附图说明 图1金铁锁的挥发油化学成分的GC-MC总离子流图； 图2金铁锁中脂肪酸化学成分的GC-MC总离子流图。
