技术摘要：
本发明提供一种与人CD40特异结合的分离的单克隆抗体。还提供编码该抗体的核酸分子，以及用于表达该抗体的表达载体、宿主细胞和方法。本发明还提供包含该抗体的免疫交联物、双特异性分子、嵌合抗原受体、溶瘤病毒和药物组合物，以及使用本发明抗体的治疗方法。
背景技术：
CD40，又称为肿瘤坏死因子受体超家族成员5或TNFR5，是一种跨膜共刺激蛋白，在 抗原提呈细胞例如B细胞、巨噬细胞和树突细胞上表达。该蛋白与CD40L(CD154)，一种主要 由激活的T淋巴细胞和血小板表达的主要配体，的结合，激活抗原提呈细胞，激发多个下游 信号通路，包括免疫细胞激活和增殖、以及细胞因子和趋化因子的生产，增强细胞功能和免 疫功能(Ara A et al，.(2018)Immunotargets Ther 7：55-61)。 另一方面，CD40也存在于非免疫细胞和肿瘤上(Costello et al.，(1999)Immunol Today20(11)：488-493；Tong et al.，(2003)Cancer Gene Ther 10(1)：1-13；Lee et al.， (2014)Curr Cancer Drug Targets 14(7)：610-620；Ara A et al，.(2018)同上)，并报道 其与多种免疫疾病(包括自免疫疾病)、动脉粥样硬化血栓、癌症和呼吸系统疾病有关联。例 如，CD40/CD40L表达在动脉粥样化相关细胞中上调。CD40在几乎所有的B细胞恶性肿瘤以及 高达70％的实体瘤中表达，且某些B细胞恶性肿瘤中的CD40配体结合会促成多种保护肿瘤 细胞免受细胞凋亡的因子的表达增加(Lee et al.，(1999)Proc Natl Acad Sci USA96： 9136-9141)。 尽管CD40在肿瘤发生中的作用非常复杂，已经开发出一些CD40抗体用于潜在的肿 瘤治疗。CP-870，893，开发的完全人源的IgG2激动型CD40抗体，可以激活树突细胞，并已在 多种背景的晚期癌症病患中显示出了临床效用(Vonderheide et al .，(2007)J Clin Oncol 25(7)：876-883；Gladue et al.，(2011)Cancer Immunol Immunother 60(7)：1009- 1017；Beatty et al.，(2013)Expert Rev Anticancer Ther 17(2)：175-186；Vonderheide et al.，(2013)Oncoimmunology 2(1)：e23033；Nowak et al.，Ann Oncol 26(12)：2483- 2490；2015U.S.patent no.7,338,660)。Dacetuzumab，也称作SGN-40，是Seattle Genetics 开发的人源化IgG1激动型CD40抗体，每周静脉施用下显示出抗肿瘤活性，特别是在患有弥 漫性大B细胞性淋巴瘤的患者中。临床前数据也示出Dacetuzumab与其他药物例如CD20单抗 利妥昔单抗的协同效应(Lapalombella et al.，(2009)Br J Haematol 144(6)：848-855； Hussein et al.，(2010)Haematologica 95(5)：845-848；de Vos et al.，(2014)J He- matol Oncol 7：44)。Chi Lob 7/4，英国癌症研究中心(Cancer Research UK)开发的嵌合 IgG1激动型抗人CD40抗体，正在进行初始的临床测试。21名患者中的11名病情稳定，而没有 部分或完全缓解(Chowdhury et al.，(2014)Cancer Immunol Res 2(3)：229-240)。此外， 3 CN 111548415 A 说 明 书 2/31 页 拮抗型CD40抗体也在人多发性骨髓瘤和慢性淋巴细胞白血病中显示出抗肿瘤作用 (Bensinger W et al.，(2012)Br J Haematol.159(1)：58-66；Mohammad Luqman et al.， (2008)Blood 112：711-720)。 需要更多具有更好药理特性的CD40抗体。
技术实现要素：
本发明提供一种分离的单克隆抗体，例如，与CD40(例如，人CD40和猴CD40)结合的 鼠源、人源、嵌合或人源化的单克隆抗体。其可以是激活CD40信号通路的激动型CD40抗体。 本发明的抗体可以用于多种应用，包括检测CD40蛋白，治疗或预防CD40相关疾病， 例如癌症、炎性疾病、感染性疾病、动脉粥样硬化血栓、和呼吸系统疾病。 因此，在一个方面，本发明涉及一种分离的单克隆抗体(例如，人源化抗体)、或其 抗原结合部分，含有重链可变区，该重链可变区含有CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中，CDR1 区、CDR2区和CDR3区分别包含(1)SEQ ID NOs：1、8和15；(2)SEQ ID NOs：1、9和15；(3)SEQ ID NOs：2、9和15；(4)SEQ ID NOs：3、10和16；(5)SEQ ID NOs：4、11和17；(6)SEQ ID NOs：5、 12和18；(7)SEQ ID NOs：6、13和19；或(8)SEQ ID NOs：7、14和20的氨基酸序列；或分别包含 与这些序列具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列，其中该抗体 或其抗原结合部分与CD40结合。 在一个方面，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包含重链可变区，其 包含SEQ ID NOs：37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50的氨基酸序列，或包含 与这些序列具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列，其中该抗体 或其抗原结合部分与CD40结合。 在一个方面，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分含有轻链可变区，该 轻链可变区含有CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中，CDR1区、CDR2区和CDR3区分别包含(1)SEQ ID NOs：21、27和31；或(2)SEQ ID NOs：22、28和32；(3)SEQ ID NOs：23、29和33；(4)SEQ ID NOs：24、27和34；(5)SEQ ID NOs：25、27和35；或(6)SEQ ID NOs：26、30和36的氨基酸序列； 或分别包含与这些序列具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列， 其中该抗体或其抗原结合部分与CD40结合。 在一个方面，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包含轻链可变区，其 包含SEQ ID NOs：51、52、53、54、55、56、57、58、59、60或61，或包含与这些序列具有至少 80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的序列，其中该抗体或其抗原结合部分与CD40结 合。 在一个方面，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻 链可变区，各包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中重链可变区CDR1区、CDR2区和CDR3区，轻链 可变区CDR1区、CDR2区和CDR3区分别包含(1)SEQ ID NOs：1、8、15、21、27和31；(2)SEQ ID NOs：1、9、15、21、27和31；(3)SEQ ID NOs：2、9、15、21、27和31；(4)SEQ ID NOs：3、10、16、22、 28和32；(5)SEQ ID NOs：4、11、17、23、29和33；(6)SEQ ID NOs：5、12、18、24、27和34；(7)SEQ ID NOs：6、13、19、25、27和35；或(8)SEQ ID NOs：7、14、20、26、30和36的氨基酸序列；或分别 包含与这些序列具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列，其中该 抗体或其抗原结合部分与CD40结合。 4 CN 111548415 A 说 明 书 3/31 页 在一个实施方式中，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包含重链可变 区和轻链可变区，该重链可变区和轻链可变区分别包含(1)SEQ ID NOs：37和51；(2)SEQ ID NOs：38和52；(3)SEQ ID NOs：39和53；(4)SEQ ID NOs：40和54；(5)SEQ ID NOs：41和55；(6) SEQ ID NOs：44和58；(7)SEQ ID NOs：45和59；(8)SEQ ID NOs：46和60；(9)SEQ ID NOs：46 和61；(10)SEQ ID NOs：47和60；(11)SEQ ID NOs：47和61；(12)SEQ ID NOs：48和59；(13) SEQ ID NOs：49和60；(14)SEQ ID NOs：49和61；(15)SEQ ID NOs：50和60；或(16)SEQ ID NOs：50和61的氨基酸序列；或分别包含与这些序列具有至少80％、85％、90％、95％、98％或 99％同一性的氨基酸序列，其中该抗体或其抗原结合部分与CD40结合。 在一个实施方式中，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包含重链和轻 链，该重链包含重链可变区和重链恒定区，轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，重链 可变区和轻链可变区含有上述的氨基酸序列，重链恒定区包含SEQ ID NOs：62、63或64的氨 基酸序列，轻链恒定区包含SEQ ID NOs：65或66的氨基酸序列，或包含与这些序列具有至少 80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列，其中该抗体或其抗原结合部分与 CD40结合。 本发明的抗体在一些实施方式中包含两条重链和两条轻链，或由两条重链和两条 轻链构成，其中各重链包含上述的重链恒定区序列、重链可变区序列或CDR序列，且各轻链 包含上述的轻链恒定区序列、轻链可变区序列或CDR序列。本发明的抗体可以是全长抗体， 例如IgG1、IgG2或IgG4亚型。在一些实施方式中，本发明的抗体可以是单链抗体，或由抗体 片段构成，例如Fab或Fab‘2片段。 本发明的抗体或其抗原结合部分与人或猴CD40特异结合，阻断或促进CD40-CD40L 相互作用。本发明的抗体是激动型CD40抗体，激活CD40信号通路，促进免疫细胞例如树突细 胞的成熟。本发明的抗体或其抗原结合部分具有与现有技术CD40抗体相当或更好的体内抗 肿瘤效果，且毒性相当或更低。肿瘤在抗体停止施用后不再生长，甚至完全消失。 本发明还提供含有本发明抗体或其抗原结合部分的免疫交联物，该抗体或其抗原 结合部分与治疗剂例如细胞毒素相连接。本发明还提供含有本发明抗体或其抗原结合部分 的双特异性分子，该抗体或其抗原结合部分连接有第二功能基团，例如，第二抗体，该第二 功能基团具有不同于本发明抗体或其结合部分的结合特异性。在另一方面，本发明的抗体 或其抗原结合部分可以是嵌合抗原受体(CAR)的一部分。本发明的抗体或其抗原结合部分 可以由溶瘤病毒编码或由溶瘤病毒携带使用。 本发明还提供组合物，其包含本发明的抗体或其抗原结合部分、或免疫交联物或 双特异性分子或CAR，以及药学上可接受的载体。 本发明还包括编码本发明抗体或其抗原结合部分的核酸分子，以及包含该核酸的 表达载体以及包含该表达载体的宿主细胞。本发明还提供使用含有上述表达载体的宿主细 胞来制备CD40抗体的方法，包括以下步骤：(i)在宿主细胞中表达抗体，以及(ii)从宿主细 胞或其培养物中分离抗体。 另一方面，本发明提供一种增强受试者免疫应答的方法，包括向受试者施用治疗 有效量的本发明抗体或其抗原结合部分。在一些实施方式中，方法包括施用本发明的组合 物、双特异性分子、免疫交联物、CAR-T细胞、或编码抗体或携带抗体的溶瘤病毒。 在另一方面，本发明提供一种治疗受试者中炎性疾病、感染性疾病、动脉粥样硬化 5 CN 111548415 A 说 明 书 4/31 页 血栓或呼吸系统疾病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本发明抗体或抗原结合部 分。在一些实施方式中，方法包括施用本发明的组合物、双特异性分子、免疫交联物、CAR-T 细胞、或编码抗体或携带抗体的溶瘤病毒。在一些实施方式中，可以与本发明抗体或其抗原 结合部分一起施用其他药物，例如抗炎剂和抗微生物剂。在一些实施方式中，炎性疾病包括 自免疫疾病。 在另一个方面，本发明提供在受试者中预防、治疗或减缓癌症疾病的方法，包括向 受试者施用治疗有效量的本发明抗体或其抗原结合部分。癌症可以是实体瘤或非实体瘤， 包括但不限于，B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、肠腺癌、胰腺 癌、肠癌、胃肠癌、前列腺癌、膀胱癌、肾癌、卵巢癌、子宫颈癌、乳癌、肺癌和鼻咽癌。在一些 实施方式中，该方法包括施用本发明的组合物、双特异性分子、免疫交联物、CAR-T细胞、或 编码或承载抗体的溶瘤病毒。在一些实施方式中，至少一种其他抗癌抗体可以与本发明抗 体或其抗原结合部分一起施用，例如VISTA抗体、PD-1抗体、PD-L1抗体、LAG-3抗体和/或 CTLA-4抗体。在另一个实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合部分与细胞因子(例如IL-2 和/或IL-21)或共刺激抗体(例如CD137抗体和/或GITR抗体)一起施用。在另一个实施方式 中，本发明的抗体或其抗原结合部分可以与化疗剂一起施用，该化疗剂可以是细胞毒性剂， 例如表阿霉素、奥沙利铂、和/或5-氟尿嘧啶(5-FU)。本发明的抗体可以是例如鼠源、人源、 嵌合或人源化抗体。 基于以下具体描述和实施例，当前公开内容的其他特征和优势之处将会更加明 晰，具体描述和实施例不应解读为限制性的。在本申请中引用的所有文献、Genbank记录、专 利和已公开专利申请的内容通过引用的方式明确地包含在本文中。 附图描述 图1示出108个杂交瘤克隆的CD40信号通路激动活性排名。 图2示出CD40抗体对CD40-CD40L相互作用的促进或抑制性作用，其中抗体16A6、 7B4和13A2促进CD40-CD40L相互作用(A)而抗体92F6抑制CD40-CD40L相互作用(B)。 图3示出CD40抗体的CD40信号通路激动活性。 图4示出经CD86(A)、CD80(B)和CD83(C)的染色而测量的CD40抗体对树突细胞成熟 的促进作用。 图5示出CD40嵌合抗体对HEK293A/人CD40细胞(A)或HEK293A/猴CD40细胞(B)的结 合力。 图6示出CD40嵌合抗体的CD40信号通路激动活性。 图7示出经CD86染色而测量的CD40抗体对树突细胞成熟的促进作用。 图8示出嵌合和人源化CD40抗体对人或猴CD40的结合力，其中嵌合和人源化13A2 抗体(A)以及人源化7B4抗体(B)与人CD40结合，且嵌合和人源化13A2抗体(C)以及人源化 7B4抗体(D)与猴CD40结合。 图9示出嵌合和人源化7B4抗体(A)以及嵌合和人源化13A2抗体(B)的CD40信号通 路激动活性。 图10示出经CD86(A)、CD80(B)和CD83(C)的染色而测量的CD40抗体对供体1体内树 突细胞成熟的促进作用。 图11示出经CD86(A)和CD80(B)染色而测量的CD40抗体对供体2体内树突细胞成熟 6 CN 111548415 A 说 明 书 5/31 页 的促进作用。 图12示出经CD86(A)、CD80(B)和IL-12(C)的染色而测量的供体3体内CD40抗体对 树突细胞成熟的促进作用。 图13示出由SPR测量的嵌合或人源化CD40抗体7B4(A)、7B4-VH0VL0(B)、7B4- VH2VL2(C)、7B4-VH2VL3(D)、7B4-VH3VL2(E)、7B4-VH3VL3(F)、13A2(G)、13A2-VH0VL0(H)、 13A2-VH2VL2(I)、13A2-VH2VL3(J)、13A2-VH3VL2(K)和13A2-VH3VL3(L)、以及参照抗体 RO7009789(M)和ADC1013(N)对人CD40的结合亲和力。 图14示出嵌合或人源化CD40抗体对全长CD40 ECD或其截短体(A)以及对全长CD40 ECD或其突变体(B)的结合亲和力。 图15示出人源化CD40抗体7B4-VH2VL2(A)和13A2-VH3VL3(B)对人CD40的结合特异 性。 图16示出经CD86(A)、CD80(B)和CD83(C)的染色而测量的基因改造CD40抗体对树 突细胞成熟的作用。 图17示出施用人源化CD40抗体或对照药物的各组的平均肿瘤体积(A)，以及溶剂 组(B)、7B4VH2VL2组(C)、13A2VH3VL3组(D)、RO7009789组(E)和APX005(F)组的个体肿瘤体 积。 图18示出施用人源化CD40抗体或对照药物的各组的平均动物体重。 图19示出人源化CD40抗体对肿瘤浸润CD4 T细胞(A)和CD8 T细胞(B)增殖的效果。 图20示出经CD80、CD83和CD86的染色而测量人源化CD40抗体对肿瘤浸润树突细胞 (CD45 CD11c 细胞)成熟的促进作用。
本发明提供一种与人CD40特异结合的分离的单克隆抗体。还提供编码该抗体的核酸分子，以及用于表达该抗体的表达载体、宿主细胞和方法。本发明还提供包含该抗体的免疫交联物、双特异性分子、嵌合抗原受体、溶瘤病毒和药物组合物，以及使用本发明抗体的治疗方法。
背景技术：
CD40，又称为肿瘤坏死因子受体超家族成员5或TNFR5，是一种跨膜共刺激蛋白，在 抗原提呈细胞例如B细胞、巨噬细胞和树突细胞上表达。该蛋白与CD40L(CD154)，一种主要 由激活的T淋巴细胞和血小板表达的主要配体，的结合，激活抗原提呈细胞，激发多个下游 信号通路，包括免疫细胞激活和增殖、以及细胞因子和趋化因子的生产，增强细胞功能和免 疫功能(Ara A et al，.(2018)Immunotargets Ther 7：55-61)。 另一方面，CD40也存在于非免疫细胞和肿瘤上(Costello et al.，(1999)Immunol Today20(11)：488-493；Tong et al.，(2003)Cancer Gene Ther 10(1)：1-13；Lee et al.， (2014)Curr Cancer Drug Targets 14(7)：610-620；Ara A et al，.(2018)同上)，并报道 其与多种免疫疾病(包括自免疫疾病)、动脉粥样硬化血栓、癌症和呼吸系统疾病有关联。例 如，CD40/CD40L表达在动脉粥样化相关细胞中上调。CD40在几乎所有的B细胞恶性肿瘤以及 高达70％的实体瘤中表达，且某些B细胞恶性肿瘤中的CD40配体结合会促成多种保护肿瘤 细胞免受细胞凋亡的因子的表达增加(Lee et al.，(1999)Proc Natl Acad Sci USA96： 9136-9141)。 尽管CD40在肿瘤发生中的作用非常复杂，已经开发出一些CD40抗体用于潜在的肿 瘤治疗。CP-870，893，开发的完全人源的IgG2激动型CD40抗体，可以激活树突细胞，并已在 多种背景的晚期癌症病患中显示出了临床效用(Vonderheide et al .，(2007)J Clin Oncol 25(7)：876-883；Gladue et al.，(2011)Cancer Immunol Immunother 60(7)：1009- 1017；Beatty et al.，(2013)Expert Rev Anticancer Ther 17(2)：175-186；Vonderheide et al.，(2013)Oncoimmunology 2(1)：e23033；Nowak et al.，Ann Oncol 26(12)：2483- 2490；2015U.S.patent no.7,338,660)。Dacetuzumab，也称作SGN-40，是Seattle Genetics 开发的人源化IgG1激动型CD40抗体，每周静脉施用下显示出抗肿瘤活性，特别是在患有弥 漫性大B细胞性淋巴瘤的患者中。临床前数据也示出Dacetuzumab与其他药物例如CD20单抗 利妥昔单抗的协同效应(Lapalombella et al.，(2009)Br J Haematol 144(6)：848-855； Hussein et al.，(2010)Haematologica 95(5)：845-848；de Vos et al.，(2014)J He- matol Oncol 7：44)。Chi Lob 7/4，英国癌症研究中心(Cancer Research UK)开发的嵌合 IgG1激动型抗人CD40抗体，正在进行初始的临床测试。21名患者中的11名病情稳定，而没有 部分或完全缓解(Chowdhury et al.，(2014)Cancer Immunol Res 2(3)：229-240)。此外， 3 CN 111548415 A 说 明 书 2/31 页 拮抗型CD40抗体也在人多发性骨髓瘤和慢性淋巴细胞白血病中显示出抗肿瘤作用 (Bensinger W et al.，(2012)Br J Haematol.159(1)：58-66；Mohammad Luqman et al.， (2008)Blood 112：711-720)。 需要更多具有更好药理特性的CD40抗体。
技术实现要素：
本发明提供一种分离的单克隆抗体，例如，与CD40(例如，人CD40和猴CD40)结合的 鼠源、人源、嵌合或人源化的单克隆抗体。其可以是激活CD40信号通路的激动型CD40抗体。 本发明的抗体可以用于多种应用，包括检测CD40蛋白，治疗或预防CD40相关疾病， 例如癌症、炎性疾病、感染性疾病、动脉粥样硬化血栓、和呼吸系统疾病。 因此，在一个方面，本发明涉及一种分离的单克隆抗体(例如，人源化抗体)、或其 抗原结合部分，含有重链可变区，该重链可变区含有CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中，CDR1 区、CDR2区和CDR3区分别包含(1)SEQ ID NOs：1、8和15；(2)SEQ ID NOs：1、9和15；(3)SEQ ID NOs：2、9和15；(4)SEQ ID NOs：3、10和16；(5)SEQ ID NOs：4、11和17；(6)SEQ ID NOs：5、 12和18；(7)SEQ ID NOs：6、13和19；或(8)SEQ ID NOs：7、14和20的氨基酸序列；或分别包含 与这些序列具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列，其中该抗体 或其抗原结合部分与CD40结合。 在一个方面，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包含重链可变区，其 包含SEQ ID NOs：37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50的氨基酸序列，或包含 与这些序列具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列，其中该抗体 或其抗原结合部分与CD40结合。 在一个方面，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分含有轻链可变区，该 轻链可变区含有CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中，CDR1区、CDR2区和CDR3区分别包含(1)SEQ ID NOs：21、27和31；或(2)SEQ ID NOs：22、28和32；(3)SEQ ID NOs：23、29和33；(4)SEQ ID NOs：24、27和34；(5)SEQ ID NOs：25、27和35；或(6)SEQ ID NOs：26、30和36的氨基酸序列； 或分别包含与这些序列具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列， 其中该抗体或其抗原结合部分与CD40结合。 在一个方面，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包含轻链可变区，其 包含SEQ ID NOs：51、52、53、54、55、56、57、58、59、60或61，或包含与这些序列具有至少 80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的序列，其中该抗体或其抗原结合部分与CD40结 合。 在一个方面，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻 链可变区，各包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中重链可变区CDR1区、CDR2区和CDR3区，轻链 可变区CDR1区、CDR2区和CDR3区分别包含(1)SEQ ID NOs：1、8、15、21、27和31；(2)SEQ ID NOs：1、9、15、21、27和31；(3)SEQ ID NOs：2、9、15、21、27和31；(4)SEQ ID NOs：3、10、16、22、 28和32；(5)SEQ ID NOs：4、11、17、23、29和33；(6)SEQ ID NOs：5、12、18、24、27和34；(7)SEQ ID NOs：6、13、19、25、27和35；或(8)SEQ ID NOs：7、14、20、26、30和36的氨基酸序列；或分别 包含与这些序列具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列，其中该 抗体或其抗原结合部分与CD40结合。 4 CN 111548415 A 说 明 书 3/31 页 在一个实施方式中，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包含重链可变 区和轻链可变区，该重链可变区和轻链可变区分别包含(1)SEQ ID NOs：37和51；(2)SEQ ID NOs：38和52；(3)SEQ ID NOs：39和53；(4)SEQ ID NOs：40和54；(5)SEQ ID NOs：41和55；(6) SEQ ID NOs：44和58；(7)SEQ ID NOs：45和59；(8)SEQ ID NOs：46和60；(9)SEQ ID NOs：46 和61；(10)SEQ ID NOs：47和60；(11)SEQ ID NOs：47和61；(12)SEQ ID NOs：48和59；(13) SEQ ID NOs：49和60；(14)SEQ ID NOs：49和61；(15)SEQ ID NOs：50和60；或(16)SEQ ID NOs：50和61的氨基酸序列；或分别包含与这些序列具有至少80％、85％、90％、95％、98％或 99％同一性的氨基酸序列，其中该抗体或其抗原结合部分与CD40结合。 在一个实施方式中，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包含重链和轻 链，该重链包含重链可变区和重链恒定区，轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，重链 可变区和轻链可变区含有上述的氨基酸序列，重链恒定区包含SEQ ID NOs：62、63或64的氨 基酸序列，轻链恒定区包含SEQ ID NOs：65或66的氨基酸序列，或包含与这些序列具有至少 80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列，其中该抗体或其抗原结合部分与 CD40结合。 本发明的抗体在一些实施方式中包含两条重链和两条轻链，或由两条重链和两条 轻链构成，其中各重链包含上述的重链恒定区序列、重链可变区序列或CDR序列，且各轻链 包含上述的轻链恒定区序列、轻链可变区序列或CDR序列。本发明的抗体可以是全长抗体， 例如IgG1、IgG2或IgG4亚型。在一些实施方式中，本发明的抗体可以是单链抗体，或由抗体 片段构成，例如Fab或Fab‘2片段。 本发明的抗体或其抗原结合部分与人或猴CD40特异结合，阻断或促进CD40-CD40L 相互作用。本发明的抗体是激动型CD40抗体，激活CD40信号通路，促进免疫细胞例如树突细 胞的成熟。本发明的抗体或其抗原结合部分具有与现有技术CD40抗体相当或更好的体内抗 肿瘤效果，且毒性相当或更低。肿瘤在抗体停止施用后不再生长，甚至完全消失。 本发明还提供含有本发明抗体或其抗原结合部分的免疫交联物，该抗体或其抗原 结合部分与治疗剂例如细胞毒素相连接。本发明还提供含有本发明抗体或其抗原结合部分 的双特异性分子，该抗体或其抗原结合部分连接有第二功能基团，例如，第二抗体，该第二 功能基团具有不同于本发明抗体或其结合部分的结合特异性。在另一方面，本发明的抗体 或其抗原结合部分可以是嵌合抗原受体(CAR)的一部分。本发明的抗体或其抗原结合部分 可以由溶瘤病毒编码或由溶瘤病毒携带使用。 本发明还提供组合物，其包含本发明的抗体或其抗原结合部分、或免疫交联物或 双特异性分子或CAR，以及药学上可接受的载体。 本发明还包括编码本发明抗体或其抗原结合部分的核酸分子，以及包含该核酸的 表达载体以及包含该表达载体的宿主细胞。本发明还提供使用含有上述表达载体的宿主细 胞来制备CD40抗体的方法，包括以下步骤：(i)在宿主细胞中表达抗体，以及(ii)从宿主细 胞或其培养物中分离抗体。 另一方面，本发明提供一种增强受试者免疫应答的方法，包括向受试者施用治疗 有效量的本发明抗体或其抗原结合部分。在一些实施方式中，方法包括施用本发明的组合 物、双特异性分子、免疫交联物、CAR-T细胞、或编码抗体或携带抗体的溶瘤病毒。 在另一方面，本发明提供一种治疗受试者中炎性疾病、感染性疾病、动脉粥样硬化 5 CN 111548415 A 说 明 书 4/31 页 血栓或呼吸系统疾病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本发明抗体或抗原结合部 分。在一些实施方式中，方法包括施用本发明的组合物、双特异性分子、免疫交联物、CAR-T 细胞、或编码抗体或携带抗体的溶瘤病毒。在一些实施方式中，可以与本发明抗体或其抗原 结合部分一起施用其他药物，例如抗炎剂和抗微生物剂。在一些实施方式中，炎性疾病包括 自免疫疾病。 在另一个方面，本发明提供在受试者中预防、治疗或减缓癌症疾病的方法，包括向 受试者施用治疗有效量的本发明抗体或其抗原结合部分。癌症可以是实体瘤或非实体瘤， 包括但不限于，B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、肠腺癌、胰腺 癌、肠癌、胃肠癌、前列腺癌、膀胱癌、肾癌、卵巢癌、子宫颈癌、乳癌、肺癌和鼻咽癌。在一些 实施方式中，该方法包括施用本发明的组合物、双特异性分子、免疫交联物、CAR-T细胞、或 编码或承载抗体的溶瘤病毒。在一些实施方式中，至少一种其他抗癌抗体可以与本发明抗 体或其抗原结合部分一起施用，例如VISTA抗体、PD-1抗体、PD-L1抗体、LAG-3抗体和/或 CTLA-4抗体。在另一个实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合部分与细胞因子(例如IL-2 和/或IL-21)或共刺激抗体(例如CD137抗体和/或GITR抗体)一起施用。在另一个实施方式 中，本发明的抗体或其抗原结合部分可以与化疗剂一起施用，该化疗剂可以是细胞毒性剂， 例如表阿霉素、奥沙利铂、和/或5-氟尿嘧啶(5-FU)。本发明的抗体可以是例如鼠源、人源、 嵌合或人源化抗体。 基于以下具体描述和实施例，当前公开内容的其他特征和优势之处将会更加明 晰，具体描述和实施例不应解读为限制性的。在本申请中引用的所有文献、Genbank记录、专 利和已公开专利申请的内容通过引用的方式明确地包含在本文中。 附图描述 图1示出108个杂交瘤克隆的CD40信号通路激动活性排名。 图2示出CD40抗体对CD40-CD40L相互作用的促进或抑制性作用，其中抗体16A6、 7B4和13A2促进CD40-CD40L相互作用(A)而抗体92F6抑制CD40-CD40L相互作用(B)。 图3示出CD40抗体的CD40信号通路激动活性。 图4示出经CD86(A)、CD80(B)和CD83(C)的染色而测量的CD40抗体对树突细胞成熟 的促进作用。 图5示出CD40嵌合抗体对HEK293A/人CD40细胞(A)或HEK293A/猴CD40细胞(B)的结 合力。 图6示出CD40嵌合抗体的CD40信号通路激动活性。 图7示出经CD86染色而测量的CD40抗体对树突细胞成熟的促进作用。 图8示出嵌合和人源化CD40抗体对人或猴CD40的结合力，其中嵌合和人源化13A2 抗体(A)以及人源化7B4抗体(B)与人CD40结合，且嵌合和人源化13A2抗体(C)以及人源化 7B4抗体(D)与猴CD40结合。 图9示出嵌合和人源化7B4抗体(A)以及嵌合和人源化13A2抗体(B)的CD40信号通 路激动活性。 图10示出经CD86(A)、CD80(B)和CD83(C)的染色而测量的CD40抗体对供体1体内树 突细胞成熟的促进作用。 图11示出经CD86(A)和CD80(B)染色而测量的CD40抗体对供体2体内树突细胞成熟 6 CN 111548415 A 说 明 书 5/31 页 的促进作用。 图12示出经CD86(A)、CD80(B)和IL-12(C)的染色而测量的供体3体内CD40抗体对 树突细胞成熟的促进作用。 图13示出由SPR测量的嵌合或人源化CD40抗体7B4(A)、7B4-VH0VL0(B)、7B4- VH2VL2(C)、7B4-VH2VL3(D)、7B4-VH3VL2(E)、7B4-VH3VL3(F)、13A2(G)、13A2-VH0VL0(H)、 13A2-VH2VL2(I)、13A2-VH2VL3(J)、13A2-VH3VL2(K)和13A2-VH3VL3(L)、以及参照抗体 RO7009789(M)和ADC1013(N)对人CD40的结合亲和力。 图14示出嵌合或人源化CD40抗体对全长CD40 ECD或其截短体(A)以及对全长CD40 ECD或其突变体(B)的结合亲和力。 图15示出人源化CD40抗体7B4-VH2VL2(A)和13A2-VH3VL3(B)对人CD40的结合特异 性。 图16示出经CD86(A)、CD80(B)和CD83(C)的染色而测量的基因改造CD40抗体对树 突细胞成熟的作用。 图17示出施用人源化CD40抗体或对照药物的各组的平均肿瘤体积(A)，以及溶剂 组(B)、7B4VH2VL2组(C)、13A2VH3VL3组(D)、RO7009789组(E)和APX005(F)组的个体肿瘤体 积。 图18示出施用人源化CD40抗体或对照药物的各组的平均动物体重。 图19示出人源化CD40抗体对肿瘤浸润CD4 T细胞(A)和CD8 T细胞(B)增殖的效果。 图20示出经CD80、CD83和CD86的染色而测量人源化CD40抗体对肿瘤浸润树突细胞 (CD45 CD11c 细胞)成熟的促进作用。
