技术摘要：
本发明公开了一种牛细粒棘球蚴病的特异性检测抗原及其应用。所述牛细粒棘球蚴病的特异性检测抗原蛋白质，是如下(a1)或(a2)：(a1)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白质；(a2)将(a1)限定的蛋白质的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加，且功能相  全部
背景技术：
细粒棘球蚴病为一种严重的全球性的人畜共患病，人或反刍动物主要通过误食了 细粒棘球绦虫排出的虫卵而发病，被称为“虫癌”。目前，关于细粒棘球蚴病诊断技术的研究 投入较少，最常用的诊断方法就是解剖查看虫体，随着分子技术和免疫技术的发展，现在有 分子诊断，比如LAMP，免疫学诊断，如ELISA试剂盒法、胶体金等，但从临床应用发现，这些方 法检测的准确性不高、方便性不强，无法便于基层工作者操作检测。动物感染细粒棘球蚴 时，传统的诊断方法为屠宰时诊断，然而，在屠宰过程中，典型的囊状组织也许是炎性导致 的肉芽肿，导致诊断错误；血清学诊断包括胶体金免疫层析法、酶联免疫吸附试验。这些方 法通常使用的是天然棘球囊液，但使用天然棘球囊液的缺点是易于其他患病动物的血清发 生交叉反应，制备昂贵且难以进行商品化。虽然，细粒棘球蚴病在人类诊断方面已有很多研 究，但在诊断动物方面的研究甚少，且动物在自然感染该病时，抗体反应不明显，易导致诊 断错误。因此提高细粒棘球蚴的免疫诊断，寻找一种可靠的抗原，建立一种高效、准确、特异 性好而又简便的诊断技术至关重要。 因此，基于细粒棘球蚴转录组的数据，筛选出Hyppthetical  EGR_01530。 Hypothetical  protein  EGR_01530含有一个半胱氨酸的保守结构域，研究报道表明在线虫 体内的半胱氨酸蛋白可以调节其自身的蛋白酶活性、宿主的蛋白酶活性和调控宿主的免疫 反应。并且据Josiah  Ochieng等人报道称相关的半胱氨酸超家族可以确保寄生虫在宿主体 内生存。 此外，最近，基于表位的抗原已经成为实现高敏感性和特异性捕获机体所产生的 抗体，具有成功替代重组抗原的潜力。利用基于表位抗原的诊断方法已经成功应用于各种 疾病，例如、利什曼病、锥体虫病、钩端螺旋体病和弓形虫病。并且，随着生物信息学的发展， 为此类抗原的设计提供了新的策略。这些技术使重组蛋白的设计和后期的合成成为可能， 且这些重组蛋白具有新的抗原性特征，因此，本发明也选取了基于表位的抗原。作为牛细粒 棘球蚴层析试纸条的研制。
技术实现要素：
为此，本发明提供一种牛细粒棘球蚴病的特异性检测抗原及其应用。 本发明所提供的牛细粒棘球蚴病的特异性检测抗原，是如下(a1)或(a2)： (a1)氨基酸序列如SEQ  ID  NO.1所示的蛋白质； (a2)将(a1)限定的蛋白质的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或 缺失和/或添加，且功能相同的蛋白质。 编码所述抗原蛋白质的核酸分子也是本发明的保护范围。 3 CN 111574608 A 说　明　书 2/17 页 优选地，所述核酸分子是编码权利要求1所述的蛋白质的基因，所述基因是如下任 一所述的DNA分子： (b1)编码序列如SEQ  ID  NO.2所示的DNA分子； (b2)在严格条件下与(b1)限定的DNA分子杂交且编码权利要求1所述的蛋白质的 DNA分子； (b3)与(b1)或(b2)限定的DNA分子具有90％以上同源性且编码权利要求1所述的 蛋白的DNA分子。 本发明还提供所述蛋白质配对用于牛细粒棘球蚴病的抗原蛋白质，是如下(c1)或 (c2)： (c1)氨基酸序列如SEQ  ID  NO.3所示的蛋白质； (c2)将(c1)限定的蛋白质的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或 缺失和/或添加，且功能相同的蛋白质。 编码所述抗原蛋白质的核酸分子，也属于本发明的保护范围。 优选地，所述核酸分子是编码权利要求4所述的蛋白质的基因，所述基因是如下任 一所述的DNA分子： (d1)编码序列如SEQ  ID  NO.4所示的DNA分子； (d2)在严格条件下与(d1)限定的DNA分子杂交且编码权利要求4所述的蛋白质的 DNA分子； (d3)与(d1)或(d2)限定的DNA分子具有90％以上同源性且编码权利要求4所述的 蛋白的DNA分子。 含上述的核酸分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌也属于本发明的 保护范围。 本发明中，所述的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在如下(a)或(b)中的 应用也属于本发明的保护范围： (a)制备用于检测或者辅助检测牛细粒棘球蚴病的试剂盒； (b)检测或者辅助检测牛细粒棘球蚴病。 含有是上述所述的核酸分子或所述的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌； 具有(1)或(2)功能的试剂盒也属于本发明的保护范围： (1)检测或者辅助检测牛细粒棘球蚴病抗体； (2)检测或者辅助检测动物是否感染牛细粒棘球蚴病。 优选地，所述试剂盒为牛细粒棘球病时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其中，结合垫 包被的抗原为权利1所述的蛋白质，检测线包被的抗原为权利要求4所述的蛋白质。 本发明具有如下优点： 本发明表达了基于合成表位蛋白来作为诊断抗原，将antigen  B  subunit  1、 antigen  B  subunit  2,antigen  B  subunit  4、EG95、antigen  protein、Ag5、EPC1根据其B 细胞表位和二级结构的生物信息学分析，截取了部分肽段，用linker重新拼接成重组蛋白 质，经过亲和层析纯化，作为时间荧光微球标记的抗原；同时，时间分辨荧光免疫层析技术 结合了免疫标记和免疫层析的特点，以时间分辨荧光微球作为示踪物，制备免疫层析试纸 条在临床上操作简单、诊断快速、灵敏度高、特异性强。 4 CN 111574608 A 说　明　书 3/17 页 附图说明 为了更清楚地说明本发明的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方 式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅 仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据 提供的附图引伸获得其它的实施附图。 本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供 熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的 实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功 效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。 图1为本发明的pET-28a-Eg-H1重组表达质粒的酶切验证电泳图； 图2为本发明的Eg-H1-His重组蛋白质SDS-PAGE电泳图； 图3为本发明的Eg-H1-His重组蛋白质Western-blot鉴定图； 图4为本发明的pET-28a-Hypothetical  protein  EGR_01530重组表达质粒的酶切 验证电泳图； 图5为本发明的pET-28a-Hypothetical  protein  EGR_01530重组蛋白质SDS-PAGE 电泳图； 图6为本发明的pET-28a-Hypothetical  protein  EGR_01530重组蛋白质Western- blot鉴定图； 图7为本发明的时间分辨荧光免疫层析试纸条的结构示意图，其中：1-PVC底板；2- 样品垫；3-结合垫；4-吸水纸；5-硝酸纤维素薄膜；6-检测线T；7-质控线C； 图8为本发明的时间分辨荧光免疫层析试纸条的特异性检测结果图，其中：1-猪旋 毛虫病阳性血清，2-牛肝片吸虫病阳性血清，3-牛脑包虫病阳性血清，4-牛细粒棘球蚴病阳 性血清； 图9为本发明的时间分辨荧光免疫层析试纸条的特异性检测结果图，其中：1-6：血 清依次按1:100，1:200，1:400，1:800，1:1600，1:3200稀释；7：样品稀释液。