技术摘要：
本发明提供了一种正品球药隔重楼的鉴别方法，它是采用高效液相色谱法检测重楼皂苷，其中，正品球药隔重楼含有重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H，球药隔重楼伪品只含重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H，或不含重楼皂苷。本发明还提供了一种球药隔重楼正品与伪品或混伪品的鉴别方  全部
背景技术：
中药重楼，以“蚤休”之名始载于《神农本草经》，具有清热解毒，消肿止痛，凉肝定 惊之功效，药用价值显著，药用历史悠久，历版《中国药典》收载为云南重楼Paris  polyphylla  Smith  var.yunnanensis(Franch.)Hand .-Mazz.和七叶一枝花P.polyphylla  Smith  var.chinensis(Franch.)Hara的干燥根茎。随着重楼资源的进一步开发和利用，球 药隔重楼被《四川省藏药材标准》2014年版收载，是四川省的法定重楼基原。由于其药材生 长快、合格率高，比云南重楼更适应低海拔的湿热环境，海拔下限可达600m，深受广大药农 青睐，近年来的种植面积迅速扩大。球药隔重楼广泛分布于我国西南及华中地区，在《中国 植物志》和《Flora  of  China》的分类系统中，球药隔重楼种下含1变种，即具柄重楼Paris  fargesii  var.petiolata，而在李恒分类系统中，球药隔重楼含2个变种：宽瓣球药隔重楼 P .faresii  var .latipetala  H .Li  et  V .G .Soukup、短瓣球药隔重楼P .fargesii  var .brevipetalata (Huang  et  Yang) H .Li，2者和原变种共同组成了球药隔组 Sect.Fargesianae  H.Li。虽然具柄重楼形态上近似于球药隔重楼，但在李恒分类系统中被 置于金线重楼P .delavayi  Franch .种下的变种，异名为卵叶重楼Paris  delavayi  Franch.var.petiolata，这表明《中国植物志》系统与李恒系统在关于球药隔重楼的种下分 类，以及具柄重楼的系统位置上存在不同意见。 2017～2019年通过在主产区调查球药隔重楼人工种植业时，很多种植户介绍，在 引种的球药隔重楼中不但混有具柄重楼，而且还混有另一种重楼属植物，形态上和球药隔 重楼也十分相似，未开花的幼小植株更容易混淆，甚至有商贩用其冒充球药隔重楼种苗出 售。但是其成熟植株的叶片较之球药隔重楼更为光亮，呈现金属光泽，经鉴定，为2017年胡 光万等人发表的重楼属一新种：亮叶重楼P.nitida  GWHu,ZWang&QFWang。显然，在球药隔重 楼的野生变家种过程中，种源混乱已经成为制约种植规范化和药材品质稳定的一个突出问 题，但是关于球药隔重楼的研究，目前只集中于化学成分的鉴定和分析，生理活性成分的筛 选，关于其品种整理和混伪品的鉴定技术仍然缺乏报道，阻碍了球药隔重楼的进一步开发 利用和产业的健康发展。
技术实现要素：
为解决上述问题，本发明提供了一种正品球药隔重楼的鉴别方法，它是采用高效 液相色谱法检测重楼皂苷，其中，正品球药隔重楼含有重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷 H，球药隔重楼伪品只含重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H，或不含重楼皂苷。 进一步地，所述正品球药隔重楼为球药隔重楼原变种、宽瓣球药隔重楼、短瓣球药 隔重楼。 进一步地，所述球药隔重楼伪品为具柄重楼、亮叶重楼。 4 CN 111610271 A 说　明　书 2/15 页 更进一步地，所述具柄重楼只含重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H。 更进一步地，所述亮叶重楼不含重楼皂苷。 进一步地，所述高效液相色谱法检测重楼皂苷，包括如下步骤： 1)对照品溶液的制备：分别取重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H对照品，加甲 醇溶解，制成对照品溶液； 2)供试品溶液的制备：取球药隔重楼，粉碎过筛，加乙醇回流提取，提取液过滤，取 续滤液作为供试品溶液； 3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，色谱条件如下： 色谱柱：以胆固醇基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A；以水为流 动相B；梯度洗脱程序如下： 进一步地，步骤(1)中，所述重楼皂苷为重楼皂苷VII、重楼皂苷H、重楼皂苷VI、重 楼皂苷I、重楼皂苷II和/或重楼皂苷V；所述对照品溶液每1ml含各重楼皂苷0.1～1mg。 进一步地，步骤(2)中，所述待测样品与乙醇溶液的质量体积比为0.2～0 .8g： 25ml，优选0.5g：25ml；所述乙醇溶液浓度为80～90％v/v，优选95％v/v，所述回流提取温度 82℃，时间30min。 进一步地，所述色谱柱为COSMOSIL  Cholester，规格4.6mm  I  D×250mm。 进一步地，步骤(3)中，所述色谱条件中检测波长203nm，柱温30℃，流速1.0mL· min-1，进样量10μL。 本发明还提供了一种球药隔重楼正品与伪品或混伪品的鉴别方法，它包括如下步 骤： a、取花期的待测样品，观察性状，其中，正品球药隔重楼药凸呈球形，叶片呈蜡样 光泽，伪品具柄重楼药凸呈棒状，伪品亮叶重楼叶片呈金属光泽； b、取待测样品，粉碎，观察显微特征，其中，正品球药隔重楼淀粉粒中无脐点，球药 隔重楼伪品或混伪品淀粉粒中有脐点； c、取待测样品，按照前述高效液相色谱方法检测，重楼皂苷，其中，正品球药隔重 楼含有重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H，球药隔重楼伪品只含重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷 H，或不含重楼皂苷。 进一步地，步骤b所述伪品为亮叶重楼，其脐点位置偏向一端；伪品为具柄重楼，其 脐点位置居中。 5 CN 111610271 A 说　明　书 3/15 页 利用本发明提供的鉴别方法可以准确、有效的鉴别市场上常见的正品球药隔重楼 及同属近缘易混种，其中正品球药隔重楼为球药隔重楼原变种、宽瓣球药隔重楼、短瓣球药 隔重楼，同属近缘易混种为具柄重楼、亮叶重楼；本发明方法通过高效液相色谱法分析比对 球药隔重楼中甾体皂苷成分——重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ和重楼皂苷H的有无，达到鉴别球 药隔重楼的目的，该方法操作简单、高效快速、重现性好、成本低。高效液相色谱法与球药隔 重楼外规特征及显微特征结合，能完全区别球药隔重楼正品、近缘易混种伪品和混伪品，实 现正品球药隔重楼的质量控制，为球药隔重楼药材的鉴别及利用提供可靠依据，应用前景 良好。 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。 以下通过实施例形式的