技术摘要：
本发明涉及一种诊断试剂盒，尤其是一种非小细胞肺癌诊断试剂盒；属于诊断试剂盒技术领域。一种非小细胞肺癌诊断试剂盒，试剂盒含有miR‑4286的实时荧光定量PCR引物，所述引物分别为：SEQ ID NO：1上游引物序列：5'‑GCGTCACCCCACTCCT‑3'；SEQ ID NO：2通用下游引物序  全部
背景技术：
公开号为CN102121047A的中国发明专利，公开了一种中期因子表达量的实时荧光 定量RT-PCR检测试剂盒。该试剂盒是基于对中期因子（MK）的研究，而发展起来的一种诊断 手段。多项有关  MK  功能的研究证实其参与肿瘤的生长、分化及肿瘤血管生成等过程，表明  MK  在肿瘤演化过程中可能具有直接作用。由于  MK  特异表达于多种肿瘤组织，因而  MK  成 为肿瘤治疗的新靶点。 然而，MK因子与多种肿瘤都相关，仅通过该试剂盒不能很好地对肿瘤进行分型。而 非小细胞肺癌（non-small  cell  lung  cancer,  NSCLC）是我国最常见的恶性肿瘤之一，其 发病率和死亡率位于世界之首，侵袭、转移是其致死的主要原因，但其转移的机制一直未能 阐明。微小RNA （microRNAs,  miRNAs）被认为通过作用于癌基因和抑癌基因的转录后调控 在NSCLC 的发生、转移中起着重要的作用。 miR-4286是一个在人胚胎干细胞早期分化进程中筛选出的新发现的miRNA，在黑 色素瘤、食管癌及直肠癌的治疗中可观察到miR-4286表达的上调或显著改变。但目前，仍未 有基于该发现的非小细胞肺癌诊断试剂盒的报导。
技术实现要素：
本发明要解决上述技术问题，从而提供一种非小细胞肺癌诊断试剂盒。 本发明解决上述问题的技术方案如下： 一种非小细胞肺癌诊断试剂盒，试剂盒含有miR-4286 的实时荧光定量PCR  引物，所述 引物分别为： SEQ  ID  NO  ：1上游引物序列：5'-GCGTCACCCCACTCCT-3'； SEQ  ID  NO  ：2通用下游引物序列：5'-CGCTCACCCCACTCCT-3'。 作为优选，所述试剂盒还包括PCR  反应常用的酶和试剂；所述试剂包括：组织总 RNA 提取试剂、RNA  加polyA 试剂、逆转录试剂和定量PCR 试剂； 其中，逆转录试剂包括miR-4286 的特异逆转录引物，其序列为： SEQ  ID  NO  ：3引物序列： 5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACGGTACC-3'； 逆转录试剂还包括内参U6的逆转录引物，其序列为： SEQ  ID  NO  ：4引物：5'-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3'； 定量PCR 试剂中还包括miR-4286相关的内参U6 的特异引物，其序列为： SEQ  ID  NO  ：5上游引物： 5'-ACACTCCAGCTGGGTGAGATGAAGCACTGTAG-3'； 3 CN 111607648 A 说　明　书 2/5 页 SEQ  ID  NO  ：4通用下游引物： 5'-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3'。 我们的研究中采用miRNA  芯片技术筛选NSCLC组织中特异性表达的miRNA，通过聚 类分析发现，miR-4286  在发生淋巴结转移的NSCLC  组织中特异性上调表达，此后Real- Time  PCR 技术验证证实，NSCLC  癌组织中miR-4286 的上调表达与淋巴结转移密切相关。 进一步的采用原位杂交方法和荧光定量PCR方法分别检测NSCLC组织芯片和新鲜 冻存组织中miR-4286的表达，分析其表达水平与NSCLC临床病理特征的关系。 组织芯片中NSCLC癌组织的miR-4286阳性表达率为62.14%，明显高于癌旁配对正 常组织的4.29%（P  <0.001)；癌组织中miR-4286的表达与NSCLC的肿瘤大小、淋巴结转移及 TNM分期密切相关（P  <0.05），而与患者的性别、年龄、肿瘤组织类型、分化程度均无明显的 相关性(P  >0 .05)。荧光定量PCR方法结果显示，NSCLC癌组织中miR-4286的表达水平为 0.032(0.024-0.057)，显著高于配对癌旁正常组织的0.027(0.018-0.041)（P  <0.05)，miR- 4286的高表达水平与NSCLC的TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。NSCLC  组织中miR-4286 的高表达与NSCLC的疾病进展与转移潜能明显相关。 本发明具有以下有益效果： 本发明提供的试剂盒通过检测miR-4286 的表达，可以对非小细胞肺癌发生进行早期 诊断，通过检测其表达水平与临床分期以及转移的关系，对病人预后作出评价。提出了miR- 4286  在制备抑制非小细胞肺癌肿瘤生长和转移药物中的作用。本发明在医学和生物制药 领域有重大实际意义和巨大的应用价值。 附图说明 图1为NSCLC 不同细胞株中miR-4286的表达水平； 图2为组织芯片NSCLC组织中miR-4286的表达情况； 图3为非小细胞肺癌组织中miR-4286的表达。