技术摘要：
本发明涉及一种多穗柯总黄酮提取物的制备方法及质量检测方法，所述的多穗柯总黄酮的制备方法包括以下步骤：多穗柯干燥叶片→粉碎→甲醇或乙醇加热回流提取→浓缩→回收甲醇或乙醇→粗浸膏加水混悬→大孔吸附树脂柱层析→洗脱→浓缩→干燥，得多穗柯总黄酮。本发明研究  全部
背景技术：
多穗柯又称木姜叶柯、多穂石柯、甜叶子树，为壳斗科植物木姜叶柯（  Lithocarpus  litseifolius（Hance）Chun.）的干燥嫩叶，广西民间常用嫩叶作为茶叶饮用， 有降血糖、抗氧化、降血压、抗菌、抗过敏、抗癌等功效。多穗柯在历代的草药中都没有记载， 散载于我国的一些中草药专著和南方地区的中草药手册或植物学专著中有所分散，如《中 国植物志》、《中国高等植物图鉴》、《贵州植物志》、《云南植物志》、《广西药用植物名录》、《全 国中草药汇编》  等，目前尚未有法定的质量标准。经研究，多穗柯中主要的活性成分为根皮 苷和三叶苷，且含量较高在广西等地区有大面积的栽培。 目前现有文献中对多穗柯黄酮类物质的研究主要有以下几个方面： 1、【题名】多穗柯有效成分的提取及抑菌效果研究（李胜华,伍贤进,向晓军.多穗柯有 效成分的提取及抑菌效果研究[J].食品科技,2010,35(3):211-214）:取多穗柯药材粉末 5g，分别用50%、70%、90%乙醇煎煮并用微波辅助提取，采用紫外分光光度法，以芦丁为对照 品测定提取液中总黄酮的含量，结果以70%乙醇溶液为提取溶剂的多穗柯提取物中，总黄酮 含量最高；抑菌效果方面，以70%乙醇溶液提取的多穗柯提取物抑菌效果最好。 2、【题名】多穗柯黄酮化合物提取与分离技术研究（王倩文,刘佳佳,刘雄,任娜.多 穗柯黄酮化合物提取与分离技术研究[J].广州化工,2014,42(14):69-71）：分别量取10mL 浸泡好的AB－8和D101树脂转移到两个玻璃柱中，70  mL  0.4  mg/mL多穗柯絮凝后溶液以 1BV/h流速上样，收集流出液，测定其吸光度，至流出液中黄酮浓度与初始液浓度相同。用 3BV/h去离子水冲洗已吸附饱和的树脂，除去水溶性杂质，再用乙醇进行梯度洗提，流速 1BV/h，收集流出组分，结果AB－8柱分离纯化后，根皮苷的纯度达  52 .84%，回收率为 73.82%；D101  柱分离纯化后，根皮苷纯度为44.68%，回收率达  72.36%。 3、【题名】野生多穗柯主要活性成分及其含量变化（王坤,李开祥,陈金艳,黄剑,马 锦林.野生多穗柯主要活性成分及其含量变化[J] .经济林研究,2016 ,34(04):96-100 122.）：对照品溶液：精密称取真空干燥至恒质量的根皮苷和三叶苷  5 .00mg，分别定容于 5mL甲醇中，既得。供试品溶液:取多穗柯粉末0.25g，置10ml离心管中，加甲醇5ml，超声 15min，离心15min，用滴管将上清液转移至25ml容量瓶中，用甲醇定容至25ml，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液注入液相色谱仪。色谱条件：色谱柱为  Athena  C18-WP（100A， 2.1mm×100  mm，3μm）；流  动相为乙腈-0 .04%  甲酸（28:72）；流速0.8  mL/min；检测波长  285  nm；柱温为室温；进样量  5μL，理论板数按根皮苷峰计算不低于6000。结果，经方法学验 证，该方法准确，合理，可作为多穗柯中根皮苷、三叶苷的含量测定方法。 4、【题名】响应面法优化多穗石柯总黄酮提取工艺及抗氧化活性研究（唐健民,朱 成豪,高丽梅,熊雅兰,邹蓉,熊忠臣,蒋运生.响应面法优化多穗石柯总黄酮提取工艺及抗 4 CN 111595972 A 说　明　书 2/11 页 氧化活性研究[J].安徽农业科学,2020,48(01):181-185.）：多穗石柯总黄酮最佳提取条件 为超声功率328.8  W、超声频率35  kHz、乙醇浓度60%、料液比1∶41.2（g:mL）、提取温度63.2 ℃、提取时间37.8min，总黄酮提取率为19.18%。抗氧化活性试验结果表明，当黄酮浓度为 2mg/mL时，对·OH、DPPH·和O2-·的最大清除率分别为11.70%、75.86%和32.00%，并具有很 好的还原能力。 5、【题名】超声波提取-树脂纯化多穗柯叶中甜味剂的工艺研究（李爱民,李胜华, 张元,刘英,李斌,伍贤进.超声波提取-树脂纯化多穗柯叶中甜味剂的工艺研究[J].中国野 生植物资源,2014,33(05):1-7.）：以根皮苷和新橙皮苷二氢查尔酮(NHDC)纯度为指标，采 用单因素和L9(34)正交设计，确定多穗柯叶的最佳超声波提取条件和AB-8树脂最佳纯化工 艺。结果超声波最佳提取条件为:乙醇浓度为70%，固液比为1:25，超声波时间为35  min；AB- 8树脂最佳纯化工艺条件为：吸附流速为0.5  mL/min，洗脱乙醇浓度为90%，洗脱体积为 1.875  BV，洗脱剂流速为1  mL/min。在此提取及纯化条件下，得到根皮苷的纯度为88.616%， 新橙皮苷二氢查尔酮的纯度为71.823%。 多穗柯中含有非常丰富的黄酮类物质，含量可高达9.8％，主要为其他植物中较为 少数的黄酮种类二氢查尔酮苷类。研究高纯度多穗柯黄酮的提取工艺与质量检测方法，对 进一步研究多穗柯黄酮性质及开发利用具有重要意义。
技术实现要素：
本发明探索了多穗柯中总黄酮提取物的制备工艺，对多穗柯总黄酮提取物的质量 标准进行研究。建立薄层色谱法对多穗柯总黄酮提取物中的山萘酚、槲皮素、根皮苷进行鉴 别，用紫外分光光度法和超高效液相色谱法对多穗柯总黄酮、根皮苷和三叶苷进行含量测 定，为今后建立其完整的质量标准以及资源的开发和利用提供参考依据。 本发明的目的是提供一种多穗柯总黄酮提取物的制备方法及质量检测方法，  所 述的多穗柯总黄酮的制备方法包括以下步骤：多穗柯干燥叶片→粉碎→甲醇或乙醇加热回 流提取→浓缩→回收甲醇或乙醇→粗浸膏加水混悬→大孔吸附树脂柱层析→洗脱→浓缩 →真空干燥或冷冻干燥，得多穗柯总黄酮。本发明制备的多穗柯总黄酮提取物，经药理学实 验证实，具有较好的降血糖作用，可应用于制备降血糖药物。 本发明通过以下技术方案实现： 一种多穗柯总黄酮提取物的制备方法，包括以下步骤： （1）甲醇或乙醇溶液加热回流提取： ①多穗柯干燥叶片，粉碎，按重量加5～20倍量体积浓度为50～90％的甲醇或乙醇； ②  在温度为60～90℃条件下加热回流提取2～4次，每次0.5～2.5h，滤过，合并滤液； ③ 滤液回收甲醇或乙醇，并浓缩至无醇味，加水稀释至浓度为0.05～0.06g生药量/ml 的多穗柯提取液，待上柱用； （2）大孔吸附树脂分离纯化： ①选择中等极性或非极性大孔吸附树脂； ②吸附：上柱多穗柯提取液浓度为0.05～0.06g生药量/ml，上柱多穗柯提取液体积为 填充大孔吸附树脂体积的8～16倍，上柱流速为1～4  BV/h； ③水冲洗：洗脱剂为水，洗脱剂用量为填充大孔吸附树脂体积的1～3倍，洗脱流速为1 5 CN 111595972 A 说　明　书 3/11 页 ～3BV/h，弃去洗脱液； ④ 乙醇溶液洗脱：洗脱剂为体积浓度30～90%的乙醇，洗脱剂用量为填充大孔吸附树 脂体积的10～20倍，洗脱流速为1～3BV/h，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至干，再进行真 空干燥或者冷冻干燥，即得多穗柯总黄酮提取物。 具体地，步骤（2）所述的大孔吸附树脂为中等极性的XAD-18或非极性的XAD- 1600N、D101大孔吸附树脂。 按照上述的多穗柯总黄酮的制备方法，制得的多穗柯总黄酮提取物的总黄酮的含 量以根皮苷计占提取物总重量的50%以上，其主要成分为具有二氢查尔酮结构母核的根皮 苷、三叶苷及另两种具有黄酮母核与根皮苷结构相似的未知化合物（这两种未知化合物的 化学结构还未能测出），此四种化合物共占多穗柯总黄酮成分的50%以上，根皮苷和三叶苷 的含量占总黄酮成分的30%以上。 图1是本发明多穗柯总黄酮提取物的制备工艺流程图。经检测，多穗柯干燥的叶 子、根茎和果实中均含有总黄酮类物质，均可采用本发明的上述方法进行提取制备。 本发明对于多穗柯总黄酮提取物的质量检测方法如下： 本发明所述的多穗柯总黄酮提取物的质量检测方法，其中，多穗柯总黄酮的含量测定， 可采用紫外分光光度法，检测步骤如下： （1）对照品溶液的制备：精密称取根皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.7mg的溶 液，即得； （2）标准曲线的制备：精密量吸取根皮苷对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml， 分别置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以甲醇作为空白，照紫外-可见分光光度法 在284±  2nm测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为Y  = 0.0376X 0.0252，r=0.9998； （3）测定法：取多穗柯总黄酮提取物约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量使溶 解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置50ml  量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇 匀，以甲醇作为空白，在284±  2nm  测定吸光度，含总黄酮以根皮苷计算，不得少于50.0%。 本发明所述的多穗柯总黄酮提取物的质量检测方法，其中，多穗柯总黄酮的含量 测定可采用高效液相色谱法，检测步骤如下： （1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以30:70～90:10 的甲醇A—0.1%甲酸水溶液B为流动相，梯度洗脱，洗脱梯度如下：0～2min，  25%A→35%A；2 ～20min，35%A→90%A；流速为0.2～1  ml/min，检测波长为284  nm；理论板数以根皮苷和三 叶苷计均不低于3000； （2）供试品溶液的制备：取多穗柯总黄酮提取物约16  mg，精密称定，置100  ml的容量瓶 中，加50%甲醇溶液适量超声处理10min使溶解，处理功率320W，频率80KHz，加50%甲醇溶液 至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； （3）对照品溶液的制备：精密称定根皮苷、三叶苷对照品适量，加甲醇制成每1ml约含根 皮苷35μg、三叶苷16μg的混合对照品溶液，即得； （4）测定法：分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测 定，以根皮苷、三叶苷为对照品采用外标法，分别计算根皮苷、三叶苷的总量不得少于 30.0%。 6 CN 111595972 A 说　明　书 4/11 页 本发明所述的多穗柯总黄酮提取物的质量检测方法，其中，多穗柯总黄酮百分含 量的测定采用色谱面积归一化法，检测步骤如下： （1）供试品溶液液相色谱图中各色谱峰的确定：取混合对照品溶液与供试品溶液各10μ l，注入液相色谱仪，测定色谱与3D光谱图，通过相对保留时间和3D光谱图的比对，确定供试 品溶液中3、4色谱峰分别为根皮苷、三叶苷；通过3D光谱图比对，供试品溶液中1、2号色谱峰 光谱特征及最大吸收值与3、4色谱峰基本一致，均为黄酮类化合物；1、2号色谱峰与根皮苷 紫外吸收光谱图也基本一致，确定1、2号色谱峰也为黄酮类物质； （2）测定法：记录色谱图；按色谱面积归一化法，测量1～4号峰的面积和色谱图上除溶 剂峰以外的总色谱峰面积，计算1～4号峰峰面积之和占总峰面积的百分率；多穗柯总黄酮 相对百分含量以1～4号色谱峰峰面积之和计，不得少于50.0%。 本发明所述的多穗柯总黄酮提取物的质量检测方法，检出山萘酚和槲皮素，其中， 多穗柯总黄酮中山萘酚和槲皮素的薄层色谱鉴别，包括以下步骤： （1）供试品溶液的制备：取多穗柯总黄酮提取物加甲醇制成每1ml约含总黄酮3mg的供 试品溶液； （2）对照品溶液的制备：取山奈酚对照品加甲醇制成每1ml约含山萘酚0.05mg的山奈酚 对照品溶液；取槲皮素对照品加甲醇制成每1ml约含槲皮素0.06mg的槲皮素对照品溶液； （3）测定法：取上述供试品和对照品溶液，各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷- 乙酸乙酯-甲酸（10:9:0.5）为展开剂，展开，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在紫外光365nm下检 视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的荧光斑点。 本发明所述的多穗柯总黄酮提取物的质量检测方法，检出根皮苷，其中，多穗柯总 黄酮中根皮苷的薄层色谱鉴别，包括以下步骤： （1）供试品溶液的制备：取多穗柯总黄酮提取物加甲醇制成每1ml约含总黄酮3mg的供 试品溶液； （2）对照品溶液的制备：取根皮苷对照品加甲醇制成每1ml约含根皮苷0.6mg的根皮苷 对照品溶液； （3）测定法：取上述供试品和对照品溶液，各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙 酯-甲酸-水（7:0.5:0.5）为展开剂，展开，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在紫外光365nm下检 视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的荧光斑点。 按照本发明所述的方法制备得到的多穗柯总黄酮提取物，经小鼠实验验证具有降 血糖的药理作用，可应用于制备降血糖药物。 本发明对多穗柯中总黄酮提取物的含量测定方法学考察如下： 一、多穗柯总黄酮的含量测定（紫外分光光度法） （1）标准曲线的制备：精密量取含根皮苷720μg/ml的对照品溶液1  ml、2  ml、3  ml、4  ml、5ml、6  ml、7ml、8ml，分别置100ml  量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以甲醇作为空白， 照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2015版四部通则  0401）在284nm测定吸光度，以浓度 为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。得回归方程  Y  =0.037X–0.025，r=0.999，表明在 7.2～57.6 μg/mL 范围内时，根皮苷线性关系良好。 （2）精密度试验：取浓度为1.1mg/ml的总黄酮提取物供试品溶液，连续测定6次，记 录吸光度，计算6次结果的RSD为0.09%。 7 CN 111595972 A 说　明　书 5/11 页 （3）稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在0、2h、4h、8h、12h、20h、24h测定，记录 吸光度，结果7次结果的RSD为1.27  %，表明供试品溶液在24小时内稳定。 （4）回收率试验：取已知含量为57%的多穗柯总黄酮提取物，分别精密加入根皮苷 对照品适量，按拟定方法测定含量，并计算回收率，回收率平均值为99.6%，RSD为1.09%。 方法学试验结果表明：该方法准确、稳定、操作简单，可确保产品的质量。  二、多穗柯总黄酮的含量测定（高效液相色谱法及面积归一化法） 1、多穗柯总黄酮的含量测定（高效液相色谱法） （1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以30:70～90:10 的甲醇A—0.1  %甲酸水溶液B为流动相，梯度洗脱，洗脱梯度如下：0～2min，25%A→35%A；2 ～20min，35%A→90%A；流速为0.2～1  ml/min，检测波长为284  nm；理论板数以根皮苷和三 叶苷计均不低于3000； （2）供试品溶液的制备：取多穗柯总黄酮约16  mg，精密称定，置100  ml的容量瓶中，加 50%甲醇溶液适量超声处理（功率320  W，频率80  KHz）10  min使溶解，加50%甲醇溶液至刻 度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； （3）对照品溶液的制备：精密称定根皮苷、三叶苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含根皮 苷35μg、三叶苷16μg的混合对照品溶液， 即得； （4）  测定法：分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测 定，以根皮苷、三叶苷为对照品，采用外标法，分别计算根皮苷、三叶苷的总量不得少于 30.0%。 2、多穗柯总黄酮的含量测定（面积归一化法） （1）供试品溶液液相色谱图中各色谱峰的确定：分别精密吸取根皮苷、三叶苷对照品溶 液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述液相方法，测定色谱与其3D光谱图，通过 相对保留时间和3D光谱图的比对，确定供试品溶液中3、4色谱峰分别为根皮苷、三叶苷；通 过3D光谱图比对，供试品溶液中1、2号色谱峰光谱特征及最大吸收值与3、4色谱峰基本一 致，均为二氢查尔酮结构的黄酮类化合物；1、2号色谱峰与根皮苷紫外吸收光谱图也基本一 致，确定1、2号色谱峰也为二氢查尔酮结构的黄酮类物质； （2）测定法：精密吸取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；按色谱面积归 一化法，测量1～4号峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算1～4号峰峰 面积之和占总峰面积的百分率；多穗柯总黄酮相对百分含量以1～4号色谱峰峰面积之和 计，不得少于50.0%。 3、方法学考察如下: （1）线性范围： 标准曲线的制备  精密吸取含根皮苷0.151mg/ml、三叶苷0.109mg/ml的混合对照品溶 液1、2、3、4、5ml至25ml量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，即为质量浓度Ⅰ～Ⅴ的混合对照品溶 液。 系列质量浓度Ⅰ～Ⅴ的混合对照品溶液，精密吸取10μl进样，以进样量(μg)对峰面 积积分值进行回归处理，得根皮苷、三叶苷回归方程分别为:  Y=2972999X 15190(r＝ 0.9999)；Y=898472X 3444(r＝0.9999)； （2）精密度试验：精密吸取同一供试品溶液，在上述色谱条件下连续进样6次，记录根皮 8 CN 111595972 A 说　明　书 6/11 页 苷、三叶苷峰面积，6次结果根皮苷和三叶苷的RSD%分别为0.19%、0.54%。 （3）稳定性试验：取同一供试品溶液，0～24小时内每间隔两小时进样一次，测定， 记录峰面积。根皮苷和三叶苷峰面积RSD%分别为0.39%﹑2.33%。表明供试品溶液在24小时内 稳定。 （4）重复性试验：取同一批样品制备供试品溶液6份，按拟定方法测定，结果根皮苷 和三叶苷的平均含量分别为240  mg/g、120  mg/g，RSD分别为1.82%、0.05%。 （5）回收率试验：取已知含量的多穗柯提取物9份，精密加入一定量对照品混和溶 液，按供试品溶液处理方法制备样品，测定，计算加样回收率，根皮苷和三叶苷平均回收率 分别为100%、103%，RSD分别为2.33%、1.62% 结果：采用本发明的多穗柯总黄酮提取物的制备和质量检测方法，经验证试验，制备得 到的多穗柯总黄酮提取物中多穗柯总黄酮含量以根皮苷、三叶苷的总量可达30%以上，以面 积归一化法计算，总黄酮的含量可达50%以上。 方法学试验结果表明：该法简单、准确，快速，可确保多穗柯总黄酮提取物的质量。 其中，图2是本发明多穗柯总黄酮和根皮苷对照品的紫外吸收光谱图，从图2可见 对照品根皮苷和多穗柯总黄酮均在284±2  nm有最大吸收，二者吸收光谱基本一致。图3是 本发明多穗柯总黄酮的高效液相色谱图，图中各色谱峰成分分别为：1、未知黄酮，2、未知黄 酮，3、根皮苷，4、三叶苷。图4是混合对照品溶液的高效液相色谱图，图中各色谱峰成分分别 为:1、根皮苷，2、三叶苷。图5是本发明多穗柯总黄酮的3D光谱图，从图5可以看出1～4号色 谱峰光谱特征一致，为同一具有二氢查尔酮结构母核的黄酮类化合物。图6是本发明多穗柯 总黄酮的高效液相色谱图中1号峰到4号峰的紫外吸收光谱图，从图6可以看出1号色谱峰和 2号色谱峰未知黄酮与3号色谱峰根皮苷、4号色谱峰三叶苷的紫外吸收光谱图基本一致，为 同一二氢查尔酮结构母核的同类黄酮化合物。图7是本发明多穗柯总黄酮中山萘酚和槲皮 素的薄层鉴别图，其中1、2、3斑点分别为供试品点样量2μl、5μl、10μl，4、5斑点分别为槲皮 素、山萘酚。图8是本发明多穗柯总黄酮中根皮苷的薄层鉴别图。 本发明的有益效果: 1、本发明通过研究多穗柯中总黄酮提取物的制备工艺，对多穗柯总黄酮提取物的质量 标准进行了研究，建立薄层色谱法对多穗柯总黄酮提取物中的山萘酚、槲皮素、根皮苷进行 鉴别，用紫外分光光度法和超高效液相色谱法对多穗柯总黄酮、根皮苷和三叶苷进行含量 测定，为今后建立其完整的质量标准以及资源的开发和利用提供参考依据。 2、本发明多穗柯总黄酮提取物的制备方法工艺简单，耗能低，在工艺过程中主要 采用甲醇或乙醇提取，经过一次大孔吸附树脂柱分离纯化即可得到总黄酮含量较高的多穗 柯总黄酮提取物，使原料中有害溶剂的残留量少，符合国家对食品及药品的要求。 3、本发明采用采用紫外-可见分光光度法直接鉴定多穗柯总黄酮，方法简单准确， 能适应工业生产需要可有效地控制多穗柯总黄酮提取物的质量。 4、本发明采用高效液相色谱法，以根皮苷、三叶苷为对照品，对多穗柯总黄酮提取 物中根皮苷和三叶苷的含量进行检测，以色谱面积归一化法计算多穗柯总黄酮的相对百分 含量，可降低分析测试成本，简化分析过程提高分析速度；更有效的运用于中药多成分、多 指标的质量控制。 5、本发明采用薄层色谱法对多穗柯总黄酮中山萘酚、槲皮素、根皮苷进行鉴定，方 9 CN 111595972 A 说　明　书 7/11 页 法准确、简单，能适应工业生产的需要，可有效的控制多穗柯总黄酮的质量。 6、本发明制备的多穗柯总黄酮提取物，经药理学实验证实，具有较好的降血糖作 用，可应用于制备降血糖药物。 7、本发明通过对多穗柯总黄酮提取物进行研究，建立了一种多穗柯总黄酮的制备 和质量检测方法，采用紫外-可见分光光度法、超高效液相色谱法等方法测定多穗柯总黄酮 中总黄酮的含量，方法准确、稳定、操作简单，有利于多穗柯相关产品的进一步开发利用，而 且对于开发广西特色药材，开发具有高技术、高附加值的产品，提高市场竞争能力，可产生 潜在而不可估量的社会效益与经济效益。 附图说明 图1是本发明多穗柯总黄酮提取物的制备工艺流程图； 图2是本发明多穗柯总黄酮和根皮苷对照品的紫外吸收光谱图； 图3是本发明多穗柯总黄酮提取物的高效液相色谱图，图中各色谱峰成分分别为:1、未 知黄酮，2、未知黄酮，3、根皮苷，4、三叶苷； 图4是混合对照品溶液的高效液相色谱图，图中各色谱峰成分分别为:1、根皮苷，2、三 叶苷； 图5是本发明多穗柯总黄酮提取物的3D光谱图； 图6是本发明多穗柯总黄酮提取物的高效液相色谱中1号峰到4号峰的紫外吸收光谱 图； 图7是本发明多穗柯总黄酮提取物中山萘酚和槲皮素的薄层鉴别图，其中1、2、3斑点分 别为供试品点样量2μl、5μl、10μl，4、5斑点分别为槲皮素、山萘酚； 图8是本发明多穗柯总黄酮提取物中根皮苷的薄层鉴别图，其中1、2、3斑点分别为供试 品点样量2μl、5μl、10μl，4斑点为根皮苷。