技术摘要：
本发明公开了一种HPLC检测复方三维右旋泛酸钙糖浆B族维生素的方法，以乙腈为流动相A相，以含十二烷基硫酸钠的甲酸水溶液为流动相B相；取待测溶液进行HPLC检测后，根据色谱图对维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酰胺4种维生素进行定性和/或定量分析；所述HPLC检测过程中  全部
背景技术：
B族维生素是维护人体健康、促进生长发育和调节生理功能所必需的一类有机化 合物，它在人体内无法自行合成，食物中含量也较低，必须额外补充。现代药理研究表明，维 生素B1可用于脚气病、周围神经炎、消化不良等症状；维生素B2可促进肠道组织发育和细胞 的再生，提高肠道吸收能力。维生素B6用于全胃肠道外营养及摄入不足所致营养不良，进行 性体重下降时维生素B6的补充；烟酰胺与蛋白质的代谢及儿童智力发育关系密切，并在维 持皮肤和消化器官正常功能中起着重要作用。另外，药理研究也表明配方中所含多种B族维 生素能提高儿童味觉功能及提高胃黏膜消化功能，增进食欲，可有效治疗儿童厌食症。复方 三维右旋泛酸钙糖浆，原名维他肥儿膏或维力膏，是一种临床上用于健脾胃的重要中西复 方制剂，其主要成分包括维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酰胺等B族维生素和十味中药提 取物混合的其主治功能为“补中益气，健脾止泻，消食导滞”；尤其适用于小儿营养不良及维 生素缺乏症。复方三维右旋泛酸钙糖浆，在药品标准中的分类属于维生素类药品，其中4种B 族维生素分别为维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酰胺添加量较高，也是其质量标准的检测 指标。尽管现有技术中，关于复方三维右旋泛酸钙糖浆中B族维生素质量控制方法已有报道 或者已有标准，但是这些方法均仅能测定1～2种维生素的含量，或者需用针对每种维生素 采用多种不同方法来分别检测，难以全面反映复方三维右旋泛酸钙的B族质量，无法实现多 种维生素的同时测定。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是：本发明提供一种高效液相色谱法(Hig h  Performance  Liquid  Chromatography，HPLC)法，可以实现以复方三维右旋泛酸钙糖浆及 其中间体为背景的维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酰胺4种维生素同时测定的方法，为复 方三维右旋泛酸钙糖浆的质量评价提供了新的技术手段。 为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为： 一种HPLC检测复方三维右旋泛酸钙糖浆B族维生素的方法，以乙腈为流动相A相， 以含十二烷基硫酸钠的甲酸水溶液为流动相B相；取待测溶液进行HPLC检测后，根据色谱图 对维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酰胺4种维生素进行定性和/或定量分析； 所述HPLC检测过程中采用梯度洗脱，洗脱程序为： 0～5min，流动相A相的体积分数为10％； 3 CN 111595969 A 说　明　书 2/9 页 5～20min，流动相A相的体积分数由10％升至20％； 20～30min，流动相A相的体积分数由20％升至35％； 30～40min，流动相A相的体积分数由35％升至45％； 40～50min，流动相A相的体积分数由45％升至60％； 50～60min，流动相A相的体积分数由60％升至75％； 60～65min，流动相A相的体积分数为75％； 65～70min，流动相A相的体积分数由75％降至10％； 70～80min，流动相A相的体积分数为10％。 本发明的有益效果在于：本发明检测方法可同时实现维生素B1、维生素B2、维生素 B6和烟酰胺的检测，采用本发明方法检测，操作简单，测定结果准确可靠。本发明检测方法 不仅具有较高的精密度，还具有良好的重现性。采用本发明的洗脱梯度，可将四种维生素完 全分开，分离度高，分离效果好。检测过程中，无需使用三乙胺，更加安全。本发明方法应用 前景广泛，可以为复方三维右旋泛酸钙糖浆的开发和质量检测提供可靠的实验依据。 附图说明 图1为本发明实施例1的HPLC检测色谱图。 图2为本发明实施例2采用Phenomenex  Luna  C18色谱柱进行HPLC检测的色谱图； 图3为本发明实施例2采用ZORBAX  Bonus-RP色谱柱进行HPLC检测的色谱图； 图4为本发明实施例2采用Ultimate  Polar-RP色谱柱进行HPLC检测的色谱图； 图5为本发明实施例2采用ZORBAX  Eclipse  XDB-C18色谱柱进行HPLC检测的色谱 图； 图6为本发明实施例2采用Waters  X-select  CSH  C18色谱柱进行HPLC检测的色谱 图； 图7为本发明实施例2采用Thermo  Betasil  C18色谱柱进行HPLC检测的色谱图； 图8为本发明实施例2采用甲醇作为流动相A相进行HPLC检测的色谱图； 图9为本发明实施例2采用乙腈作为流动相A相进行HPLC检测的色谱图； 图10为本发明实施例2采用5％乙腈作为起始流动相进行HPLC检测的色谱图； 图11为本发明实施例2采用15％乙腈作为起始流动相进行HPLC检测的色谱图； 图12为本发明实施例2采用10％乙腈作为起始流动相进行HPLC检测的色谱图； 图13为本发明实施例2采用乙腈-乙酸乙酸铵水溶液作为流动相B相进行HPLC检测 的色谱图； 图14为本发明实施例2采用添加5mM己烷磺酸钠的甲酸水溶液作为流动相B相进行 HPLC检测的色谱图； 图15为本发明实施例2采用添加5mM庚烷磺酸钠的甲酸水溶液作为流动相B相进行 HPLC检测的色谱图； 图16为本发明实施例2采用添加5mM十二烷基硫酸钠的甲酸水溶液作为流动相B相 进行HPLC检测的色谱图； 图17为本发明实施例2采用添加1mM十二烷基硫酸钠的甲酸水溶液作为流动相B相 进行HPLC检测的色谱图； 4 CN 111595969 A 说　明　书 3/9 页 图18为本发明实施例2采用添加2.5mM十二烷基硫酸钠的甲酸水溶液作为流动相B 相进行HPLC检测的色谱图； 图19为本发明实施例2采用添加5mM十二烷基硫酸钠的甲酸水溶液作为流动相B相 进行HPLC检测的色谱图； 图20为本发明实施例2采用添加5mM十二烷基硫酸钠的水溶液作为流动相B相进行 HPLC检测的色谱图； 图21为本发明实施例2采用添加5mM十二烷基硫酸钠的甲酸(0.01％)水溶液作为 流动相B相进行HPLC检测的色谱图； 图22为本发明实施例2采用添加5mM十二烷基硫酸钠的甲酸(0.03％)水溶液作为 流动相B相进行HPLC检测的色谱图； 图23为本发明实施例2采用添加5mM十二烷基硫酸钠的甲酸(0.05％)水溶液作为 流动相B相进行HPLC检测的色谱图； 图24为本发明实施例2为0.1％甲酸水溶液(pH＝2)作为溶剂制备的样品进行HPLC 检测的色谱图； 图25为本发明实施例2为0.1％三乙胺(pH＝6.5)水溶液作为溶剂制备的样品进行 HPLC检测的色谱图； 图26为本发明实施例2为10％甲醇(含0.05％甲酸)(pH＝4)水溶液作为溶剂制备 的样品进行HPLC检测的色谱图； 图27为本发明实施例2在210nm波长下进行HPLC检测的色谱图； 图28为本发明实施例2在230nm波长下进行HPLC检测的色谱图； 图29为本发明实施例2在290nm波长下进行HPLC检测的色谱图； 图30为本发明实施例2在320nm波长下进行HPLC检测的色谱图； 图31为本发明实施例2在360nm波长下进行HPLC检测的色谱图； 图32为本发明实施例2在260nm波长下进行HPLC检测的色谱图。 标号说明： 1、维生素B2；2、烟酰胺；3、维生素B6；4、维生素B1。