技术摘要：
本发明提供了一种用于香石竹花药培养的诱导培养基，其组成成分包括KNO3、NH4NO3、KH2PO4、CaCl2·2H2O、Mg2SO4·7H2O、KCl、FeSO4·7H2O、Na2‑EDTA、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、维生素B1、维生素B6、生物素、核黄素、D‑ 全部
背景技术：
香石竹（Dianthus caryophyllus L.）俗名康乃馨，又名狮头石竹、大花石竹、麝香 石竹等，是石竹科石竹属多年生宿根草本植物。香石竹兴起于南欧、地中海地区，因其花色 娇艳并且放出芬芳的香气而出名。香石竹作为世界四大切花之一，具有相当高的观赏和应 用价值，主要应用于切花。由于色彩丰富，可用作艺术插花的材料，或制作花篮、花束、胸花 等。1907年开始以粉红色康乃馨作为慈母之爱的象征，被誉为“母亲节”之花，代表慈祥、温 馨、真挚的母爱，受到人们广泛喜爱。 花卉产业是世界公认的最具有发展潜力的产业之一，被称为“黄金产业”。近年来， 随着花卉产业的发展，香石竹在我国栽培面积不断扩大。但我国目前栽培的香石竹品种主 要是从国外引进，如荷兰、意大利、哥伦比亚、以色列等国家均为香石竹种苗生产大国。这种 方式虽能跟上世界香石竹品种的流行趋势，但生产成本高，常受制于人，所以我们还应加强 香石竹育种的研究，培育出适合我国气候条件、抗病抗逆、观赏价值高的，具有我国自主知 识产权的香石竹新品种。香石竹的常规育种方式为杂交育种，杂交是生物遗传变异的重要 来源，通过基因型不同的类型间的结合，人们就可以从中选育出符合生产和生活需求的杂 种。但是杂交育种存在着操作繁琐、育种周期长、预见性差、选择效率低等局限性，因此需要 在常规育种的基础上充分利用现代生物技术手段辅助育种，加快新品种的选育进程。 花药培养是植物组织培养技术中的一部分，是把整个花药接种到培养基上，在离 体培养条件下，促使其小孢子诱导形成单倍体植株，是产生单倍体的主要途径之一。花药培 养具有重要的意义：一是获得纯系育种材料和进行单倍体育种，以利用杂种优势，缩短育种 年限和提高育种效率；二是用所获得的纯合二倍体材料进行果树遗传变异规律研究，使植 物育种有坚实的遗传理论依据，减少育种的盲目性；三是克服远缘杂种的不育性，获得具有 双亲优良特性的可育远缘杂种。单倍体育种已与常规杂交育种、远缘杂交育种、诱变育种以 及转基因技术结合，现已成为生物技术在农作物育种中应用最广泛、最有成效的方法之一。 花药培养是一种特殊的性器官离体培养，所以比一般的组织培养技术要求高、难 度大，到目前为止很多植物的花药培养研究仍处于空白的状态。供体植株的基因型是影响 花药培养的关键因素。不同基因型植株的花药对培养的反应不同，表现在花药培养力如愈 伤组织诱导率、分化率、胚状体诱导率及植株诱导率等的不同，有些材料对某些培养基没有 反应。花粉发育时期是诱导小孢子分裂的关键时期。一般来说，培养处于单核中期至晚期的 花粉效果较好。因为处于花粉减数分裂时期的幼嫩花药和花粉充满淀粉粒的较老花药都不 能产生胚状体。选择合适的培养基也是花药培养技术的重要环节之一。一般情况下，所选择 的培养基因培养植物种类的不同而异，截至目前，MS、B5、N6、White 等培养基都已经在植物 花药培养中得到广泛应用。此外培养基中的生长调节物质、附加成分等都会对愈伤组织的 3 CN 111587788 A 说 明 书 2/5 页 诱导和分化产生重要的影响。 目前，国内外关于香石竹花药培养的研究报道很少，香石竹花药培养体系还没建 立，香石竹单倍体或DH植株也没有获得，因此有待我们进行深入的研究。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种用于香石竹花药培养的诱导培养基，为香石竹花药培养 体系的建立以及今后开香石竹单倍体育种工作奠定基础。 本发明的目的是通过以下技术方案实现的： 一种用于香石竹花药培养的诱导培养基，其特征在于，该培养基组成成分与使用浓度 如下：KNO3 1700-2000mg/L，NH4NO3 600-800mg/L，KH2PO4 140-180mg/L，CaCl2·2H2O 490- 530mg/L，Mg2SO4·7H2O 280-320mg/L，KCl 95-115mg/L，FeSO4·7H2O 26.4-30.2mg/L，Na2- EDTA 35.7-39.3mg/L，KI 0.7-0.8mg/L，H3BO3 5.5-6.5mg/L，MnSO4·4H2O 12.6-14.0mg/L， ZnSO4·7H2O 7 .7-8.5mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.2-0.3mg/L，CuSO4·5H2O 0.04-0.06mg/L， CoCl2·6H2O 0 .02-0 .03mg/L，维生素B1 0 .4-0 .6mg/L，维生素B6 0 .4-0 .6mg/L，生物素 0.01-0.03mg/L，核黄素0.2-0.4mg/L，D-泛酸钙0.5-1.0mg/L，天冬氨酸1.0-2.0mg/L，甘氨 酸1.0-2.0mg/L，丙酮酸钠15-25mg/L，延胡索酸35-45mg/L，半胱氨酸盐酸盐20-30mg/L，水 解酪蛋白110-150mg/L，肌醇100-140mg/L，5-氮杂胞嘧啶核苷2.5-3 .5mg/L，植物血凝素 4.6-5.4mg/L，马来酰肼1.8-2.2mg/L，2，4-D 0.4-0.6mg/L，6-BA 0.4-0.6mg/L，香石竹伤流 液20-30ml/L，亚硫酸氢钠0.07-0.09mg/L，海藻糖2.0-4.0g/L，蔗糖40-50g/L，植物凝胶6- 8g/L。 该培养基的pH调节为5.6-6.0。 该培养基中香石竹伤流液的制备方法为：用清洗干净的剪刀从距根基2cm处剪断 香石竹茎杆，弃去渗出的第1滴液体以防污染，套上装有脱脂棉的密封塑料袋，让脱脂棉贴 紧切口，用橡皮筋扎紧袋口，5h后取下脱脂棉以及塑料袋，通过抽滤的方法将伤流液收集到 容器中，-20℃冷冻保存。 该培养基用于香石竹花药培养诱导愈伤组织。 本发明具有以下有益效果： 本发明的诱导培养基是在常规培养基的基础上进行的优化，不仅调整了大量元素、微 量元素的使用浓度，还添加了丙酮酸钠、延胡索酸、半胱氨酸盐酸盐、水解酪蛋白、5-氮杂胞 嘧啶核苷、植物血凝素、香石竹伤流液、亚硫酸氢钠、海藻糖等附加成分，采用马来酰肼和2， 4-D、6-BA组合作为植物生长调节剂，能够显著提高香石竹花药愈伤组织的诱导率，较其它 培养基培养效率提高了2-3倍，为建立高效、稳定的香石竹花药培养体系奠定基础。
本发明提供了一种用于香石竹花药培养的诱导培养基，其组成成分包括KNO3、NH4NO3、KH2PO4、CaCl2·2H2O、Mg2SO4·7H2O、KCl、FeSO4·7H2O、Na2‑EDTA、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、维生素B1、维生素B6、生物素、核黄素、D‑ 全部
背景技术：
香石竹（Dianthus caryophyllus L.）俗名康乃馨，又名狮头石竹、大花石竹、麝香 石竹等，是石竹科石竹属多年生宿根草本植物。香石竹兴起于南欧、地中海地区，因其花色 娇艳并且放出芬芳的香气而出名。香石竹作为世界四大切花之一，具有相当高的观赏和应 用价值，主要应用于切花。由于色彩丰富，可用作艺术插花的材料，或制作花篮、花束、胸花 等。1907年开始以粉红色康乃馨作为慈母之爱的象征，被誉为“母亲节”之花，代表慈祥、温 馨、真挚的母爱，受到人们广泛喜爱。 花卉产业是世界公认的最具有发展潜力的产业之一，被称为“黄金产业”。近年来， 随着花卉产业的发展，香石竹在我国栽培面积不断扩大。但我国目前栽培的香石竹品种主 要是从国外引进，如荷兰、意大利、哥伦比亚、以色列等国家均为香石竹种苗生产大国。这种 方式虽能跟上世界香石竹品种的流行趋势，但生产成本高，常受制于人，所以我们还应加强 香石竹育种的研究，培育出适合我国气候条件、抗病抗逆、观赏价值高的，具有我国自主知 识产权的香石竹新品种。香石竹的常规育种方式为杂交育种，杂交是生物遗传变异的重要 来源，通过基因型不同的类型间的结合，人们就可以从中选育出符合生产和生活需求的杂 种。但是杂交育种存在着操作繁琐、育种周期长、预见性差、选择效率低等局限性，因此需要 在常规育种的基础上充分利用现代生物技术手段辅助育种，加快新品种的选育进程。 花药培养是植物组织培养技术中的一部分，是把整个花药接种到培养基上，在离 体培养条件下，促使其小孢子诱导形成单倍体植株，是产生单倍体的主要途径之一。花药培 养具有重要的意义：一是获得纯系育种材料和进行单倍体育种，以利用杂种优势，缩短育种 年限和提高育种效率；二是用所获得的纯合二倍体材料进行果树遗传变异规律研究，使植 物育种有坚实的遗传理论依据，减少育种的盲目性；三是克服远缘杂种的不育性，获得具有 双亲优良特性的可育远缘杂种。单倍体育种已与常规杂交育种、远缘杂交育种、诱变育种以 及转基因技术结合，现已成为生物技术在农作物育种中应用最广泛、最有成效的方法之一。 花药培养是一种特殊的性器官离体培养，所以比一般的组织培养技术要求高、难 度大，到目前为止很多植物的花药培养研究仍处于空白的状态。供体植株的基因型是影响 花药培养的关键因素。不同基因型植株的花药对培养的反应不同，表现在花药培养力如愈 伤组织诱导率、分化率、胚状体诱导率及植株诱导率等的不同，有些材料对某些培养基没有 反应。花粉发育时期是诱导小孢子分裂的关键时期。一般来说，培养处于单核中期至晚期的 花粉效果较好。因为处于花粉减数分裂时期的幼嫩花药和花粉充满淀粉粒的较老花药都不 能产生胚状体。选择合适的培养基也是花药培养技术的重要环节之一。一般情况下，所选择 的培养基因培养植物种类的不同而异，截至目前，MS、B5、N6、White 等培养基都已经在植物 花药培养中得到广泛应用。此外培养基中的生长调节物质、附加成分等都会对愈伤组织的 3 CN 111587788 A 说 明 书 2/5 页 诱导和分化产生重要的影响。 目前，国内外关于香石竹花药培养的研究报道很少，香石竹花药培养体系还没建 立，香石竹单倍体或DH植株也没有获得，因此有待我们进行深入的研究。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种用于香石竹花药培养的诱导培养基，为香石竹花药培养 体系的建立以及今后开香石竹单倍体育种工作奠定基础。 本发明的目的是通过以下技术方案实现的： 一种用于香石竹花药培养的诱导培养基，其特征在于，该培养基组成成分与使用浓度 如下：KNO3 1700-2000mg/L，NH4NO3 600-800mg/L，KH2PO4 140-180mg/L，CaCl2·2H2O 490- 530mg/L，Mg2SO4·7H2O 280-320mg/L，KCl 95-115mg/L，FeSO4·7H2O 26.4-30.2mg/L，Na2- EDTA 35.7-39.3mg/L，KI 0.7-0.8mg/L，H3BO3 5.5-6.5mg/L，MnSO4·4H2O 12.6-14.0mg/L， ZnSO4·7H2O 7 .7-8.5mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.2-0.3mg/L，CuSO4·5H2O 0.04-0.06mg/L， CoCl2·6H2O 0 .02-0 .03mg/L，维生素B1 0 .4-0 .6mg/L，维生素B6 0 .4-0 .6mg/L，生物素 0.01-0.03mg/L，核黄素0.2-0.4mg/L，D-泛酸钙0.5-1.0mg/L，天冬氨酸1.0-2.0mg/L，甘氨 酸1.0-2.0mg/L，丙酮酸钠15-25mg/L，延胡索酸35-45mg/L，半胱氨酸盐酸盐20-30mg/L，水 解酪蛋白110-150mg/L，肌醇100-140mg/L，5-氮杂胞嘧啶核苷2.5-3 .5mg/L，植物血凝素 4.6-5.4mg/L，马来酰肼1.8-2.2mg/L，2，4-D 0.4-0.6mg/L，6-BA 0.4-0.6mg/L，香石竹伤流 液20-30ml/L，亚硫酸氢钠0.07-0.09mg/L，海藻糖2.0-4.0g/L，蔗糖40-50g/L，植物凝胶6- 8g/L。 该培养基的pH调节为5.6-6.0。 该培养基中香石竹伤流液的制备方法为：用清洗干净的剪刀从距根基2cm处剪断 香石竹茎杆，弃去渗出的第1滴液体以防污染，套上装有脱脂棉的密封塑料袋，让脱脂棉贴 紧切口，用橡皮筋扎紧袋口，5h后取下脱脂棉以及塑料袋，通过抽滤的方法将伤流液收集到 容器中，-20℃冷冻保存。 该培养基用于香石竹花药培养诱导愈伤组织。 本发明具有以下有益效果： 本发明的诱导培养基是在常规培养基的基础上进行的优化，不仅调整了大量元素、微 量元素的使用浓度，还添加了丙酮酸钠、延胡索酸、半胱氨酸盐酸盐、水解酪蛋白、5-氮杂胞 嘧啶核苷、植物血凝素、香石竹伤流液、亚硫酸氢钠、海藻糖等附加成分，采用马来酰肼和2， 4-D、6-BA组合作为植物生长调节剂，能够显著提高香石竹花药愈伤组织的诱导率，较其它 培养基培养效率提高了2-3倍，为建立高效、稳定的香石竹花药培养体系奠定基础。
