技术摘要：
本公开提供了一种银耳‑灵芝复合发酵物的制备方法，包括：取适量银耳和灵芝，加入到适量水中，混合、灭菌，配得发酵底物；往所述发酵底物接种发酵菌并进行发酵培养处理，然后分离、灭菌处理得到所述银耳‑灵芝复合发酵物；以及一种具有抗衰老功效的化妆品用组合物，由  全部
背景技术：
银耳(Tremella  fuciformis)是担子菌门、银耳纲、银耳目、银耳科、银耳属真菌的 子实体，又称作白木耳、雪耳、银耳子等，有“菌中之冠”的美称。银耳作为我国传统的食用 菌，历来都是深受广大人民所喜爱的食物，其中所含有的活性成分银耳多糖具有特殊的保 健功能。除了保健功能外，银耳多糖具有卓越的保湿锁水能力，良好的润滑性和成膜性，还 具有一定的清除羟基自由基的能力，因而也常用于护肤品。现代的护肤品一般从银耳提取 银耳甘露聚糖作为一种多糖类的成分添加，其作用为给予膏霜等丝锻般顺滑的独特质地， 起到保湿的护肤功效。 灵芝(Ganoderma  Lucidum  Karst)又称为瑞草、神芝、仙草、瑶草、还阳草、林中灵、 菌灵芝、万年蕈、灵草、赤芝、丹芝、琼珍等，是一种多孔菌科真菌灵芝的子实体。其外形呈伞 状，菌盖肾形、半圆形或近圆形。在明代大医学家李时珍编著的《本草纲目》中有灵芝的记 载。灵芝具有突出保健价值，还是一种能抗皱、消炎、养颜的美容佳品。 灵芝在美容养颜方面的效果及作用机理：灵芝主要是通过延缓肌体衰老、调节内 分泌及代谢系统、消除自由基等作用达到美容驻颜的效果的。灵芝它具有养颜护肤之功效， 能延缓衰老，能保持和调节皮肤水分，恢复皮肤弹性，使皮肤湿润、细腻，并可抑制皮肤中的 黑色素的形成和沉淀，清除色斑、使头发增加光泽等功效。灵芝中的有效成分灵芝多糖能够 有效抑制自由基的形成，抗氧化、抗衰老，还能增加皮肤原有胶原蛋白，有效促进透明质酸 的形成，让肌肤保持水嫩润华，保持最佳状态。 香橼(Citrus  medic  L.)，为芸香科植物枸橼或香圆，别称枸橼、钩缘干、香泡树， 入药部位为干燥成熟果实，于秋季果实成熟时采收，趁鲜切片，晒干或低温干燥，香橼亦可 整个或对剖两半后，晒干或低温干燥。香橼果皮提取物在化妆品、护肤品里主要作用是皮肤 调理剂，柔润剂；提取物中具有多种功效成分，能为肌肤提供充足的养分，软化肌肤角质，长 效保湿滋养肌肤，具有良好的柔润效果。 目前食品、化妆品领域较为常用的活性物质提取方法有热水浸提法、酸提取法、碱 提取法、酶提取法、微生物发酵法。其中，微生物发酵法，是以细菌、霉菌等微生物为体系对 外源底物进行结构修饰的化学反应，微生物转化不需要添加其它的催化剂，只需先培养出 大量的微生物菌种，然后加入底物进行能实现的反应，所以微生物法比化学试剂的反应法 更专一、更有效；反应条件温和，微生物发酵一般都是在常温和pH为7左右的条件下进行催 化反应，不需要高温、高压等苛刻的条件；设备的运行操作也比较简单、安全，产生的公害较 少，一般不会造成环境污染，后处理也相对简单；筛选不同的菌种与优化反应条件可提高转 化率，对同一底物进行微生物转化的菌种可能有多种，通过筛选选出最佳菌种，可以保证较 3 CN 111544352 A 说　明　书 2/14 页 高的转化率。当今国内外许多研究者采用生物法生产多糖，即微生物法、酶法、植物细胞组 织培养等多种生物转化法结合，已经呈现出明显优势。微生物发酵技术在天然活性物质的 研究开发中发挥着越来越重要的作用。发酵技术在护肤品中应用已有大量报道，最著名的 例子就是SKII的神仙水。 尽管银耳、灵芝和香橼各自都在化妆品领域有着应用，但基本都各自与多种原料 复配使用，活性物提取方式也多种多样，如何改进活性物的提取效果，如何选择更有潜力的 材料组合，仍然是研究人员面临的难题。
技术实现要素：
在下文中给出了关于本公开的简要概述，以便提供关于本公开的某些方面的基本 理解。应当理解，这个概述并不是关于本公开的穷举性概述。它并不意图确定本公开的关键 或重要部分，也不意图限定本公开的范围。其目的仅仅是以简化的形式给出某些概念，以此 作为稍后论述的更详细描述的前序。 鉴于现有技术的上述缺陷，本公开的目的是提供一种银耳-灵芝复合发酵物、具有 抗衰老功效的化妆品用组合物及其制备方法和应用。 根据本公开的一个方面，提供了一种具有抗衰老功效的化妆品用组合物，包括银 耳-灵芝复合发酵物和香橼提取物配制而成。 上述具有抗衰老功效的化妆品用组合物，作为一种优选实施方式，由银耳-灵芝复 合发酵原浆、香橼提取液配制而成；按重量份计算，包括：所述银耳-灵芝复合发酵原浆100 份，香橼提取液1～5份(比如1.5份、2.份、3份、4份、4.5份等)。香橼提取液用量比过高容易 使组合物整体颜色较深，色素沉着于皮肤且容易产生造成皮肤过敏反应，用量比过低不易 起到协同效果。 本公开中采用的灵芝对胶原蛋白和脑酰胺的生成有促进作用，增强皮肤细胞新陈 代谢，结合其抗氧化作用，有抗皱抗衰的作用。本公开中采用的银耳含有活性成分银耳多糖 具有良好的保湿锁水能力、润滑性和成膜性，还具有一定的清除羟基自由基的作用。本公开 的具有抗衰老功效的化妆品用组合物优选采用对灵芝和银耳进行发酵得到的产物作为主 要组分。 本公开中采用的银耳-灵芝复合发酵原浆，优选其制备方法包括： 取适量银耳和灵芝，加入到适量水中，混合、灭菌，配得发酵底物； 往所述发酵底物接种发酵菌并进行发酵培养处理，然后分离、灭菌处理得到所述 银耳-灵芝复合发酵原浆。 优选地，发酵底物中，所述银耳为干燥的银耳粉，所述银耳粉与水的质量比为0.5 ～1.5wt.％(比如0.6wt.％、0.8wt.％、1wt.％、1.2wt.％、1.4wt.％等)，换言之，银耳粉用 量为水用量的0.5～1.5％。本公开所用银耳粉，优选其制备方法包括：对银耳(子实体干物) 进行低温粉碎处理，得到银耳粉；也可购于市售。实验证明，银耳用量比过低不能体现应有 的功效，银耳用量比过高可能导致发酵体系粘度过高，影响发酵的进行。 优选地，发酵底物中，所述灵芝为干燥的灵芝粉，所述灵芝粉与水的质量比为 0.01-1 .5wt .％(比如0.1wt .％、0.2wt .％、0.5wt .％、0.8wt .％、1.0wt .％、1.2wt .％、 1.4wt.％等)；换言之，灵芝粉用量为水用量的0.01-1.5％。本公开所用灵芝粉，优选其制备 4 CN 111544352 A 说　明　书 3/14 页 方法包括：对灵芝(子实体干物)进行低温粉碎处理，得到灵芝粉；也可购于市售。实验证明， 灵芝粉用量比过低不能体现应有的功效，用量比过高得到的发酵液整体颜色较深，色素沉 着于皮肤且容易产生造成皮肤过敏反应。 本公开所述银耳-灵芝复合发酵原浆的制备方法中采用的发酵菌为益生菌。优选 地，所述益生菌为乳酸菌，将银耳和灵芝粉复合发酵能将大分子功效成分分解成小分子，易 于被肌肤直接吸收利用；具体为选自以下任一种或两种以上： 德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus  delbruechii  subsp.Bulgaricus)，保 藏编号为CGMCC  1.16075，可从CGMCC购买； 布氏乳杆菌(Lactobacillus  buchneri)，保藏编号为CGMCC  1.15607，可从CGMCC 购买； 两歧双歧杆菌(Bifidobacterium  bifidum)，保藏编号为CGMCC  1 .5029，可从 CGMCC购买； 更优选地，用于接种至发酵底物的乳酸菌种子液的浓度为107-1010CFU/mL(比如 108CFU/mL、109CFU/mL)。 作为一种优选实施方式，所述发酵菌为德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus  delbruechii  subsp.Bulgaricus)。 进一步地，所述种子液的制备方法包括如下步骤： 活化：将菌种接种至MRS液体培养基的试管中，35～37℃活化20～48h； 纯化：取上述液体菌种梯度稀释后，接种于MRS固体培养基平板中，35～37℃静置 培养40～48h； 液体培养：取上述平板中的单菌落2～3环，接种于100mL  MRS培养基中，35～37℃ 活化20～48h； 扩大培养：以10％接种量取所述液体培养得到的菌液，接入到MRS液体培养基中 (菌液和MRS液体培养基体积比为10:100)，35～37℃培养10-14h，当菌体量达到107- 1010CFU/mL时，得到种子液。 其中，上述MRS液体培养基配方为：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉5.0g，葡萄 糖20.0g，K2HPO4·7H2O  2.0g，醋酸钠·3H2O  5.0g,柠檬酸三铵2.0g，MgSO4·7H2O  0.05g，吐 温80  1.0mL，pH6.2，补足水分至1000mL；上述MRS固体培养基为往上述MRS液体培养基中添 加1.5％琼脂粉；培养基灭菌条件为：115～121℃灭菌15～20min。 上述所述银耳-灵芝复合发酵原浆的制备方法中，作为一种优选实施方式，所述发 酵菌的接种比例为1％～3％(比如1.2％、1.5％、2％、2.5％、2.8％等)，即所述种子液与发 酵底物的体积比1～3:100。 上述所述银耳-灵芝复合发酵原浆的制备方法中，作为一种优选实施方式，所述发 酵培养的温度为30-50℃(比如31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、 41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、46℃、47℃、48℃、49℃等)，时间为6-10h(比如6.5h、7h、8h、 9h、9.5h等)。 上述所述银耳-灵芝复合发酵原浆的制备方法中，作为一种优选实施方式，所述发 酵培养处理后的分离采用离心分离，更优选的地，所述离心处理的速度是3500-8000r/min (比如4000r/min、4500r/min、5000r/min、5500r/min、6500r/min、7000r/min、7500r/min 5 CN 111544352 A 说　明　书 4/14 页 等)，时间是20-60min(比如25min、30min、40min、50min、55min等)。 上述所述银耳-灵芝复合发酵原浆的制备方法中，作为一种优选实施方式，所述灭 菌处理的温度是115～121℃(比如116℃、117℃、118℃、119℃、120℃等)，时间是15-20min (比如16min、17min、18min、19min等)。 优选地，所述银耳-灵芝复合发酵原浆的制备方法中，为了便于保存，还包括防腐 步骤；更优选地，所用防腐体系为2％～2.3wt.％1,2-己二醇，0.5wt.％戊二醇，添加方法为 灭菌后所得银耳-灵芝复合发酵原浆冷却至40℃以下直接添加搅拌均匀。 本公开中采用的香橼(Citrus  medic  L.)，为芸香科植物枸橼或香圆，别称枸橼、 钩缘干、香泡树，入药部位为干燥成熟果实，但在化妆品行业，一般使用部位为香橼果皮。本 公开中所用的香橼提取物为香橼果皮提取物，其中含有苹果酸、果胶和维生素等多种功效 成分，可有效抑制体内自由基对肌肤的损害，延缓肌肤衰老。 本公开中采用的香橼提取液，优选其制备方法为对香橼果皮进行热水浸提处理， 然后分离、灭菌得香橼提取液。 优选地，香橼提取液制备方法中，所述热水浸提处理中，按重量计算，所述香橼果 皮与水用量比为1:7～1:15(比如1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15等)。 优选地，香橼提取液制备方法中，所述热水浸提处理的温度为80-100℃(比如82 ℃、85℃、88℃、90℃、92℃、95℃、97℃、99℃等)、时间为90-150min(比如100min、110min、 120min、130min、140min等)；为了增强提取效果，实现充分提取，所述热水浸提处理过程中 可伴有搅拌处理(比如机械搅拌、电磁搅拌、摇床转动等)、震荡等将物料混匀的处理，更优 选地，搅拌速度为80-120rpm(比如85rpm、90rpm、100rpm、110rpm、115rpm等)。 优选地，香橼提取液制备方法中，所述热水浸提处理后分离采用离心分离，更优选 地，所述离心处理的速度是3500-8000r/min(比如4000r/min、4500r/min、5000r/min、 5500r/min、6500r/min、7000r/min、7500r/min等)，时间是20-60min(比如25min、30min、 40min、50min、55min等)。 优选地，香橼提取液制备方法中，为了便于保存，还包括防腐步骤；更优选地，所用 防腐体系为2％～2.3wt.％1,2-己二醇，0.5wt.％戊二醇，添加方法为在所述香橼提取液灭 菌后冷却至40℃以下后直接添加搅拌均匀。 可选地，本公开实施例提供的具有抗衰老功效的化妆品用组合物中，所述银耳-灵 芝复合发酵物也可以为通过所述银耳-灵芝复合发酵原浆进行干燥处理而得的发酵干粉。 可选地，本公开实施例提供的具有抗衰老功效的化妆品用组合物中，所述香橼提 取物也可以为通过所述香橼提取液进行干燥处理而得的提取物干粉。 可选地，所述干燥处理可以是喷雾干燥、真空冷冻干燥等。 上述具有抗衰老功效的化妆品用组合物作为化妆品的应用也在本公开的保护范 围之内。 上述具有抗衰老功效的化妆品用组合物在化妆品制备中的应用也在本公开的保 护范围之内。 上述化妆品，可以是面膜、精华液或爽肤水等。 上述根据本公开实施例的技术方案，通过对银耳和灵芝提取物进行复合发酵，将 发酵原浆与香橼提取物组合使用进行复配，制得了一种新型具有良好抗衰老功效的组合 6 CN 111544352 A 说　明　书 5/14 页 物。本公开通过植物提取和发酵技术融合，将灵芝和银耳复合益生菌乳酸杆菌发酵，将大分 子功效成分分解成小分子，易于被肌肤直接吸收利用，有利于灵芝和银耳中活性物质的提 取；香橼提取物中含有苹果酸、果胶和维生素等多种功效成分，可有效抑制体内自由基对肌 肤的损害，延缓肌肤衰老；灵芝对胶原蛋白和脑酰胺的生成有促进作用，增强皮肤细胞新陈 代谢，结合它的抗氧化作用，有抗皱抗衰的作用；银耳除了强大的保湿补水功效，也具有良 好的抗衰老功效；三者发挥协同效应，具有突出的抗衰老效果。 通过以下结合附图对本公开的最佳实施例的详细说明，本公开的这些以及其他优 点将更加明显。 附图说明 本公开可以通过参考下文中结合附图所给出的描述而得到更好的理解。所述附图 连同下面的详细说明一起包含在本说明书中并且形成本说明书的一部分，而且用来进一步 举例说明本公开的优选实施例和解释本公开的原理和优点。其中： 图1示出了使用实施例1制备的具有抗衰老功效的化妆品用组合物和0.1％透明质 酸(0.1％HA)进行皮肤水分含量(简称“水含”)和皮肤水分流失量(即经皮水分散失，简称 “水散”)测试所得结果； 图2示出了使用实施例1制备的具有抗衰老功效的化妆品用组合物和0.1％透明质 酸(0.1％HA)进行皮肤水分含量(简称“水含”)测试所得结果，其中，A表示使用后不同时间 点与各区域使用前水分含量的变化百分比变化趋势，B表示不同时间点不同区域的水分含 量中位数变化趋势； 图3示出了使用实施例1制备的具有抗衰老功效的化妆品用组合物和0.1％透明质 酸(0.1％HA)进行皮肤水分流失量(即经皮水分散失，简称“水散”)测试所得结果，其中，A表 示使用后不同时间点与各区域使用前TEWL值的变化百分比变化趋势，B表示不同时间点不 同区域的TEWL值中位数变化趋势； 图4示出了使用实施例1制备的具有抗衰老功效的化妆品用组合物进行透皮吸收 性实验所得结果； 图5示出了使用实施例1制备的化妆品用组合物进行抗氧化清除ABTS自由基测试 所得结果； 图6示出了志愿者使用实施例1制备的化妆品用组合物后进行皮肤皱纹及粗糙度 测试所拍摄的照片，其中，从上至下依次为分析细纹、皱纹的照片，从左至右依次为使用样 品前、使用样品后5min、20min、60min拍摄的照片； 图7为示出了图6所示志愿者使用实施例1制备的化妆品用组合物前后测试部位的 皮肤细纹深度柱状图； 图8为示出了图6所示志愿者使用实施例1制备的化妆品用组合物前后测试部位的 皮肤皱纹深度柱状图。