技术摘要：
本发明公开了一种肠道菌群相对丰度预测肝脏疾病的分析技术，属于生物技术及医学技术领域，包括步骤一，取健康人、非酒精性脂肪肝、肝硬化、肝癌患者中段粪便并提取总RNA，通过对微生物16S rRNA基因V4可变区进行PCR扩增，进行文库构建，对微生物rRNA基因V4可变区进行测 全部
背景技术：
在人类的肠道中，存在着大量微生物。这些肠道微生物除了传统意义上的肠道细 菌群，还包括古细菌、病毒和原生动物，其中98％以上是细菌，统称为肠道菌群。正常肠道菌 群有500～1500种不同细菌种类，其中绝大多数为厌氧菌。从基因层面上看，人体自身的基 因组大约携带了2.5万个基因，而人体肠道微生物编码的基因总数约是人自身基因总数的 150倍，被视作人类“第二基因组”。人体肠道微生物的全部基因信息称为人体肠道宏基因组 (Matagenome)。 肠道既是吸收营养物质的主要器官，也是机体抵御食物中有害物质的重要免疫屏 障，更与肝脏的免疫细胞构成免疫平衡，共同维持机体稳态，肝脏疾病的发生、发展与肠道 菌群的变化关系紧密。 肝脏疾病是发生在肝脏的所有疾病的总称，包括一、肝硬化(Liver cirrhosis)， 肝硬化是临床常见的慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝 损害。肝硬化是许多肝脏疾病的晚期病变，是由病毒性肝炎、酒精中毒、营养障碍、胆汁淤 积、血吸虫病、循环障碍等各种原因所致，其特点是肝细胞变性和坏死。早期肝硬化通过及 时防治可以逆转或不再进展，而晚期将不可逆转，严重影响患者的生活质量，甚至危及生 命。 二、非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)包括单纯 性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化和肝癌，是常见的与肥胖相关的代谢性疾病之 一。一项关于中国NAFLD的流行病学研究表明中国NAFLD的综合患病率从2008-2010年的 25.4％上升到2015-2018年的32.3％，患病率增长速度是西方国家的两倍。 然而，与肝硬化和NAFLD进程相关的肠道微生物的系统发育及功能成分的变化还 不清楚，对这种菌群失衡影响的认识仍很局限。
技术实现要素：
本发明要解决的问题是提供一种通过肠道菌群相对丰度预测肝脏疾病的分析技 术，有助于更加全面的理解菌群对宿主生理和病理的影响，将肠道菌群作为检测指标预测 肝脏疾病，为人群健康监测提供指导和依据。 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种肠道菌群相对丰度预测肝 脏疾病的分析技术，包括如下步骤： 步骤一，取健康人、非酒精性脂肪肝、肝硬化、肝癌患者中段粪便并提取总RNA，通 过对微生物16S rRNA基因V4可变区进行PCR扩增，进行文库构建，对微生物rRNA基因V4可变 区进行测序，分析粪便中肠道菌群相对丰度； 4 CN 111549155 A 说 明 书 2/7 页 步骤二，将上述肠道菌群相对丰度进行ROC分析，获得AUC、灵敏度、特异度和cut- off值，选取AUC>0.7，相对丰度cut-off值>0.001的肠道微生物作为检测指标预测肝脏疾 病。 在步骤一中，取健康人、非酒精性脂肪肝、肝硬化、肝癌患者100mg中段粪便并提取 总RNA。 在步骤一中，所述肝硬化患者包括代偿性肝硬化、轻度失代偿性肝硬化、重度失代 偿性肝硬化患者。 经分析筛选后，作为预测非酒精性脂肪肝的肠道微生物包括：p_firmicutes，c_ clostridia，o_clostridiales，f_ruminococcaceae，f_bacteroidaceae，g_bacteroides， g_lachnoclostridium，s_bacteroides_vulgatus，s_blautia_obeum，p_bacteroidetes/p_ firmicutes；作为预测代偿性肝硬化的肠道微生物包括：p_proteobacteria，g_ streptococcus；作为预测轻度失代偿性肝硬化的肠道微生物包括：c_clostridia，o_ clostridiales，f_lachnospiraceae，g_blautia，g_unidentified_lachnospiraceae，c_ bacilli，o_lactobacillales，f_streptococcaceae，g_streptococcus，s_ruminococcus_ sp_5_1_39bfaa，c_negativicutes，o_selenomonadales，f_veillonellaceae，g_ romboutsia，g_unidentified_ruminococcaceae，g_fusicatenibacter，s_ bifidobacterium_adolescentis，s_lactobacillus_salivarius，s_blautia_obeum，o_ pasteurellales，f_pasteurellaceae，g_anaerostipes，g_veillonella，f_ lactobacillaceae，g_lactobacillus；作为预测重度失代偿性肝硬化的肠道微生物包括： o_enterobacteriales，f_enterobacteriaceae，c_gammaproteobacteria，g_ unidentified_enterobacteriaceae，s_escherichia_coli，p_proteobacteria，c_ bacilli，o_lactobacillales，f_streptococcaceae，g_streptococcus，g_veillonella，o_ pasteurellales，f_pasteurellaceae，p_firmicutes，c_clostridia，o_clostridiales，f_ lachnospiraceae，f_ruminococcaceae，g_faecalibacterium，p_actinobacteria，g_ unid entif ied _la chnos pira ceae，g_bla utia，o_bifid o ba cteriales，f_ bifidobacteriaceae，g_bifidobacterium，s_ruminococcus_sp_5_1_39bfaa，c_ erysipelotrichia，o_erysipelotrichales，f_erysipelotrichaceae，g_romboutsia，f_ bacteroidaceae，g_bacteroides，g_dorea，g_roseburia，g_fusicatenibacter，g_ anaerostipes，g_unidentified_ruminococcaceae，s_bacteroides_uniformis，s_ bifidobacterium_adolescentis，s_bacteroides_uniformis，f_tannerellaceae，g_ parabacteroides；作为预测肝癌的肠道微生物包括：p_bacteroidetes/p_firmicutes，p_ firmicutes，c_clostridia，o_clostridiales，f_lachnospiraceae，f_ruminococcaceae， p_proteobacteria，g_faecalibacterium，g_blautia，c_gammaproteobacteria，o_ enterobacteriales，f_enterobacteriaceae，c_negativicutes，o_selenomonadales，c_ alphaproteobacteria，f_porphyromonadaceae，g_parabacteroides，g_ruminococcus_ torques_group，s_ruminococcus_sp_5_1_39bfaa，f_veillonellaceae，s_bacteroides_ fragilis，o_sphingobacteriales，g_fusicatenibacter，c_erysipelotrichia，o_ erysipelotrichales，f_erysipelotrichaceae，o_rhizobiales，s_parabacteroides_ distasonis，g_romboutsia，s_bacteroides_plebeius，p_tenericutes，c_mollicutes，g_ 5 CN 111549155 A 说 明 书 3/7 页 dorea，f_streptococcaceae，g_prevotella_9，f_rikenellaceae，g_alistipes，g_ anaerostipes，g_streptococcus，g_megamonas，f_lactobacillaceae，g_lactobacillus， s_blautia_obeum，g_veillonella，g_unidentified_ruminococcaceae。 与现有技术相比，本发明的有益效果在于：从宏基因组水平研究患者肠道菌群的 总体构成特点，有助于更加全面的理解菌群对宿主生理和病理的影响。根据健康人、非酒精 性脂肪肝、肝硬化、肝癌患者肠道菌群相关菌群丰度，筛选出预测肝脏疾病的肠道微生物， 之后以筛选出的肠道微生物作为检测指标综合判断，可以有效预测和监测肝脏疾病的易感 人群或者发现早期患者，以及监控肝脏疾病的治疗效果。
本发明公开了一种肠道菌群相对丰度预测肝脏疾病的分析技术，属于生物技术及医学技术领域，包括步骤一，取健康人、非酒精性脂肪肝、肝硬化、肝癌患者中段粪便并提取总RNA，通过对微生物16S rRNA基因V4可变区进行PCR扩增，进行文库构建，对微生物rRNA基因V4可变区进行测 全部
背景技术：
在人类的肠道中，存在着大量微生物。这些肠道微生物除了传统意义上的肠道细 菌群，还包括古细菌、病毒和原生动物，其中98％以上是细菌，统称为肠道菌群。正常肠道菌 群有500～1500种不同细菌种类，其中绝大多数为厌氧菌。从基因层面上看，人体自身的基 因组大约携带了2.5万个基因，而人体肠道微生物编码的基因总数约是人自身基因总数的 150倍，被视作人类“第二基因组”。人体肠道微生物的全部基因信息称为人体肠道宏基因组 (Matagenome)。 肠道既是吸收营养物质的主要器官，也是机体抵御食物中有害物质的重要免疫屏 障，更与肝脏的免疫细胞构成免疫平衡，共同维持机体稳态，肝脏疾病的发生、发展与肠道 菌群的变化关系紧密。 肝脏疾病是发生在肝脏的所有疾病的总称，包括一、肝硬化(Liver cirrhosis)， 肝硬化是临床常见的慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝 损害。肝硬化是许多肝脏疾病的晚期病变，是由病毒性肝炎、酒精中毒、营养障碍、胆汁淤 积、血吸虫病、循环障碍等各种原因所致，其特点是肝细胞变性和坏死。早期肝硬化通过及 时防治可以逆转或不再进展，而晚期将不可逆转，严重影响患者的生活质量，甚至危及生 命。 二、非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)包括单纯 性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化和肝癌，是常见的与肥胖相关的代谢性疾病之 一。一项关于中国NAFLD的流行病学研究表明中国NAFLD的综合患病率从2008-2010年的 25.4％上升到2015-2018年的32.3％，患病率增长速度是西方国家的两倍。 然而，与肝硬化和NAFLD进程相关的肠道微生物的系统发育及功能成分的变化还 不清楚，对这种菌群失衡影响的认识仍很局限。
技术实现要素：
本发明要解决的问题是提供一种通过肠道菌群相对丰度预测肝脏疾病的分析技 术，有助于更加全面的理解菌群对宿主生理和病理的影响，将肠道菌群作为检测指标预测 肝脏疾病，为人群健康监测提供指导和依据。 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种肠道菌群相对丰度预测肝 脏疾病的分析技术，包括如下步骤： 步骤一，取健康人、非酒精性脂肪肝、肝硬化、肝癌患者中段粪便并提取总RNA，通 过对微生物16S rRNA基因V4可变区进行PCR扩增，进行文库构建，对微生物rRNA基因V4可变 区进行测序，分析粪便中肠道菌群相对丰度； 4 CN 111549155 A 说 明 书 2/7 页 步骤二，将上述肠道菌群相对丰度进行ROC分析，获得AUC、灵敏度、特异度和cut- off值，选取AUC>0.7，相对丰度cut-off值>0.001的肠道微生物作为检测指标预测肝脏疾 病。 在步骤一中，取健康人、非酒精性脂肪肝、肝硬化、肝癌患者100mg中段粪便并提取 总RNA。 在步骤一中，所述肝硬化患者包括代偿性肝硬化、轻度失代偿性肝硬化、重度失代 偿性肝硬化患者。 经分析筛选后，作为预测非酒精性脂肪肝的肠道微生物包括：p_firmicutes，c_ clostridia，o_clostridiales，f_ruminococcaceae，f_bacteroidaceae，g_bacteroides， g_lachnoclostridium，s_bacteroides_vulgatus，s_blautia_obeum，p_bacteroidetes/p_ firmicutes；作为预测代偿性肝硬化的肠道微生物包括：p_proteobacteria，g_ streptococcus；作为预测轻度失代偿性肝硬化的肠道微生物包括：c_clostridia，o_ clostridiales，f_lachnospiraceae，g_blautia，g_unidentified_lachnospiraceae，c_ bacilli，o_lactobacillales，f_streptococcaceae，g_streptococcus，s_ruminococcus_ sp_5_1_39bfaa，c_negativicutes，o_selenomonadales，f_veillonellaceae，g_ romboutsia，g_unidentified_ruminococcaceae，g_fusicatenibacter，s_ bifidobacterium_adolescentis，s_lactobacillus_salivarius，s_blautia_obeum，o_ pasteurellales，f_pasteurellaceae，g_anaerostipes，g_veillonella，f_ lactobacillaceae，g_lactobacillus；作为预测重度失代偿性肝硬化的肠道微生物包括： o_enterobacteriales，f_enterobacteriaceae，c_gammaproteobacteria，g_ unidentified_enterobacteriaceae，s_escherichia_coli，p_proteobacteria，c_ bacilli，o_lactobacillales，f_streptococcaceae，g_streptococcus，g_veillonella，o_ pasteurellales，f_pasteurellaceae，p_firmicutes，c_clostridia，o_clostridiales，f_ lachnospiraceae，f_ruminococcaceae，g_faecalibacterium，p_actinobacteria，g_ unid entif ied _la chnos pira ceae，g_bla utia，o_bifid o ba cteriales，f_ bifidobacteriaceae，g_bifidobacterium，s_ruminococcus_sp_5_1_39bfaa，c_ erysipelotrichia，o_erysipelotrichales，f_erysipelotrichaceae，g_romboutsia，f_ bacteroidaceae，g_bacteroides，g_dorea，g_roseburia，g_fusicatenibacter，g_ anaerostipes，g_unidentified_ruminococcaceae，s_bacteroides_uniformis，s_ bifidobacterium_adolescentis，s_bacteroides_uniformis，f_tannerellaceae，g_ parabacteroides；作为预测肝癌的肠道微生物包括：p_bacteroidetes/p_firmicutes，p_ firmicutes，c_clostridia，o_clostridiales，f_lachnospiraceae，f_ruminococcaceae， p_proteobacteria，g_faecalibacterium，g_blautia，c_gammaproteobacteria，o_ enterobacteriales，f_enterobacteriaceae，c_negativicutes，o_selenomonadales，c_ alphaproteobacteria，f_porphyromonadaceae，g_parabacteroides，g_ruminococcus_ torques_group，s_ruminococcus_sp_5_1_39bfaa，f_veillonellaceae，s_bacteroides_ fragilis，o_sphingobacteriales，g_fusicatenibacter，c_erysipelotrichia，o_ erysipelotrichales，f_erysipelotrichaceae，o_rhizobiales，s_parabacteroides_ distasonis，g_romboutsia，s_bacteroides_plebeius，p_tenericutes，c_mollicutes，g_ 5 CN 111549155 A 说 明 书 3/7 页 dorea，f_streptococcaceae，g_prevotella_9，f_rikenellaceae，g_alistipes，g_ anaerostipes，g_streptococcus，g_megamonas，f_lactobacillaceae，g_lactobacillus， s_blautia_obeum，g_veillonella，g_unidentified_ruminococcaceae。 与现有技术相比，本发明的有益效果在于：从宏基因组水平研究患者肠道菌群的 总体构成特点，有助于更加全面的理解菌群对宿主生理和病理的影响。根据健康人、非酒精 性脂肪肝、肝硬化、肝癌患者肠道菌群相关菌群丰度，筛选出预测肝脏疾病的肠道微生物， 之后以筛选出的肠道微生物作为检测指标综合判断，可以有效预测和监测肝脏疾病的易感 人群或者发现早期患者，以及监控肝脏疾病的治疗效果。
