技术摘要：
本申请公开了一株干酪乳杆菌及其在防治肾炎中的应用。本申请经体外耐酸性试验和胆盐耐受性试验筛选出在肠道环境中生存能力较强的潜在益生菌干酪乳杆菌，并通过动物实验证实了其对急性肾缺血灌注损伤具有保护作用，减少炎症因子的分泌和纤维化程度；减缓肾脏慢性炎症的  全部
背景技术：
肾炎是一种免疫性疾病是肾免疫介导的炎性反应，是不同的抗原微生物感染人体 后，产生不同的抗体，结合成不同的免疫复合物，中国科学院肾病检测研究所认为沉积在肾 脏的不同部位造成的病理损伤，形成不同的肾炎类型。肾炎是肾脏疾病中最常见的一种，其 症状表现为乏力、腰部疼痛、肉眼血尿、水肿、高血压、肾功能异常及尿量减少等等。同时，在 肾脏手术、肾移植和体外震波碎石等过程中，均可发生不同程度的再灌注损伤，它是急性肾 衰最常见的原因。肾脏由于其血流高灌注的特性，缺血再灌注损伤发生率较高。 乳酸菌(Lactic  acid  bacteria，LAB)是一群革兰氏阳性、能发酵糖类产乳酸的细 菌总称，其在自然界中广泛存在。其中的乳杆菌与人类生活关系密切，广泛应用于食品发 酵，工业乳酸发酵及医疗保健领域中的有益微生物之一。乳杆菌是最重要的益生菌菌属，表 现出极强的益生特性，如耐胃肠道消化液和胆盐，在胃肠液中定殖生长等等。同时，益生菌 的干预可以增加肠道菌群中有益菌的含量，抗炎细菌的比例，提高机体免疫力。目前尚未发 现对减缓肾脏慢性炎症的进程，促进肾脏损伤的修复，对肾脏功能具有保护作用的乳酸菌。
技术实现要素：
本申请的目的之一在于提供一株干酪乳杆菌LC-10(Lactobacillus  casei  LC- 10)。 本申请的目的之二在于提供干酪乳杆菌LC-10(Lactobacillus  casei  LC-10)在 预防和辅助治疗肾脏炎症中的应用。 本申请的目的之三在于提供干酪乳杆菌LC-10在制备直投式发酵剂、发酵乳制品 和益生菌固体饮料、片剂的功能性保健品中的应用。 本申请的目的是通过如下技术方案实现的： 本申请所述的干酪乳杆菌(Lactobacillus  casei  LC-10)分离自锡林郭勒大草原 自然发酵的酸马奶，具体地，是通过如下方法分离筛选得到的： 1 .样品中的乳杆菌分离于自然发酵的酸马奶，分别吸取2mL所述酸马奶于灭菌小 试管中并封口，1mL于装有灭菌CaCO3粉的无菌采样瓶中(容积为2mL)，拧紧螺旋帽作为备用 样品保藏在4℃冰箱内，尽快将乳酸菌进行分离； 2.将乳杆菌分离时，吸取1mL酸马奶样品接种于10mL灭菌石蕊牛乳培养基中，置于 30-37℃恒温箱内增菌培养至酸化凝固，在培养基颜色变为粉红时将其取出，用灭菌接种环 划线接种于含有10ppm放线菌酮和10ppm硫酸粘菌素的BL琼脂培养基上； 3.放入 gaspak厌氧培养罐中，置于30-37℃条件下，培养48～72h。待菌落形 成后，用接种环或接种针挑取菌落，接种于TPY液体中，置于30-37℃条件下，培养24～48h； 4.待菌株生长良好后，再次划线接种于BL琼脂培养基中培养(培养温度和时间同 3 CN 111548964 A 说　明　书 2/8 页 上)，仔细观察记录菌落形态和革兰氏染色细胞形态特征，并同时进行过氧化氢酶试验； 5.将所述乳杆菌进一步纯化培养，并采用低温真空冷冻保存；将从酸马奶样品中 分离的乳杆菌菌株，经分析鉴定后的制成供试菌液，吸取菌悬液10μL接种于5mL  pH值为3.5 的MRS液体培养基，置于37℃培养24h；同时吸取菌悬液1.0mL与9.0mL  pH值为3.0的人工胃 液。其中，人工胃液制备法：NaCl0.2％、胃蛋白酶(pepsin，sigma)0.35％，用1mol/L  HCl调 整pH值为3.0后，过滤除菌备用。混合后，于37℃培养，分别在开始时间0h和3h后取样，使用 BCP琼脂培养基测定活菌数并计算菌株存活率； 6.通过以上方法筛选出具有高耐酸性生长和耐胃酸的乳杆菌菌株，并进一步测定 其在不同人工胃液和肠液中的存活能力以及通过体外耐胆盐试验和降低胆固醇试验，由此 获得干酪乳杆菌。 本申请将该菌株提交专利认可的机构进行保藏，其微生物保藏编号为：CGMCC  No.17343；分类命名为：干酪乳杆菌(Lactobacillus  casei)；保藏单位：中国微生物菌种保 藏管理委员会普通微生物中心；保藏时间：2019年3月18日，保藏地址：北京市朝阳区北辰西 路1号院3号，中国科学院微生物研究所；该菌株的检测结果为存活。 乳杆菌的鉴定：分离纯化的乳杆菌(Lactobacillus  casei  LC-10)，经生理生化学 特性分析和16SrDNA序列分析的方法鉴定，其微生物学特性如表1所示。 表1  Lactobacillus  casei  LC-10的生物学特性 4 CN 111548964 A 说　明　书 3/8 页 与现有技术相比，本申请提供的干酪乳杆菌(Lactobacillus  casei  LC-10)以及 与之相关的技术方案具有如下有益效果： 本申请中经体外耐酸性试验和胆盐耐受性试验筛选出在肠道环境中生存能力较 强的潜在益生菌干酪乳杆菌(Lactobacillus  casei  LC-10)，并通过动物实验证实了其对 急性肾缺血灌注损伤具有保护作用，减少炎症因子的分泌和纤维化程度；减缓肾脏慢性炎 症的进程；促进肾小管的再生修复；减少肾缺血灌注慢性纤维化引起的肾脏细胞凋亡，对肾 脏功能具有保护作用。 附图说明 为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所 需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施 例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获 得其他的附图。 图1为本申请乳酸菌的分离、纯化及保存操作流程图； 图2为Lactobacillus  casei  LC-10改善肾脏缺血再灌注损伤实验设计图； 图3为小鼠肾脏观察结果； 图4为小鼠左肾的肾脏系数柱形图； 图5为小鼠右肾的肾脏系数柱形图； 图6为小鼠尿素氮的柱形图； 图7为小鼠肌酐的柱形图； 图8为PAS染色检测肾脏肾小管细胞损伤结果； 图9为F4/80mRNA表达定量结果； 图10为VEGF-A  mRNA表达定量结果； 图11为肾组织免疫荧光染色结果； 5 CN 111548964 A 说　明　书 4/8 页 图12为肾脏组织细胞增殖再生分子Ki67表达结果； 图13为Masson及天狼新红染色结果； 图14为纤维化标记蛋白α-SMA在急性模型中mRNA表达量柱形图； 图15为纤维化标记物ICAM-1在急性模型中mRNA表达量柱形图； 图16为TGF-β1在慢性模型中mRNA表达量柱形图； 图17为纤维化标记物ICAM-1在慢性模型中mRNA表达量柱形图； 图18为肾脏纤维化蛋白水平结果。