技术摘要：
本发明涉及特异性结合IL‑4R抗原的抗体或其抗原结合片段及其制备方法、组合物和应用。本发明的抗体与IL‑4R抗原的相互作用良好，能够用于制备抗IL‑4R蛋白抗体药物，可用于治疗和/或预防炎症或过敏症。还可用于免疫学检测IL‑4R抗原。
背景技术：
白细胞介素-4(interleukin-4；IL-4)是由活化的2型T辅助细胞(Th2)产生的具有 多种生物学功能的细胞因子，由129个氨基酸残基组成疏水性的球形蛋白质。IL-4有很多靶 细胞：T 细胞、B细胞、造血细胞、成纤维细胞和各种肿瘤细胞等都具有IL-4受体。白细胞介 素-4受体(IL-4R)有两种类型：Ⅰ型主要由IL-4Rα链和γc链组成,主要在造血细胞表面表 达。II 型受体由IL-4Rα链和IL-13Rα1链构成，主要在非造血细胞和肿瘤细胞表面常表达 (La Porte SL,Juo ZS,Vaclavikova J,et al.Cell,2008,132(2):259-272)。IL-4Rα是2型 炎症通路中I型受体和II型受体的关键组成部分，阻断IL-4Rα可同时阻断两个2型免疫反应 的强效调节因子 IL-4和IL-13。在II型炎症通路中，Th2细胞(T helper 2，属于CD4 T细胞) 扮演关键角色。 II型免疫是一种包含先天性免疫和适应性免疫并促使在黏膜表面形成免 疫屏障清除病原体的特殊免疫反应。在过敏性疾病发生过程中，2型炎症通路起到重要作 用。因此，IL-4Rα是针对性治疗过敏性疾病(包括特应性皮炎、哮喘、特发性荨麻疹、慢性鼻 息肉性鼻窦炎以及食物过敏等)的关键靶点之一。 目前，已有多个IL-4R相关药物研究项目正在进行中。已报道的IL-4R抗体序列在 IL-4R 抑制活性/体内半衰期方面尚有不足，或者毒副作用明显。因此，亟需开发活性更好、 毒副作用更低的新型IL-4R抗体药物。
技术实现要素：
本发明提供具有结合IL-4R抗原的抗体及其制备方法和应用。 为实现上述目的，本发明提供了结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段。本发明所 述抗体或其抗原结合片段是指脱离人体或动物体的抗体或其抗原结合片段，即分离的抗体 或其抗原结合片段。 在本发明的一个方面中，所述抗体或其抗原结合片段轻链包含轻链互补决定区 LCDR1、 LCDR2和LCDR3，所述互补决定区包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:9所示的轻链可变 区的 CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列，或上述轻链可变区的CDR1序列、CDR2序列和CDR3 序 列在1或2或3个LCDR区上共包含至少一个且不超过8、5或4、3、2或1个氨基酸改变，优选氨基 酸取代，进一步优选保守取代。所述抗体或其抗原结合片段重链包含重链互补决定区 HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述互补决定区包括SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:10所示的重链可变 区的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列，或在1或2或3个HCDR区上共包含至少一个且不超过8、 5或4、3、2或1个氨基酸改变，优选氨基酸取代，进一步优选保守取代。优选地，所述抗体或其 抗原结合片段包含SEQ ID NO:3所示LCDR1，SEQ ID NO:4 所示LCDR2，SEQ ID NO:5所示 LCDR3，SEQ ID NO:6所示HCDR1，SEQ ID NO:7所示 HCDR2，SEQ ID NO:8所示HCDR3；或SEQ 3 CN 111592597 A 说 明 书 2/12 页 ID NO:11所示LCDR1，SEQ ID NO:12所示 LCDR2，SEQ ID NO:13所示LCDR3，SEQ ID NO:14所 示HCDR1，SEQ ID NO:15所示 HCDR2，SEQ ID NO:16所示HCDR3。 在本发明的一个方面中，所述抗体或其抗原结合片段轻链包含轻链可变区(VL)， 所述轻链可变区包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:9所示的任一氨基酸序列或包括与上述轻 链可变区氨基酸序列具有至少80％、85％或90％序列同一性的氨基酸序列；所述抗体或其 抗原结合片段重链包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包括SEQ ID NO:2或SEQ ID NO: 10所示的任一氨基酸序列或包括与上述重链可变区氨基酸序列具有至少80％、85％或90％ 序列同一性的氨基酸序列。优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含以下轻、重链可变区序 列包含： 1)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列轻链可变区和/或包含与SEQ ID NO:2所示的氨 基酸序列的重链可变区，或者 2)SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的轻链可变区和/或SEQ ID NO:10所示的氨基 酸序列的重链可变区。 本发明还提供了编码含有结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段的核酸序列。 在本发明的一个方面中，所述编码含有结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段的 核酸序列，是编码含有以下氨基酸序列的抗体或其抗原结合片段的核酸： 包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:9所示的轻链可变区的CDR1序列、CDR2序列和CDR3 序列，或上述轻链可变区的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列在1或2或3个LCDR区上共包含至 少一个且不超过8、5或4、3、2或1个氨基酸改变，优选氨基酸取代，进一步优选保守取代；或/ 和包括SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:10所示的重链可变区的CDR1序列、CDR2 序列和CDR3序 列，或在1或2或3个HCDR区上共包含至少一个且不超过8、5或4、3、 2或1个氨基酸改变，优选 氨基酸取代，进一步优选保守取代。优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:3 所示LCDR1，SEQ ID NO:4所示LCDR2，SEQ ID NO:5所示 LCDR3，SEQ ID NO:6所示HCDR1，SEQ ID NO:7所示HCDR2，SEQ ID NO:8所示HCDR3；或SEQ ID NO:11所示LCDR1，SEQ ID NO:12所 示LCDR2，SEQ ID NO:13所示LCDR3， SEQ ID NO:14所示HCDR1，SEQ ID NO:15所示HCDR2， SEQ ID NO:16所示HCDR3 本发明还提供了含有编码结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列的载 体，优选地，所述载体是表达载体。本发明所述表达载体包括但不限于，病毒载体，如腺病毒 载体、逆转录病毒载体、腺相关病毒载体等；非病毒载体，如质粒、转座子载体等。 在本发明的一个方面中，所述有编码结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段的核苷 酸序列的表达载体是质粒载体。优选地，所述有编码结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段 的核苷酸序列的质粒载体是pCDNA3.4(Life Technology)载体。 本发明还提供了用于表达结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段的宿主细胞，该 宿主细胞含有编码结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段的表达载体或编码结合人IL-4R 的抗体或其抗原结合片段的核酸。 在本发明的一个方面中，表达结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段的宿主细胞 包括但不限于哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、真菌细胞、细菌细胞。优选地，本发明提 供用于表达结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段的宿主细胞是HEK293。 本发明还涉及一种抗体检测试剂盒，所述抗体检测试剂盒包括上文所述任一结合 4 CN 111592597 A 说 明 书 3/12 页 IL-4R 抗原的抗体或其抗体片段。在本发明的一个方面中,所述抗体检测试剂盒还包括用 于对CGRP 抗原抗体反应进行检测的检测试剂、阴性对照、阳性对照。 根据本发明的另一方面，还提供一种组合物，其包含上文所述结合人IL-4R的抗体 或其抗原结合片段、以及药学上可接受的载体。所述药学上可接受的载体包括以下中的一 种或多种：药学上可接受的溶剂、分散剂、附加剂、塑形剂、药物辅料。 根据本发明的另一方面，还提供上文所述的结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片 段在预防和/或治疗IL-4R相关疾病中的用途以及在制备预防和/或治疗IL-4R相关疾病药 物中的用途。其中，所述IL-4R相关病症是炎症或过敏性疾病。优选地，所述炎症或过敏性疾 病是哮喘。 本发明还提供了上文所述结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段在制备IL-4R相 关病症诊断试剂中的应用。 附图说明 图1示出了转基因小鼠血清滴度。 图2示出了候选抗体阻断IL4/IL4R的蛋白结合活性的比较。 图3示出了BA167、BA173、BA030、Dupilumab与IL4R蛋白结合活性的比较。 图4示出了BA167、BA173、BA030、Dupilumab阻断IL4/IL4R的蛋白结合活性比较。 图5示出了BA167、BA173、BA030、Dupilumab阻断IL13 IL13RA1/IL4R的蛋白结合活 性比较。 图6示出了BA167、BA173、BA030和Dupilimab与Human/Rhesus/Mouse IL4R的结合 差异。 图7示出了IL4诱导的TF-1细胞增殖抑制实验。 图8示出了IL13诱导的TF-1细胞增殖抑制实验。 图9示出了候选抗体对PBMC细胞的增殖抑制作用。 图10示出了食蟹猴皮下注射2.5mg/kg处方BA167、BA173、Dupilumab后体体内平均 浓度-时间曲线。 图11示出了给药后B-hIL4/hIL4Rα双人源化哮喘模型小鼠血清中IgE水平变化。 图12示出了给药后B-hIL4/hIL4RA双人源化哮喘模型小鼠BALF嗜酸细胞水平的变 化。 图13示出了对BA173、BA167和Dupilumab抗体免疫原性检测。
