技术摘要：
本发明公开了一种小鼠短串联重复序列的多重扩增体系，该多重扩增体系中包含18对引物，可同时扩增18个小鼠的STR位点。本发明还包括由所述多重扩增体系构成的检测试剂盒。本发明所述多重扩增体系通过一次扩增即可获得大量信息；扩增产物带有荧光，可直接在测序仪上进行检  全部
背景技术：
从第一株实验室培养的细胞系诞生后不久，就一直有关于细胞系交叉污染问题的 文章及报道。曾有文献作者根据检测结果估算，全球在用的细胞系有高达20％至33％是被 错误标记或辨识。从2015年开始，多家科学界权威杂志社陆续要求撰稿人需要对所使用的 细胞系提供鉴定报告，以证明所使用的细胞系没有交叉污染或被错误标记。之后，细胞系交 叉污染问题才得到广大科研工作人员的重视。近来，使用错误细胞系的情况虽有所改善，但 仅仅是对于人源细胞系而言；对于其他种属的细胞，因为没有统一的数据库或没有稳定的 检测体系等，情况一直没有很大的改善。而大量的未经鉴定的非人源细胞系的使用，同样会 造成科研时间和经费的浪费，同时也会导致错误结论或误导其他科研人员。 短串联重复序列(STR)检测已广泛应用于亲缘鉴定、法医鉴定等检测中；而且在人 源细胞系的鉴定中也非常成熟，并已建立起了统一的STR位点信息数据库，可供广大科研人 员查询和比对。 小鼠细胞系是除人源细胞系外使用最多的一类细胞系。虽然小鼠已有全基因组序 列，但仍没有一个标准的STR  Marker组合和标准数据库可以检索。 在2016年，专利CN105648100A，更新了小鼠短串联重复序列的复合扩增体系及检 测试剂盒，包含9个位点和一个性别判定位点。但9个位点所能提供的分辨率对于数量庞大 的小鼠个体来说是远远不够的，并不确保能把每只小鼠个体区分开来。这对小鼠细胞系及 小鼠个体的鉴定来说都是不利的，亟需开发针对更多位点的小鼠短串联重复序列多重扩增 体系及检测试剂盒。
技术实现要素：
本发明的目的是为了解决上述现有技术的缺点和不足，提供一种小鼠短串联重复 序列的多重扩增体系及检测试剂盒，通过鉴定小鼠的STR位点来鉴定小鼠细胞系。 本发明是通过以下技术方案来实现的： 一种小鼠短串联重复序列的多重扩增体系，包含18对引物，可同时扩增18个小鼠 的STR位点Mmus-1、Mmus-2、Mmus-3、Mmus-4、Mmus-5、Mmus-6、Mmus-7、Mmus-8、Mmus-9、Mmus- 10、Mmus-11、Mmus-12、Mmus-13、Mmus-14、Mmus-15、Mmus-16、Mmus-17、Mmus-18；所述引物分 别为: 扩增Mmus-1的上游引物：AGCTATCAGAGATGCCCCCT(SEQ  ID  NO:1)； 扩增Mmus-1的下游引物：GACAGATAGTGAACTCTAGG(SEQ  ID  NO:2)； 扩增Mmus-2的上游引物：CTACAGTCTTTCTGTCTTT(SEQ  ID  NO:3)； 扩增Mmus-2的下游引物：GGACTTTGGGGGGGAGGTT(SEQ  ID  NO:4)； 5 CN 111718999 A 说　明　书 2/13 页 扩增Mmus-3的上游引物：CTTTGCTGGAAAGAGAAAGAG(SEQ  ID  NO:5)； 扩增Mmus-3的下游引物：CATTCTAAAGTTCCTGCTTAGC(SEQ  ID  NO:6)； 扩增Mmus-4的上游引物：GGAGTTACAGATAGTTGTGAGC(SEQ  ID  NO:7)； 扩增Mmus-4的下游引物：ATGGATAGATACATACATCC(SEQ  ID  NO:8)； 扩增Mmus-5的上游引物：GGCAGGACAGGTGGTGACAAG(SEQ  ID  NO:9)； 扩增Mmus-5的下游引物：TGACATTTAATTTTTCTTGTAACCC(SEQ  ID  NO:10)； 扩增Mmus-6的上游引物：CACTTCCTGGGCCGGTGGCT(SEQ  ID  NO:11)； 扩增Mmus-6的下游引物：AACTTCCCCTTCCTGGTGTGG(SEQ  ID  NO:12)； 扩增Mmus-7的上游引物：GAAAAGTGAAGTTGTTTGCA(SEQ  ID  NO:13)； 扩增Mmus-7的下游引物：CTTAGGTAGTTCCAATACTT(SEQ  ID  NO:14)； 扩增Mmus-8的上游引物：AGTGGAGAAGAGGGAGCGCAAT(SEQ  ID  NO:15)； 扩增Mmus-8的下游引物：GATTACAAGTGACCTCAGTTG(SEQ  ID  NO:16)； 扩增Mmus-9的上游引物：TTTGACCCAACACCAGTTG(SEQ  ID  NO:17)； 扩增Mmus-9的下游引物：GGAATCCTAGTCCCCAACTGGT(SEQ  ID  NO:18)； 扩增Mmus-10的上游引物：GGCCACCTATGTTAGTGATCC(SEQ  ID  NO:19)； 扩增Mmus-10的下游引物：TACCCCAAAATGGTCTAGAG(SEQ  ID  NO:20)； 扩增Mmus-11的上游引物：TTCACAGTCCTGACACAGGG(SEQ  ID  NO:21)； 扩增Mmus-11的下游引物：TAGGAGACAGAGTCTCACC(SEQ  ID  NO:22)； 扩增Mmus-12的上游引物：AGGTCATAAATTGTCAATTT(SEQ  ID  NO:23)； 扩增Mmus-12的下游引物：CCTTGTTCAATATCAGAAT(SEQ  ID  NO:24)； 扩增Mmus-13的上游引物：GGTATTAACCCAAGTCCTTGAG(SEQ  ID  NO:25)； 扩增Mmus-13的下游引物：ATCCCCATAAACCATAAGCC(SEQ  ID  NO:26)； 扩增Mmus-14的上游引物：TGTCTGTCATAAATAAGGTAG(SEQ  ID  NO:27)； 扩增Mmus-14的下游引物：AGATCAAGAGGCTATCTAAAC(SEQ  ID  NO:28)； 扩增Mmus-15的上游引物：CCATCCTGGCATGTCTCTAC(SEQ  ID  NO:29)； 扩增Mmus-15的下游引物：TGATAAACTAAATCTGATCCCC(SEQ  ID  NO:30)； 扩增Mmus-16的上游引物：GTGTCATGCTAACTCACAGGTA(SEQ  ID  NO:31)； 扩增Mmus-16的下游引物：AATCACCAGGTCTGCTAAAT(SEQ  ID  NO:32)； 扩增Mmus-17的上游引物：ACATGTACCAGTCCTCAAGGC(SEQ  ID  NO:33)； 扩增Mmus-17的下游引物：CTGGTGCTCACAGCACTGAGT(SEQ  ID  NO:34)； 扩增Mmus-18的上游引物：TAGCCAAGATATGCAAAGAAC(SEQ  ID  NO:35)； 扩增Mmus-18的下游引物：GCATTATCATATTCATGACT(SEQ  ID  NO:36)。 进一步地，所述多重扩增体系还包括一对能扩增小鼠性别判定位点Kdm5的引物， 分别为： 扩增Kdm5的上游引物：GAAGCTTTTGGCTTTGAGC(SEQ  ID  NO:37)； 扩增Kdm5的下游引物：CCGCTGCCAAATTCTTTGG(SEQ  ID  NO:38)。 进一步地，上述19对引物被分为四组，每组引物带有不同的荧光标记物，且四组引 物分别在每一对引物的上游引物5‘末端添加相应颜色的荧光标记物；所述第一组为Mmus- 16、Mmus-5、Kdm5、Mmus-8和Mmus-17；第二组为Mmus-2、Mmus-9、Mmus-1、Mmus-4和Mmus-10； 6 CN 111718999 A 说　明　书 3/13 页 第三组为Mmus-3、Mmus-14、Mmus-7和Mmus-11；第四组为Mmus-15、Mmus-12、Mmus-6、Mmus-18 和Mmus-13。 进一步地，所述第一组、第二组、第三组和第四组引物分别采用不同的荧光标记， 所述四组引物的荧光标记可以从6-FAM、VIC、NED、PET随机组合，或从FL、JOE、TMR、CXR随机 组合。 进一步地，所述多重扩增体系还包括：PCR反应缓冲液、模板DNA和Taq酶。 更进一步地，所述Taq酶为热启动适合多重位点扩增用Taq酶。 本发明还包括小鼠短串联重复序列的多重扩增检测试剂盒，包括上述多重扩增体 系。 进一步地，所述试剂盒的引物有19对，其用量体积比如下： 引物扩增的位点名称 各引物体积(μl) Mmus-1 7.5μl Mmus-2 11.25μl Mmus-3 6.25μl Mmus-4 10μl Mmus-5 10μl Mmus-6 12.5μl Mmus-7 10μl Mmus-8 10μl Mmus-9 10μl Mmus-10 10μl Mmus-11 10μl Mmus-12 10μl Mmus-13 12.5μl Mmus-14 5μl Mmus-15 10μl Mmus-16 7.5μl Mmus-17 10μl Mmus-18 13.75μl Kdm5 10μl 进一步地，所述试剂盒的多重扩增体系具体如下： 无核酸酶纯水 8.5μl 2x  PCR反应缓冲液 12.5μl 引物混合物(PrimerMix) 2.5μl Taq酶 0.5μl 模板DNA 1μl 总计 25μl 本发明的优势在于： 1、一次扩增即可获得19个位点的大量信息。 7 CN 111718999 A 说　明　书 4/13 页 2、扩增产物带有荧光，可直接在测序仪上进行检测，结果准确，重复性高，数据可 建立标准参考数据库。 3、操作简便，需时短，易于规模化及自动化。 为了更好地理解和实施，下面结合附图详细说明本发明。 附图说明 图1是小鼠4T1细胞的STR图谱。 图2是小鼠BV2细胞的STR图谱。 图3是小鼠CT26.WT细胞的STR图谱。 图4是小鼠Hepa1-6细胞的STR图谱。 图5是小鼠L929细胞的STR图谱。 图6是小鼠M-1细胞的STR图谱。 图7是小鼠MS1细胞的STR图谱。 图8是小鼠NIH/3T3细胞的STR图谱。 图9是小鼠P19细胞的STR图谱。 图10是小鼠RAW264.7细胞的STR图谱。 图11是小鼠Renca细胞的STR图谱。 图12是小鼠SP2/0-Ag14细胞的STR图谱。 图13是中国仓鼠CHO-K1细胞的STR图谱。 图14是大鼠H9C2细胞的STR图谱。 图15是人源SK-OV-3细胞的STR图谱。