技术摘要：
本发明涉及一种可自动加液及调节预冻高度的精液冷冻稀释方法，包括如下步骤：将新鲜精液放入50ml的烧杯中，于自动加液稀释装置的恒温水浴摇床上预热，摇床转速设定为10‑220rpm；稀释液下滴的速度控制为10‑200微升/秒；液氮气相预冻时，预冻装置高度根据动物品种确定  全部
背景技术：
现代畜牧业，养牛养猪大部分都是用冻精来做人工授精让母畜怀孕，场里很少养 公牛，冻精要稀释后做成细管，一个母畜一只细管，这样一只公畜就能供很多母畜受孕，精 液冷冻保存技术对于遗传资源保护和人工授精技术推广具有重要意义。冷冻精液的品质关 系到母畜怀孕生产的效率和仔畜的强壮程度，是影响现代畜牧业生产效益的关键因素。通 常，精液冷冻过程包括精液采集、质量评价、精液稀释、低温平衡、液氮气相预冻和液氮保存 等环节，对于如何提高冷冻精液品质，目前国内外相关研究主要集中于稀释液配方上，最近 还有文献报道提出，由于稀释效应的存在，冷冻精液中，稀释液与需要冷冻的新鲜精液的比 例会对解冻后的精子质量产生一定影响。 然而实际操作中，每个环节都会对冻精品质产生影响，特别是精液稀释、液氮气相 预冻这2个环节，是给精液冷冻带来负面效应的关键环节。稀释液的添加速度以及精液与稀 释液混匀的速度对冻精品质有关键影响，但是长期以来，研究人员和日常生产人员对这一 环节关注度不足，精液稀释基本都是人工手动，靠经验操作，稀释液添加速度和精液与稀释 液混匀的速度无法实现标准化，不同的操作人员其稀释效果差异大，不统一、不标准，是造 成不同批次冻精质量差异的重要原因之一。 另外，在液氮气相预冻操作时，目前的预冻装置为一个金属台座，将细管放在金属 台座上再放入液氮气相中预冻，但是长期以来，研究人员和日常生产人员并未意识到液氮 气相的温度随高度不同而不同，不同品种的动物，精液在预冻时需要的温度实际上并不相 同，如果不管什么动物的精液预冻时都只用一个固定高度的金属台座，而不管冻精细管离 液氮液面的高度，这样做并不科学，也没有完全挖掘提升冻精品质的潜力。
技术实现要素：
为解决以上问题，本发明提出一种可自动加液及调节预冻高度的精液冷冻稀释方 法，对稀释液添加方式和预冻方式提出标准化的解决方案。 本发明解决其技术问题所采用的技术方案为： 一种可自动加液及调节预冻高度的精液冷冻稀释方法，包括如下步骤： 1)采集新鲜精液进行品质检查，精子活力大于75％，精子密度大于2.5×109/ml， 畸形率小于10％的可以用于冷冻保存； 2)将步骤1)获得的符合冷冻保存条件的新鲜精液放入50ml的烧杯中，所述烧杯事 先放置于自动加液稀释装置的恒温水浴摇床上预热，温度设置为36-40℃； 3)打开所述自动加液稀释装置的摇床，转速设定为10-220rpm； 4)将稀释液加入所述自动加液稀释装置的滴定管，打开滴定管下部的流量控制 3 CN 111602650 A 说　明　书 2/7 页 阀，将稀释液下滴的速度控制为10-200微升/秒； 5)稀释液滴尽后，关闭摇床，取下烧杯，将杯中已经稀释好的精液分装于0.25ml塑 料细管中，封口； 6)将步骤5)获得的塑料细管和预冻装置一起置于5℃环境中平衡4小时，塑料细管 与预冻装置不接触； 7)在5℃环境中将完成步骤6)的塑料细管快速摆放在预先调节好高度的预冻装置 上，然后将预冻装置连同塑料细管一起快速转移到液氮蒸汽中熏蒸预冻10分钟，最后投入 液氮中保存；所述预冻装置高度是指所述预冻装置在液氮蒸汽中熏蒸时，预冻装置的金属 网距离液氮液面的高度； 8)使用时，取出塑料细管直接投入37℃水浴中30秒-60秒解冻。 进一步，步骤2)中，置于恒温水浴摇床上预热的烧杯为空烧杯，或者事先加入少量 稀释液，加入量最多不超过预备稀释的新鲜精液量。 进一步，所述自动加液稀释装置包括基座(1)，所述基座(1)上设置有恒温水浴摇 床(2)，所述基座(1)上安装有伸缩支架(4)，所述伸缩支架(4)的上端焊接有卡箍件(5)，所 述卡箍件(5)内卡接有滴定管(6)，所述滴定管(6)的底端设置流量控制阀(7)。 进一步，所述预冻装置由金属网(13)、锯齿状挡边(14)、框体(20)、滑块(17)、支腿 (21)、把手(16)构成，所述金属网(13)两端设置挡板(22)，所述挡板(22)通过螺栓固定连接 在滑块(17)上，所述金属网(13)两侧边设置锯齿状挡边(14)，所述框体(20)两端固定连接 滑块(17)，所述滑块(17)套接在支腿(21)上，支腿(21)上等距离间隔的设有若干高度调节 孔(18)，滑块(17)上设有与高度调节孔(18)同等大小的开孔并通过定位螺栓(19)固定连接 支腿(21)；所述把手(16)固定在所述滑块(17)上 进一步，所述自动加液稀释装置的稀释液下滴的速度控制为50-100微升/秒。 进一步，所述自动加液稀释装置的摇床，转速设定为40-120rpm。 进一步，当精液来自绵羊或山羊时，所述预冻装置的金属网距离液氮液面的高度 为4cm。 进一步，当精液来自番鸭时，所述预冻装置的金属网距离液氮液面的高度为6cm。 本发明的有益效果为： 1、可自动添加稀释液，标准化操作，排除个人手工操作干扰：本发明提出的自动加 液稀释装置，利用滴定时液滴自动下滴，流量可控，可标准化操作的特点，将目前使用的个 人手工添加稀释液的方式转变为自动添加稀释液的方式，排除了不同人操作导致的不同批 次冻精质量不一致的问题，同时验证了采用本发明的滴定方式自动添加稀释液，可以避免 精液稀释过程中产生的稀释效应，减少了稀释过程中精子的失活概率。 2、可根据不同动物调整不同的液氮气相预冻高度：气相预冻是冻精制备过程中的 一个小环节，因为时间较短，很容易被忽略，但实际上液氮液面上不同高度的空气温度是不 一样的，不同物种的动物精子，对冷冻损伤的抵抗力也不一样，本发明考虑到这个环节，并 经过试验验证了液氮气相预冻高度对冻精品质的影响，提出了一种能调整高度的预冻装 置，同时提出山羊和绵羊，番鸭两类动物的最佳预冻高度，便利了冻精生产人员的操作，提 高的冻精品质。 3、操作简单，成本低廉：本发明使用到的自动加液稀释装置和可调节高度的预冻 4 CN 111602650 A 说　明　书 3/7 页 装置结构简单，利用实验室现有器械进行简单改造即可使用，同时对日常工作的精液冷冻 前的稀释处理方法并没有太大改动，因此不会对冻精售价造成影响，但是显著提高了冻精 品质，在生产试验中能提高产羔率8-9个百分点，显著提高了畜牧养殖场的生产效益。 附图说明 图1为本发明的自动加液稀释装置结构示意图； 图2为本发明的自动加液稀释装置俯视结构示意图； 图3为本发明的预冻装置结构示意图； 图中各标号列示如下： 1、基座；2、恒温水浴摇床；3、烧杯；4、伸缩支架；5、卡箍件；6、滴定管；7、流量控制 阀；8、套孔；9、垫脚；10、定位套环；11、套筒；12、第一调节螺栓；13、金属网；14、锯齿状挡边； 15、支腿挡边；16、把手；17、滑块；18、高度调节孔；19、定位螺栓；20、框体；21、支腿；22、挡 板。