技术摘要：
本发明提供了一种蝴蝶花‘梦蝶’的组培快繁方法，属于植物学领域。包括：(1)外植体消毒；(2)愈伤组织诱导；(4)愈伤组织分化丛生芽；(5)丛生芽的继代增殖；(6)丛生芽的壮苗生根；(7)组培苗炼苗移栽。本发明以蝴蝶花幼嫩花茎作为外植体，以间接诱导愈伤组织的方式分化成 全部
背景技术：
鸢尾栽培历史悠久，花色丰富、花型奇特，具有重要的观赏价值和观赏价值。国内 长期依赖于从日本、美国、荷兰等地引进鸢尾，但是目前存在引种手续复杂、价格昂贵等问 题，极大地影响了鸢尾在中国的推广应用。 蝴蝶花‘梦蝶’为上海植物园自主培育的蝴蝶花新品种，花为蓝紫色，具有四季常 绿，耐荫耐湿热的优点，具有极大的市场推广潜力。分株繁殖能在较短时间内获得的具有开 花能力的新植株，并能保持品种的特异性，目前仍然是鸢尾繁殖最常见的方法。但是分株繁 殖方式繁殖系数低且易感病，无法满足大规模的商业生产，因此，迫切需要开发鸢尾间接发 生技术的方法以扩大其数量，以利于应用推广，另外，亦可作为转基因受体系统用于转基因 植株研究。 申请号为201110177549.4的发明专利公开一种鸢尾组培快繁方法，以路易斯安那 鸢尾幼嫩地下芽为外植体，经过无菌处理、丛生芽诱导增殖、丛生芽壮苗生根、组培苗炼苗 和移栽等步骤，以直接发生的方法获得完整植株，此方法操作简单，植株再生的成功率高， 但此方法不适用于蝴蝶花‘梦蝶’进行组织培养。 申请号为201410038236.4的发明专利涉及一种德国鸢尾组培快繁方法，以德国鸢 尾的小芽为原材料，经过无菌处理、不定芽分化增殖、不定芽壮苗生根、组培苗炼苗移栽等 步骤，可获得完整植株，此为直接发生的方法获得苗木，和上述路易斯安娜的方法一致，可 以很好的保留母本形状，提高繁殖速度和整齐度，但此方法不适用于蝴蝶花‘梦蝶’进行组 织培养。 申请号为20181199753.4的发明专利涉及一种德国鸢尾幼胚诱导胚性愈伤组织的 方法，以德国鸢尾自交或杂交后40-50d的蒴果为外植体，经过无菌处理，提取种子中幼胚进 行胚性愈伤组织诱导、增殖，获得胚性愈伤组织。但此方法不适用于蝴蝶花‘梦蝶’进行组织 培养。
技术实现要素：
针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种蝴蝶花‘梦蝶’的组培快繁方 法，包括如下步骤： 步骤1：一个选择材料的步骤，在每年的3月上旬到3月中旬，选择健康、无病虫害的 ‘梦蝶’幼嫩花茎，截取整枝花茎备用； 步骤2：一个对步骤1)的花茎材料进行消毒的步骤，将截取的花茎进行修剪清理， 用洗洁精浸泡并搅拌，然后流水冲洗1-3h，转移到超净工作台后采用质量百分比浓度为60- 80％的酒精浸泡20-50s，再用无菌水冲洗一次，重复至少两次后用质量百分比浓度为0.1- 3 CN 111567401 A 说 明 书 2/4 页 0.3％的HgCl2震荡5-15min，最后采用无菌水冲洗至少两次备用； 步骤3：一个对愈伤组织进行诱导的步骤，将步骤2)的材料侧切一刀，垂直放置于 愈伤组织诱导培养基中，诱导培养基为：MS 6-BA 3.0mg/L NAA1.0 mg/L，光培养30d后切口 部分开始产生明显淡黄色愈伤组织，50d继代一次； 步骤4：一个对愈伤组织进行分化的步骤，将步骤3)中的愈伤组织切为长度为 0.5cm的小块，接种于愈伤组织分化培养基中，愈伤组织分化培养基为：MS 6-BA1 .0mg/L NAA1.0 mg/L，光培养，30天继代一次； 步骤5：一个对丛生芽进行伸长壮苗的步骤，将步骤4)中的丛生芽转至伸长壮苗培 养基，伸长壮苗培养基为：1/2MS NAA 0.5mg/L，光培养20-30d； 步骤6：一个对丛生芽进行生根培养的步骤，将步骤5)中的丛生芽切分2-3株为单 位，接种入生根培养基中，生根培养基为：MS，暗培养40d； 步骤7：一个炼苗驯化的步骤，将生根完成的组培苗在培养室内开盖，注入没过培 养基的无菌水，放置3-5d，取出生根苗，清洗培养基后于当天移栽到过度基质中，过度基质 由下层的园土和上层的调配基质构成，园土和调配基质的体积比为1：0.8～1.2，所述的调 配基质由珍珠岩和蛭石组成，所述的珍珠岩和蛭石的体积比为1.8～2.5：1；栽植完成后浇 透水覆盖保温，光培养30d； 步骤8：一个移栽的步骤，将步骤7中的幼苗移植土壤基质中，基质由园土、珍珠岩 和蛭石组成，所述的园土、珍珠岩和蛭石的体积比为3：1：1，获得蝴蝶花‘梦蝶’。 本发明以3月‘梦蝶’的幼嫩花茎为外植体，经过愈伤诱导-分化-伸长壮苗-生根- 移栽等步骤，通过间接诱导的方法，短期内获得大量植株，使其保持母体的优良形状，并可 作为转基因受体系统，为进一步该品种推广应用和转基因研究奠定基础。本方法可实现迅 速增殖‘梦蝶’组培苗，以达到推广需要的数量和目的，可为未来鸢尾相关技术进行指导。 本发明和已有技术相比，其技术进步是显著的。本发明以蝴蝶花幼嫩花茎作为外 植体，以间接诱导愈伤组织的方式分化成苗，较直接诱导繁殖速度更快，短期内获得大量新 植株。 附图说明 图1为采用本发明的开花‘梦蝶’。 图2为采用本发明组织培养方法培养诱导愈伤组织。 图3为采用本发明组织培养方法培养愈伤组织分化实物图。 图4为采用本发明组织培养方法体视镜采集叶片分化图。 图5为采用本发明组织培养方法丛生芽伸长壮苗图 图6为采用本发明组织培养方法生根实物图。 图7为采用本发明组织培养方法炼苗实物图。 图8为采用本发明组织培养方法驯化实物图。 图9为采用本发明组织培养方法移栽实物图。
