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一种蝴蝶花‘梦蝶’的组培快繁方法


技术摘要:
本发明提供了一种蝴蝶花‘梦蝶’的组培快繁方法,属于植物学领域。包括:(1)外植体消毒;(2)愈伤组织诱导;(4)愈伤组织分化丛生芽;(5)丛生芽的继代增殖;(6)丛生芽的壮苗生根;(7)组培苗炼苗移栽。本发明以蝴蝶花幼嫩花茎作为外植体,以间接诱导愈伤组织的方式分化成  全部
背景技术:
鸢尾栽培历史悠久,花色丰富、花型奇特,具有重要的观赏价值和观赏价值。国内 长期依赖于从日本、美国、荷兰等地引进鸢尾,但是目前存在引种手续复杂、价格昂贵等问 题,极大地影响了鸢尾在中国的推广应用。 蝴蝶花‘梦蝶’为上海植物园自主培育的蝴蝶花新品种,花为蓝紫色,具有四季常 绿,耐荫耐湿热的优点,具有极大的市场推广潜力。分株繁殖能在较短时间内获得的具有开 花能力的新植株,并能保持品种的特异性,目前仍然是鸢尾繁殖最常见的方法。但是分株繁 殖方式繁殖系数低且易感病,无法满足大规模的商业生产,因此,迫切需要开发鸢尾间接发 生技术的方法以扩大其数量,以利于应用推广,另外,亦可作为转基因受体系统用于转基因 植株研究。 申请号为201110177549.4的发明专利公开一种鸢尾组培快繁方法,以路易斯安那 鸢尾幼嫩地下芽为外植体,经过无菌处理、丛生芽诱导增殖、丛生芽壮苗生根、组培苗炼苗 和移栽等步骤,以直接发生的方法获得完整植株,此方法操作简单,植株再生的成功率高, 但此方法不适用于蝴蝶花‘梦蝶’进行组织培养。 申请号为201410038236.4的发明专利涉及一种德国鸢尾组培快繁方法,以德国鸢 尾的小芽为原材料,经过无菌处理、不定芽分化增殖、不定芽壮苗生根、组培苗炼苗移栽等 步骤,可获得完整植株,此为直接发生的方法获得苗木,和上述路易斯安娜的方法一致,可 以很好的保留母本形状,提高繁殖速度和整齐度,但此方法不适用于蝴蝶花‘梦蝶’进行组 织培养。 申请号为20181199753.4的发明专利涉及一种德国鸢尾幼胚诱导胚性愈伤组织的 方法,以德国鸢尾自交或杂交后40-50d的蒴果为外植体,经过无菌处理,提取种子中幼胚进 行胚性愈伤组织诱导、增殖,获得胚性愈伤组织。但此方法不适用于蝴蝶花‘梦蝶’进行组织 培养。
技术实现要素:
针对现有技术中的上述技术问题,本发明提供了一种蝴蝶花‘梦蝶’的组培快繁方 法,包括如下步骤: 步骤1:一个选择材料的步骤,在每年的3月上旬到3月中旬,选择健康、无病虫害的 ‘梦蝶’幼嫩花茎,截取整枝花茎备用; 步骤2:一个对步骤1)的花茎材料进行消毒的步骤,将截取的花茎进行修剪清理, 用洗洁精浸泡并搅拌,然后流水冲洗1-3h,转移到超净工作台后采用质量百分比浓度为60- 80%的酒精浸泡20-50s,再用无菌水冲洗一次,重复至少两次后用质量百分比浓度为0.1- 3 CN 111567401 A 说 明 书 2/4 页 0.3%的HgCl2震荡5-15min,最后采用无菌水冲洗至少两次备用; 步骤3:一个对愈伤组织进行诱导的步骤,将步骤2)的材料侧切一刀,垂直放置于 愈伤组织诱导培养基中,诱导培养基为:MS 6-BA  3.0mg/L NAA1.0  mg/L,光培养30d后切口 部分开始产生明显淡黄色愈伤组织,50d继代一次; 步骤4:一个对愈伤组织进行分化的步骤,将步骤3)中的愈伤组织切为长度为 0.5cm的小块,接种于愈伤组织分化培养基中,愈伤组织分化培养基为:MS 6-BA1 .0mg/L NAA1.0  mg/L,光培养,30天继代一次; 步骤5:一个对丛生芽进行伸长壮苗的步骤,将步骤4)中的丛生芽转至伸长壮苗培 养基,伸长壮苗培养基为:1/2MS NAA  0.5mg/L,光培养20-30d; 步骤6:一个对丛生芽进行生根培养的步骤,将步骤5)中的丛生芽切分2-3株为单 位,接种入生根培养基中,生根培养基为:MS,暗培养40d; 步骤7:一个炼苗驯化的步骤,将生根完成的组培苗在培养室内开盖,注入没过培 养基的无菌水,放置3-5d,取出生根苗,清洗培养基后于当天移栽到过度基质中,过度基质 由下层的园土和上层的调配基质构成,园土和调配基质的体积比为1:0.8~1.2,所述的调 配基质由珍珠岩和蛭石组成,所述的珍珠岩和蛭石的体积比为1.8~2.5:1;栽植完成后浇 透水覆盖保温,光培养30d; 步骤8:一个移栽的步骤,将步骤7中的幼苗移植土壤基质中,基质由园土、珍珠岩 和蛭石组成,所述的园土、珍珠岩和蛭石的体积比为3:1:1,获得蝴蝶花‘梦蝶’。 本发明以3月‘梦蝶’的幼嫩花茎为外植体,经过愈伤诱导-分化-伸长壮苗-生根- 移栽等步骤,通过间接诱导的方法,短期内获得大量植株,使其保持母体的优良形状,并可 作为转基因受体系统,为进一步该品种推广应用和转基因研究奠定基础。本方法可实现迅 速增殖‘梦蝶’组培苗,以达到推广需要的数量和目的,可为未来鸢尾相关技术进行指导。 本发明和已有技术相比,其技术进步是显著的。本发明以蝴蝶花幼嫩花茎作为外 植体,以间接诱导愈伤组织的方式分化成苗,较直接诱导繁殖速度更快,短期内获得大量新 植株。 附图说明 图1为采用本发明的开花‘梦蝶’。 图2为采用本发明组织培养方法培养诱导愈伤组织。 图3为采用本发明组织培养方法培养愈伤组织分化实物图。 图4为采用本发明组织培养方法体视镜采集叶片分化图。 图5为采用本发明组织培养方法丛生芽伸长壮苗图 图6为采用本发明组织培养方法生根实物图。 图7为采用本发明组织培养方法炼苗实物图。 图8为采用本发明组织培养方法驯化实物图。 图9为采用本发明组织培养方法移栽实物图。
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