技术摘要：
本发明属于饲料添加剂技术领域，具体涉及甘草酸和益生菌配伍作为缓解呕吐毒素的饲料添加剂。本发明通过研究呕吐毒素诱导肠上皮细胞炎症和凋亡的分子机制，阐明了甘草酸对呕吐毒素诱导的细胞炎症和凋亡的修复机制，在此基础上本发明提出了甘草酸在制备缓解呕吐毒素危害  全部
背景技术：
脱氧雪烯醇(Deoxynivalenol,DON)，又名呕吐毒素，是由赤霉病菌产生的一类B型 单端孢霉菌毒素，主要存在于小麦、玉米、燕麦、大麦等谷物中。DON对人和许多动物都存在 毒性作用，其中猪是对DON最敏感的动物之一，会导致呕吐、腹泻、生长缓慢、免疫系统紊乱 和经济损失。动物肠道是机体抵御外界有害物质入侵的第一道屏障，肠粘膜是吸收和运输 葡萄糖、氨基酸、微量元素等多种营养物质的重要屏障。DON可引起肠道通透性增加、粘膜受 损和坏死、细胞凋亡、抗氧化能力降低和线粒体功能障碍，从而导致猪肠道损伤。紧密连接 蛋白是主要维持肠上皮屏障的连接性多蛋白复合物，当它们被环境条件(霉菌毒素、环境改 变、饲料更替等)破坏时，会引起机体损伤和炎症，甚至影响营养物质的运输和吸收。 甘草是一种多年生草本植物，具有良好的解毒作用，甘草提取物被广泛应用于畜 牧业，以促进动物生长，提高肉质，预防和治疗多种畜禽疾病，另有文献报道甘草提取物在 临床上可用于治疗肝损伤。甘草酸(Glycyrrhinic  acid ,GA)是甘草中的一种提取物，具有 多种药理活性，包括抗炎、调节免疫、抗氧化、抗病毒、抗癌、降血脂等作用，是否可将甘草酸 用于治疗或缓解DON引起的肠道毒性、炎症，从而提供一种有效且经济实惠的兽药或饲料添 加剂是本发明想要解决的技术问题。 益生菌是通过改善宿主胃肠道微生态平衡而发挥有益作用，达到提高宿主健康水 平和健康状态的活菌制剂或其代谢产物，动物体内有益的细菌或者真菌主要有：乳酸菌、双 歧杆菌、放线菌、酵母菌、肠杆菌等。益生菌具有调节动物胃肠道微生物区系、降解霉菌毒 素、解除免疫抑制、抑制有害菌生长繁殖及促进动物生产等功效。是否能将甘草酸与益生菌 进行配伍，从而获得一种经济、有效的缓解呕吐毒素对肠道细胞危害的饲料添加剂，这在现 有技术中尚无报道，因而是本发明想要解决的主要技术问题。
技术实现要素：
为了解决上述技术问题，本发明目的是提出甘草酸与益生菌配伍作为缓解DON的 饲料添加剂；本发明通过研究DON诱导肠上皮细胞炎症和凋亡的分子机制，阐明了甘草酸对 DON  诱导的细胞炎症和凋亡的修复机制，在此基础上本发明提出了一种甘草酸和益生菌配 伍的饲料添加剂，从而为缓解DON对动物的毒性、改善畜禽健康状况奠定基础。 为了实现上述技术目的，本发明采用以下技术方案： 甘草酸在制备缓解DON危害的药物或饲料添加剂中的应用。 优选的，甘草酸通过调节基因IL-6、IL-8、TNF-α、COX-2、NF-Kb、Bax、Caspase  3或 Bcl-2 的相对表达量缓解DON导致的细胞炎症或细胞早衰。 优选的，甘草酸通过调节乳酸脱氢酶、丙二醛、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的含 3 CN 111568912 A 说　明　书 2/10 页 量缓解DON导致的细胞氧化应激反应。 进一步优选的，所述细胞为猪肠道细胞。 优选的，所述甘草酸的添加量为50～800μg/mL。 基于一个总的发明构思，本发明还包括一种缓解DON危害的饲料添加剂，所述饲料 添加剂由甘草酸、酵母菌和肠球菌组成。 优选的，所述饲料添加剂的添加量为甘草酸200～400mg/kg饲料、酵母菌0.5×109 ～5×  109CFU/kg饲料、肠球菌0.5×109～5×109CFU/kg饲料。 进一步优选的，所述饲料添加剂的添加量为甘草酸400mg/kg饲料、酵母菌1× 109CFU/kg  饲料、肠球菌1×109CFU/kg饲料。 优选的，所述酵母菌为产朊假丝酵母；所述肠球菌为粪肠球菌。 基于一个总的发明构思，本发明还包括所述饲料添加剂在缓解DON导致的仔猪生 长性能下降上的应用。 本发明研究结果表明，0.5μg/mL  DON刺激6h即可引起细胞氧化应激、炎症或凋亡； 与DON处理组相比，在加入DON的同时加入200～400μg/mL  GA，可以显著提高细胞活力以及 超氧化物岐化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力，降低乳酸脱氢酶(LDH)释放、丙二醛  (MDA) 含量以及细胞凋亡率。GA还可以显著下调IL-6、IL-8、TNF-α、COX-2、NF-Kb、Bax  和Caspase  3等炎性基因的相对表达量，显著上调抗炎基因Bcl-2的相对表达量，通过激活肿瘤坏死因 子(TNF)信号通路、固有免疫病原模式受体(Toll-like)信号通路和核转录因子(NF-κB)  信 号通路，抑制炎症因子和趋化因子的产生，缓解DON诱导的氧化应激、炎症反应、细胞毒性和 凋亡，保护肠道的完整性和动物健康。 本发明研究结果还表明，在断奶仔猪的饲粮中添加甘草酸400g/吨饲粮、产朊假丝 酵母为1×1012CFU/吨饲粮、粪肠球菌为1×1012CFU/吨饲粮，可有效缓解DON对仔猪生长的 危害。本发明为甘草酸与益生菌配伍作为缓解DON毒性的饲料添加剂、改善畜禽健康状况奠 定了基础。 附图说明 图1：  GA和DON对IPEC-J2细胞活力的影响；A，不同GA浓度在不同作用时间下对 IPEC-J2  细胞活力的影响；B，不同浓度GA和0.5μg/mL  DON共培养6h对细胞活力的影响； 图2  ：GA对DON处理后IPEC-J2细胞中乳酸脱氢酶释放量及抗氧化参数的影响；A， 乳酸脱氢酶(LDH)释放量；B，丙二醛(MDA)含量；C，超氧化物歧化酶(SOD)活力值；D，过氧化 氢酶(CAT)活力值； 图3：  GA对DON引起的IPEC-J2细胞凋亡的影响；A，利用流式细胞术检测Annexin  V/FITC/PI  染色的凋亡细胞，其中Q1、Q2、Q3、Q4分别代表晚期凋亡细胞率、坏死细胞率、活 细胞率和早期凋亡细胞率；B，细胞总凋亡率的定量分析；C，Q1、Q2、Q3、Q4在不同条件下的变 化情况； 图4  ：GA对DON处理后IPEC-J2细胞相关基因表达量的影响；A，GA对细胞凋亡相关 基因  (Bax、Bcl-2和Caspase3)的影响；B，GA对细胞炎症相关基因(IL-6、IL-8、TNF-α、  COX- 2和NF-κB)的影响； 图5：样本的差异表达基因分析结果；A，PCA主成分分析；B，两个处理组之间的差异 4 CN 111568912 A 说　明　书 3/10 页 表达基因数；C，样本间差异表达基因的聚类热图分析；D，Venn分析图。