技术摘要：
本发明公开了一种低Vero细胞残留DNA狂犬病疫苗原液的制备方法，具体制备步骤包括：细胞复苏；细胞传代；生物反应器培养；接种病毒；病毒收获；Mustang Q XT140膜层析处理；超滤浓缩及灭活；Sepharose 4FF凝胶层析。其中，用Sepharose 4FF凝胶层析为：按柱床体积5～10％ 全部
背景技术：
狂犬病疫苗的发展情况，经历了三类制备方法，分别为：神经组织疫苗、原代细胞 疫苗、人二倍体细胞疫苗(human diploid cell vaccine，HDCV)和传代细胞培养疫苗(cell culture rabies vaccines，CCV)。神经组织疫苗因其副反应严重，已经停止使用；原代细胞 疫苗生产过程中易引入外源污染；人二倍体细胞疫苗产率低成本高，限制了其应用；WHO在 上世纪八十年代向发展中国家推荐了用Vero细胞制备狂犬病疫苗的方法。目前，我国市场 上有原代细胞、Vero细胞、人二倍体细胞三种狂犬病疫苗存在，主流产品是Vero细胞狂犬病 疫苗。在Vero细胞狂犬病疫苗生产工艺中，需要对Vero细胞残余DNA进行残余量的控制，以 控制最终产品在致瘤方面的潜在风险。以Vero细胞工艺制备狂犬病疫苗，残余DNA的去除方 法非常重要。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种低Vero细胞残留DNA狂犬病疫苗原液的制备方法，以 解决现有技术Vero细胞狂犬病疫苗制备工艺中，残余Vero细胞DNA的去除问题。 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案： 一种低Vero细胞残留DNA狂犬病疫苗原液的制备方法，具体制备步骤包括：用玻璃 纤维滤芯进行过滤；所述玻璃纤维滤芯孔径为0.6～1.0μm。 与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明在病毒收获后，对病毒液进行玻璃 纤维过滤，并通过限定玻璃纤维的特定孔径，使破碎的细胞碎片得到有效截流过滤；同时， 之所以要采用玻璃纤维作为滤芯材料，是因为玻璃纤维化学本质为二氧化硅，二氧化硅表 面硅烷醇基团与细胞破碎产生的生物质表面基团可形成大量氢键，虽然两者之间形成的氢 键作用力较弱，但是数量巨大，可以使细胞破裂产生的DNA等生物质杂质在短时间内牢牢的 吸附在二氧化硅表面，实现对收获液进行过滤纯化。
本发明公开了一种低Vero细胞残留DNA狂犬病疫苗原液的制备方法，具体制备步骤包括：细胞复苏；细胞传代；生物反应器培养；接种病毒；病毒收获；Mustang Q XT140膜层析处理；超滤浓缩及灭活；Sepharose 4FF凝胶层析。其中，用Sepharose 4FF凝胶层析为：按柱床体积5～10％ 全部
背景技术：
狂犬病疫苗的发展情况，经历了三类制备方法，分别为：神经组织疫苗、原代细胞 疫苗、人二倍体细胞疫苗(human diploid cell vaccine，HDCV)和传代细胞培养疫苗(cell culture rabies vaccines，CCV)。神经组织疫苗因其副反应严重，已经停止使用；原代细胞 疫苗生产过程中易引入外源污染；人二倍体细胞疫苗产率低成本高，限制了其应用；WHO在 上世纪八十年代向发展中国家推荐了用Vero细胞制备狂犬病疫苗的方法。目前，我国市场 上有原代细胞、Vero细胞、人二倍体细胞三种狂犬病疫苗存在，主流产品是Vero细胞狂犬病 疫苗。在Vero细胞狂犬病疫苗生产工艺中，需要对Vero细胞残余DNA进行残余量的控制，以 控制最终产品在致瘤方面的潜在风险。以Vero细胞工艺制备狂犬病疫苗，残余DNA的去除方 法非常重要。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种低Vero细胞残留DNA狂犬病疫苗原液的制备方法，以 解决现有技术Vero细胞狂犬病疫苗制备工艺中，残余Vero细胞DNA的去除问题。 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案： 一种低Vero细胞残留DNA狂犬病疫苗原液的制备方法，具体制备步骤包括：用玻璃 纤维滤芯进行过滤；所述玻璃纤维滤芯孔径为0.6～1.0μm。 与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明在病毒收获后，对病毒液进行玻璃 纤维过滤，并通过限定玻璃纤维的特定孔径，使破碎的细胞碎片得到有效截流过滤；同时， 之所以要采用玻璃纤维作为滤芯材料，是因为玻璃纤维化学本质为二氧化硅，二氧化硅表 面硅烷醇基团与细胞破碎产生的生物质表面基团可形成大量氢键，虽然两者之间形成的氢 键作用力较弱，但是数量巨大，可以使细胞破裂产生的DNA等生物质杂质在短时间内牢牢的 吸附在二氧化硅表面，实现对收获液进行过滤纯化。
