技术摘要：
本发明公开了一种罗氏沼虾线粒体12S rRNA基因扩增引物，该引物序列为：上游引物序列为SEQ ID NO.1，即12SF：5'‑CAGCGTAAGTGGAGTGCTTAG‑3'；下游引物序列为SEQ ID NO.2，即12SR：5'‑CTTGCTTGTTCCTCTGTTTCAGG‑3'。本发明的一种罗氏沼虾线粒体12S rRNA基因扩增引物可  全部
背景技术：
罗氏沼虾(Macrobrachium  rosenbergii)  隶属于甲壳纲(Crustacea)、十足目 (Decapoda)、长臂虾科(Palaemonidae)、沼虾属(Macrobrachium)，原产于东南亚的热带和 亚热带地区，是淡水虾类养殖中个体最大的品种，在东南亚一些天然水域里，发现其最大个 体中，雄虾体长可达40cm、体重654g，雌虾体长25cm、体重200g。中国大陆自1976年引进该 虾，经过广大科研工作者及产业推广者的努力，中国已成为全球罗氏沼虾养殖最多的国家， 养殖产量占世界总产量的60%左右。但由于长期近亲繁殖、高密度养殖等，引起种质衰退、抗 逆能力差、性早熟等，严重影响了虾农的增产增收。因此，进一步培育满足产业与市场需求 的经济性状优良的罗氏沼虾新品种或新品系迫在眉睫。遗传多样性是物种进化的基础，与 进化潜力和适应力呈正相关，遗传多样性越高的群体，其生产性状如活力、生长速度、产卵 量、环境适应力及抗病性能等提高的潜力越大。因此，遗传多样性水平不仅制约着生物的适 应性进化，也是选择育种的前提。 线粒体DNA  (mitochondrial  DNA,  mtDNA)是一种核外的遗传物质，与核DNA相比， mtDNA具有分子量小、结构简单、进化速度快、母系遗传等特点。另外，mtDNA基因排列紧凑， 几乎没有间隔序列和内含子，易采用通用引物进行PCR扩增获得目的基因片段。因此，线粒 体基因被认为是研究动物进化、群体遗传多样性和遗传结构的有力工具。目前，能查询到的 关于罗氏沼虾线粒体12S  rRNA基因的报道较少，美国国立生物技术信息中心（NCBI， http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）GenBank中仅有2条序列，且片段长度仅350bp～450bp左 右，提供的数据量有限。
技术实现要素：
为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种罗氏沼虾线粒体12S  rRNA基因扩增引物。 为解决上述问题，本发明采用如下技术方案： 一种罗氏沼虾线粒体COI基因扩增引物，该引物序列为： 上游引物序列为SEQ  ID  NO.1，即12SF： 5'-CAGCGTAAGTGGAGTGCTTAG-3'； 下游引物序列为SEQ  ID  NO.2，即12SR： 5'-CTTGCTTGTTCCTCTGTTTCAGG-3'。 本发明还提供一种如权利要求1所述的罗氏沼虾线粒体12S  rRNA基因扩增引物的 设计方法，包括以下步骤： 登陆美国国立生物技术信息中心下载已有的罗氏沼虾线粒体基因组全序列； 3 CN 111575344 A 说　明　书 2/3 页 将下载的罗氏沼虾线粒体基因组序列用ClustalX软件进行比对，并定位12S  rRNA基因 的位置，确定其两端保守区域； 在确定的保守区域用引物设计软件primer6进行上下游引物的设计。 本发明还提供一种对罗氏沼虾线粒体12S  rRNA基因进行扩增的方法，采用上述的 罗氏沼虾线粒体12S  rRNA基因扩增引物对罗氏沼虾的DNA模板溶液进行PCR扩增。 优选地，PCR扩增条件为：94-95℃预变性3-5min；然后再94-95℃变性30s、64.5- 66.5℃退火30s、72℃延伸30-45s，重复35次循环；最后72℃延伸8-10min。 优选地，PCR扩增体系包括：灭菌超纯水、10×buffer、dNTP、MgC12、上游引物、下游 引物、Taq酶和DNA  模板。 更优选地，PCR扩增体系为50μL，包括：灭菌超纯水  31μL，10×buffer  5μL， 2.5mmol/L的dNTP  4μL，25mmol/L的MgC12  3μL，10μmol/L的上、下游引物各为  1μL，5U/μL的 Taq酶0.2μL，100ng/μL的DNA  模板溶液5μL。 更优选地，所述DNA  模板溶液采用高盐法提取，并用灭菌超纯水稀释至100ng/μL。 优选地，PCR扩增后，罗氏沼虾线粒体12S  rRNA基因的片段长度为750bp  ~850bp。 与现有技术相比，本发明的技术效果体现在： 本发明的一种罗氏沼虾线粒体12S  rRNA基因扩增引物可使获得的罗氏沼虾线粒体12S  rRNA基因片段长度增加至800bp左右，且该引物具有条带单一、扩增效率高的特点，能够更 好地满足后续罗氏沼虾线粒体基因组研究以及罗氏沼虾群体遗传多样性研究的需要。 附图说明 图1为本发明实施例PCR扩增获得罗氏沼虾线粒体12S  rRNA基因片段的电泳图； 图2为本发明实施例PCR扩增获得罗氏沼虾线粒体12S  rRNA基因片段测序后获得的部 分代表性序列。 图1中，S1-S22代表22个罗氏沼虾样本，“空白”是阴性对照，Marker为分子量标准； 图2中，Hap_1至Hap_8代表8个不同的序列，序列间相同碱基采用小圆点表示，每段序列末尾 方括号中的数字代表那一行结尾时序列中含总碱基的个数，图2示出的序列长度是798bp。