技术摘要：
本公开提供用于增强针对癌症和病原体的免疫应答的方法和组合物。本发明涉及包含抗原识别受体(例如，嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR))并表达水平升高的IL‑33的免疫应答细胞。在某些实施方式中，工程改造的免疫应答细胞是抗原导向的，并具有增强的免疫激活特性。
背景技术：
尽管目前有可用的疗法，大多数成人B细胞恶性肿瘤，包括急性淋巴细胞白血病 (ALL)、慢性淋巴细胞性白血病和非霍奇金氏淋巴瘤仍无法治愈。基因改造的自体T细胞的 过继治疗已显示出对黑色素瘤和惰性B细胞恶性肿瘤的治疗功效的证据。通过引入编码对 这些抗原具有特异性的人工T细胞受体(称为嵌合抗原受体(CAR))的基因，可以修饰T细胞 以靶向肿瘤相关抗原。免疫疗法是一种靶向疗法，具有提供治疗癌症的潜力。 然而，恶性细胞会适应产生免疫抑制性微环境，以保护自身免受免疫识别和消除。 这种“敌对”的肿瘤微环境对涉及刺激免疫应答的治疗方法(例如靶向T细胞疗法)提出了挑 战。为了改善CAR或TCR工程改造的T细胞的抗肿瘤作用，已经进行了各种修饰。例如，Pegram 等人描述了组成型分泌白介素12(IL-12)的CAR工程改造的T细胞的小鼠模型，显示出对 CD19 肿瘤细胞的细胞毒性增加(Pegram等人,BLOOD,第119卷,第18期,2012)。然而，IL-12 的分泌导致白介素2(IL-2)的抑制，白介素2(IL-2)是一种重要的细胞因子，可促进T和B淋 巴细胞的增殖和抗肿瘤作用。Dotti等人公开了组成型分泌白介素15(IL-15)和基于自杀基 因的可诱导型半胱天冬酶9(iC9)的CAR工程改造的T细胞，其显示出对CD19 肿瘤细胞的细 胞毒性增加(US20130071414A1)。该修饰的CAR-T细胞在体内和体外均显示出不变的IL-2表 达水平。因此，迫切需要用于治疗肿瘤的新的治疗策略。
技术实现要素：
本公开的主题提供(a)表达针对目标靶抗原的抗原识别受体(例如，CAR或TCR)，和 (b)表达(并分泌)白介素33(“IL-33”)多肽的免疫应答细胞(例如，T细胞、肿瘤浸润淋巴细 胞、自然杀伤(NK)细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、自然杀伤T(NK-T)细胞或调节性T细胞)。 在某些非限制性实施方式中，免疫应答细胞包含以可表达形式编码IL-33多肽的核苷酸(例 如，编码IL-33多肽的核酸)。 本公开的主题还提供一种免疫应答细胞，其包含(a)针对目的靶抗原的抗原识别 受体(例如CAR或TCR)，和(b)在内源性(天然)IL-33基因座处的修饰的启动子，其中修饰的 启动子增强了内源性IL-33基因座的基因表达。在某些非限制性实施方式中，修饰包括用组 6 CN 111601817 A 说　明　书 2/51 页 成型启动子或诱导型启动子替换内源性启动子，或将组成型启动子或诱导型启动子插入内 源性IL-33基因座的启动子区域。在某些非限制性实施方式中，组成型启动子选自CMV启动 子、EF1a启动子、SV40启动子、PGK1启动子、Ubc启动子、β-肌动蛋白启动子和CAG启动子。在 某些非限制性实施方式中，诱导型启动子选自四环素应答元件(TRE)启动子和雌激素应答 元件(ERE)启动子。 在某些实施方式中，免疫应答细胞组成型表达IL-33多肽(IL-33蛋白的成熟或非 成熟形式)。在某些实施方式中，IL-33多肽是分泌的。抗原识别受体可以是TCR或CAR。在某 些实施方式中，抗原识别受体是CAR。在某些实施方式中，免疫应答细胞选自T细胞、天然杀 伤(NK)细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、调节性T细胞、天然杀伤T(NK-T)细胞、人胚胎干细 胞和可以分化淋巴样细胞的多能干细胞。在某些实施方式中，免疫应答细胞是自体的。 此外，本公开的主题提供使用这样的免疫应答细胞来诱导和/或增强免疫应答， 和/或用于治疗和/或预防肿瘤(例如，癌症)、感染性疾病和其它会受益于增强的免疫应答 的疾病/病症的方法。 在某些非限制性实施方式中，本公开的主题提供一种分离的免疫应答细胞，(a)包 含与抗原结合的抗原识别受体，和(b)表达或分泌IL-33多肽。在某些实施方式中，免疫应答 细胞包含外源性IL-33多肽。在某些实施方式中，免疫应答细胞包含编码IL-33多肽的核酸。 在某些实施方式中，抗原识别受体与抗原的结合能够激活免疫应答细胞。在某些实施方式 中，抗原识别受体是CAR。 本公开的主题还提供一种药物组合物，其包含有效量的本文公开的免疫应答细胞 和药学上可接受的赋形剂。在某些实施方式中，药物组合物是用于治疗和/或预防肿瘤(例 如，癌症)的药物组合物，其中抗原识别受体结合的抗原是肿瘤抗原。 本公开的主题提供本文公开的免疫应答细胞或本文公开的组合物，其用于治疗， 例如用于减轻肿瘤负荷、治疗和/或预防肿瘤、延长患有肿瘤的受试者的存活和/或响应受 试者中的肿瘤抗原或病原体抗原而增加免疫激活细胞因子的产生。 本公开的主题还提供一种治疗和/或预防受试者中肿瘤的方法。在某些实施方式 中，该方法包括向受试者施用有效量的本文公开的免疫应答细胞或药物组合物。本公开的 主题还提供减轻受试者的肿瘤负荷的方法。在某些实施方式中，该方法包括向受试者施用 有效量的本文公开的免疫应答细胞或药物组合物。本公开的主题进一步提供延长患有肿瘤 (例如，癌症)的受试者的存活的方法。在某些实施方式中，该方法包括向受试者施用有效量 的本文公开的免疫应答细胞或药物组合物。 本公开的主题还提供一种增强或提高受试者中对靶抗原的免疫应答的方法。在某 些实施方式中，该方法包括向受试者施用有效量的本文公开的免疫应答细胞或药物组合 物。该细胞可以表达和分泌IL-33多肽，从而增强受试者对靶抗原的免疫应答。 本公开的主题还提供一种响应于受试者中的癌症或病原体而增加免疫激活细胞 因子产生的方法。在某些实施方式中，该方法包括向受试者施用有效量的本文公开的免疫 应答细胞或药物组合物。在某些非限制性实施方式中，免疫激活细胞因子选自IL-2、GM-SCF 和IFN-γ。在某些非限制性实施方式中，免疫激活细胞因子选自IL-5、IL-9和IL-13。本公开 的主题还提供在有此需要的受试者中治疗血液癌症的方法。在某些实施方式中，该方法包 括向受试者施用治疗有效量的本文公开的免疫应答细胞或药物组合物。在某些实施方式 7 CN 111601817 A 说　明　书 3/51 页 中，细胞是T细胞。在某些实施方式中，与抗原识别受体结合的抗原是CD19。 本公开的主题还提供一种用于产生本文公开的免疫应答细胞的方法。在某些实施 方式中，该方法包括将(a)编码与抗原结合的抗原识别受体的第一核酸序列和(b)编码IL- 33多肽的第二核酸序列引入免疫应答细胞。 本公开的主题还提供一种核酸组合物，其包含(a)编码与抗原结合的抗原识别受 体(例如，CAR或TCR)的第一核酸序列，和(b)编码IL-33多肽(IL-33的成熟形式或非成熟形 式)的第二核酸序列。 在某些非限制性实施方式中，第一或第二核酸序列可操作地连接至在免疫应答细 胞中组成型或诱导型表达的启动子元件。第一核酸序列的启动子可以与第二核酸序列的启 动子相同或不同。在某些非限制性实施方式中，第一和第二核酸序列的每一个可操作地连 接至在免疫应答细胞中组成型或诱导型表达的启动子元件。第一和第二核酸序列之一或两 者可以包含在载体中，所述载体可以是相同的载体(双顺反子)或分开的载体。在某些非限 制性实施方式中，载体是病毒载体，例如逆转录病毒载体。 在某些实施方式中，核酸组合物包含在载体中。在某些非限制性实施方式中，载体 是病毒载体，例如逆转录病毒载体。本公开的主题还提供包含本文公开的核酸组合物的载 体。 本公开的主题提供一种试剂盒，其用于诱导和/或增强免疫应答和/或治疗和/或 预防肿瘤(例如，癌症)或病原体感染。在某些实施方式中，试剂盒包含本文公开的免疫应答 细胞、本文公开的药物组合物、本文公开的核酸组合物或本文公开的载体。在某些实施方式 中，试剂盒还包含用于诱导和/或增强免疫应答和/或治疗和/或预防肿瘤或病原体感染的 书面说明书。 在各种非限制性实施方式中，免疫应答细胞与其预期的受体受试者是自体的。 在本文描述的任何方面的各个实施方式中，抗原识别受体是TCR或CAR。在本文描 述的任何方面的各种实施方式中，抗原识别受体是外源的或内源的。在本文描述的任何方 面的各个实施方式中，抗原识别受体是重组表达的。在本文描述的任何方面的各个实施方 式中，抗原识别受体是从载体表达的。在本文所描述的任何方面的各个实施方式中，抗原识 别受体是CAR。在某些实施方式中，CAR包含细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信 号传导结构域。在某些实施方式中，其中CAR不包含共刺激信号传导结构域。在某些实施方 式中，CAR为19z。 在本文描述的任何方面的各个实施方式中，抗原识别受体是TCR。在某些实施方式 中，TCR是重组TCR。在某些实施方式中，TCR是非天然存在的TCR。在某些实施方式中，TCR与 任何天然存在的TCR的区别在于至少一个氨基酸残基。在某些实施方式中，TCR由天然存在 的TCR通过至少一个氨基酸残基修饰。 在本文描述的任何方面的各个实施方式中，抗原识别受体结合的抗原是肿瘤抗原 或病原体抗原。在某些实施方式中，抗原是肿瘤抗原。在本文描述的任何方面的各个实施方 式中，肿瘤抗原选自CD19、MUC16、MUC1、CA1X、CEA、CD8、CD7、CD10、CD20、CD22、CD30、CD33、 CLL1、CD34、CD38、CD41、CD44、CD49f、CD56、CD74、CD133、CD138、感染巨细胞病毒(CMV)的细 胞抗原、EGP-2、EGP-40、EpCAM、erb-B2,3,4、FBP、胎儿乙酰胆碱受体、叶酸受体-α、GD2、GD3、 HER-2、hTERT、IL-13R-a2、κ-轻链、KDR、LeY、L1细胞粘附分子、MAGE-A1、间皮素、ERBB2、 8 CN 111601817 A 说　明　书 4/51 页 MAGEA3、p53、MART1、GP100、蛋白酶3(PR1)、酪氨酸酶、存活蛋白(survivin)、hTERT、EphA2、 NKG2D配体、NY-ES0-1、癌胎抗原(h5T4)、PSCA、PSMA、ROR1、TAG-72、VEGF-R2、WT-1、BCMA、 CD123、CD44V6、NKCS1、EGF1R、EGFR-VIII、CD99、CD70、ADGRE2、CCR1、LILRB2、PRAME和ERBB。 在某些实施方式中，抗原是CD19。与所述抗原特异性结合的氨基酸序列是本领域已知的，或 者可以使用本领域已知的方法来制备；实例包括免疫球蛋白、免疫球蛋白的可变区(例如可 变片段(“Fv”)或二价可变片段(“Fab”))、单链抗体等。在某些实施方式中，抗原是病原体抗 原。 在本文所描述的任何方面的各种非限制性实施方式中，外源性IL-33多肽是分泌 的。在本文描述的任何方面的各种非限制性实施方式中，IL-33多肽包含在载体中(并表 达)。在本文描述的任何方面的各种非限制性实施方式中，IL-33多肽在氨基末端包含异源 信号序列(例如，与IL-33天然不相关的信号序列)。在本文所述的任何方面的各种实施方式 中，异源信号序列选自IL-2信号序列、κ前导序列、CD8前导序列，及其组合和/或合成变体， 其保留促进IL-33多肽(成熟或非成熟)分泌的能力。在某些实施方式中，IL-33肽是IL-33蛋 白的成熟形式或其功能片段。在某些实施方式中，IL-33肽包含与SEQ  ID  NO：4或SEQ  ID  NO：21所示的序列至少约80％同源的氨基酸序列。在某些实施方式中，其中IL-33肽包含SEQ  ID  NO：4或SEQ  ID  NO：21所示的氨基酸序列。在本文描述的任何方面的各个实施方式中， IL-33多肽增强免疫应答细胞的免疫应答。在某些实施方式中，外源性IL-33多肽增加抗肿 瘤细胞因子的产生。在某些实施方式中，抗肿瘤细胞因子选自IL-2、GM-CSF和IFN-γ。 在本文所述的任何方面的非限制性实施方式中，与仅表达抗原识别受体(例如，不 包含外源性IL-33多肽)的免疫应答细胞相比，该免疫应答细胞诱导B细胞发育不全延长。在 本文描述的任何方面的各种非限制性实施方式中，免疫应答细胞激活内源性免疫细胞。在 某些实施方式中，内源性免疫细胞选自NK细胞、NK  T细胞、树突状细胞、巨噬细胞和内源性 CD8T细胞。在本文描述的任何方面的各种非限制性实施方式中，免疫应答细胞增加内源性 免疫细胞群体。 在本文描述的任何方面的各个实施方式中，所述方法减少肿瘤细胞的数量、减小 肿瘤的大小、根除受试者中的肿瘤、减轻受试者中的肿瘤负荷、根除受试者中的肿瘤负荷、 增加复发/再发生的时间周期、和/或增加生存期。 本公开的主题可用于的示例性肿瘤包括但不限于白血病(例如，急性白血病、急性 淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性粒细胞性白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性 粒单核细胞白血病、急性单核细胞性白血病、急性红白血病、慢性白血病、慢性髓细胞白血 病、慢性淋巴细胞白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤(霍奇金氏病、非霍奇金氏病)、 Waldenstrom’s巨球蛋白血症、重链疾病、以及实体瘤如肉瘤和癌(例如，纤维肉瘤、粘液肉 瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内膜 肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢 癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺瘤、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊 腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆小管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、Wilm’s 肿瘤、宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞 瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突胶质瘤、神 经鞘瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤和视网膜母细胞瘤)。 9 CN 111601817 A 说　明　书 5/51 页 在本文所述的任何方面的各种非限制性实施方式中，肿瘤是血液癌症、B细胞白血 病、多发性骨髓瘤、淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病、非霍奇金氏淋巴瘤和卵巢 癌中的一种或多种。在某些实施方式中，血液癌症是B细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性淋巴 细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病和非霍奇金氏淋巴瘤中的一种或多种。在某些实施 方式中，抗原是CD19。在某些实施方式中，肿瘤是卵巢癌，并且抗原是MUC16。 附图说明 可以结合附图来理解通过实例给出的以下详细描述，但并不旨在将本公开的主题 限于所描述的