技术摘要：
本发明提供一种TREM‑1在监测血吸虫病肝纤维化发展过程方面的应用，其特征在于，采用动物模型动态监测TREM‑1在血吸虫病肝脏中的表达方法。本发明还提供TREM‑1在制备监测血吸虫病药物方面的应用。所述药物为药物试剂盒，所述药物试剂盒用于监测TREM‑1的表达。本发明 全部
背景技术：
髓系细胞触发受体（triggering receptor expressed on myeloid cells , TREM）是一类隶属于免疫球蛋白超家族的细胞表面受体，主要包括TREM-1和TREM-2等，在炎 症和免疫调节中发挥重要作用。研究表明，TREM-1与巨噬细胞的M1型极化存在较大的相关 性，TREM-1的缺失能够促进 M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化。在曼氏血吸虫病模型中， 曼氏血吸虫感染早期脾脏巨噬细胞中 TREM-1表达上调，与 M1极化趋势相一致。然而，曼氏 血吸虫病纤维化模型肝脏组织中TREM-1的表达未见明显变化。日本血吸虫与曼氏血吸虫虽 然同属于裂体属，但其生物学特性及引起虫卵肉芽肿、肝纤维化的机制不尽完全相同。 TREM-1在血吸虫病肝纤维化进程中的表达及应用未见报道。
技术实现要素：
发明目的：针对现有技术中存在问题或不足，本发明提供TREM-1在监测血吸虫病 肝纤维化发展过程方面的应用。 为实现上述发明目的，本发明的实施例提供一种TREM-1在监测血吸虫病肝纤维化 发展过程方面的应用，其特征在于，采用动物模型动态监测TREM-1在血吸虫病肝脏中的表 达方法。 进一步的，一种TREM-1在监测血吸虫病肝纤维化发展过程方面的应用，其特征在 于，包括以下步骤： （1）、建立小鼠动物模型 （1-1）动物分组：选取30只的8周龄雌性C57BL/6小鼠，饲养于12h昼夜循环，且湿度为 55%的洁净空间内；随机选取6只小鼠作为健康对照组，其余分配为血吸虫病组； （1-2）动物模型制备 取血吸虫病组的小鼠，剃除小鼠腹部毛暴露出皮肤，固定于小鼠架，从感染性钉螺中溢 出日本血吸虫尾蚴，取血吸虫尾蚴挑取于盖玻片上，并紧贴小鼠腹部皮肤保持15min，使尾 蚴充分进入小鼠皮肤感染小鼠； （2）RNA抽提 （2-1）分别取步骤（1-2）所感染血吸虫后0周、3周、6周、9周、12周小鼠肝脏组织，按 50- 100mg组织中加入1ml Trizol 的比例加入 Trizol，置于匀浆器中，冰上研磨后转至EP管 内；随后按照0.2ml氯仿/ml Trizol 加入氯仿，轻轻混匀后室温放置10min； （2-2）4℃ 12000rpm 离心 15min； （2-3）小心吸取上层水相0.5ml，按照1:1体积比加入异丙醇，轻轻混匀后室温放置 10min； 4 CN 111549106 A 说 明 书 2/3 页 （2-4）4℃ 12000rpm 离心 20min，去除上清； （2-5）加入1ml预冷的75%乙醇，震荡混匀4℃ 12,000rpm 离心5min； （2-6）弃上清，静置干燥RNA，用DEPC水溶解沉淀； （3）RT-qPCR检测 将步骤（2）所获得的RNA用Thermo生产的REVERTAID 1ST CDNA SYNTH KIT 逆转录为 cDNA； 获得的cDNA用TAKARA生成的TB Green ™ Premix Ex Taq ™ II 试剂盒进行实时定量 PCR检测TREM-1的表达。 进一步的，所述步骤（3）中，定量PCR检测中，所用引物序列如下： mTREM-1 F: CTGCTGTGCGTGTTCTTTGTCTC； mTREM-1 R: AGGGTTCCTTCCCGTCTGGTA； mGAPDH F: TGGAAAGCTGTGGCGTGAT； mGAPDH R: TGCTTCACCACCTTCTTGAT。 本发明的实施例还提供TREM-1在制备监测血吸虫病药物方面的应用。 进一步的，所述药物为药物试剂盒，所述药物试剂盒用于监测TREM-1的表达。 进一步的，所述药物试剂盒包括EP管、氯仿、异丙醇、75%乙醇、定量PCR检测所用引 物mTREM-1 F、mTREM-1 R、mGAPDH F、mGAPDH R。 其中，定量PCR检测中所用引物的序列如下： mTREM-1 F: CTGCTGTGCGTGTTCTTTGTCTC； mTREM-1 R: AGGGTTCCTTCCCGTCTGGTA； mGAPDH F: TGGAAAGCTGTGGCGTGAT； mGAPDH R: TGCTTCACCACCTTCTTGAT。 本发明的上述技术方案的有益效果如下：本发明通过检测感染血吸虫的不同时间 时，检测TREM-1在血吸虫病肝脏中的表达，从而监测肝纤维化发展过程，为监测肝纤维化发 展过程，提供了新的监测靶点，从而提供一种新的药物试剂盒。本发明的实施例通过日本血 吸虫病小鼠肝脏中TREM-1的检测，结果表明，日本血吸虫病小鼠肝脏中TREM-1的表达上升， 感染日本血吸虫12周后，小鼠肝脏组织中TREM-1表达有所下降，但仍维持在较高水平。 附图说明 图1为本发明的实施例1中日本血吸虫病肝脏组织中0到12周TREM-1表达变化图。 图2为本发明的实施例1中TREM-1定量PCR溶解曲线图。 图3为本发明的实施例1中内参GAPDH定量PCR溶解曲线图。
