技术摘要：
本发明提供了一种长循环表阿霉素脂质体的制备及其产业化生产方法，其包括了空白脂质体、表阿霉素溶液、载药、产品的制备工艺，以及长循环表阿霉素脂质体的产业化生产方法。其采用的两亲线型聚合物作为长循环磷脂材料，能够减弱脂质体长期贮存的聚集，增加再分散性；并 全部
背景技术：
表柔比星是通过半合成途径合成的一种蒽环类抗肿瘤抗生素，属于抗生素类抗肿 瘤药。目前有两种上市剂型，分别为盐酸表柔比星注射液和盐酸表柔比星粉针。多柔比星与 表柔比星互为同分异构体，区别在于其为氨基糖苷的4’位上羟基差向异构的产物。表柔比 星用于乳腺癌、卵巢癌等多种实体瘤。与多柔比星相比，其具有的抗肿瘤活性相对较高，毒 副作用较低，特别是对心脏的毒副作用更低。 脂质体作为药物载体，具有一定的靶向性，尤以与抗肿瘤药物的结合既增强治疗 作用又可以降低药物毒性。普通脂质体由磷脂和胆固醇组成，但靶向性差，为提高脂质体的 稳定性、靶向性和细胞内导入能力，可以采用某些功能基团修饰脂质体表面，如聚乙二醇链 修饰的脂质体(长循环脂质体，STEALTH技术)。STEALTH技术是采用PEG的磷脂作为载体，延 长药物在血液循环时间，使脂质体可以有效的达到病变部位。如盐酸多柔比星脂质体注射 液，与普通粉针和注射液相比，脂质体药物普遍具有精确的靶向性和较强的缓释作用，使药 物效力明显增强，并解决了很多药物伴随毒性以及特殊部位给药难的问题。
技术实现要素：
为此，本发明提供了一种具有长循环的表阿霉素脂质体注射液的制备及其产业化 生产方法。具体原理为：表阿霉素脂质体注射液采用PEG-DSPE两亲线型聚合物作为长循环 磷脂材料，能够在脂质体表面成有序且密集的立体型的构象云，且由于形成的位阻层为立 体的，位阻层较厚，阻碍了单核吞噬细胞系统的吞噬。而且PEG-DSPE有很长的极性基团，增 强脂质体的溶剂化作用，有效阻止其表面的调理作用，降低单核吞噬细胞系统对脂质体的 亲和力。使脂质体在循环系统中稳定存在并使半衰期延长，增加肿瘤组织对它的摄取。 一种长循环表阿霉素脂质体的制备方法，所述具体制备方法为： S1、空白脂质体的制备：取处方量的磷脂与胆固醇充分分散于乙醇溶液中，随即与硫酸 铵溶液混合，恒温40～90℃搅拌10～80min；将混合溶液进行过膜挤压、高压均质、超滤洗脱 后，即得空白脂质体； S2、表阿霉素溶液的制备：将表阿霉素原料药与保护剂按处方量溶解于注射灭菌用水 中，即得表阿霉素溶液； S3、载药：将步骤S1中的空白脂质体和步骤S2中的表阿霉素溶液按处方量混合均匀，恒 温40-80℃载药20～120min，即得载药阿霉素脂质体； S4、产品：将步骤S3中的载药阿霉素脂质体通过稀释剂稀释，依次过滤、除菌、封装，即 得浓度为0.5～6mg/mL的表阿霉素脂质体注射液。 进一步的，所述步骤S1中的磷脂浓度为10～100mg/mL，胆固醇的浓度为0.5～ 4 CN 111588697 A 说 明 书 2/8 页 100mg/mL，硫酸铵浓度在5～200mg/mL。 进一步的，所述步骤S1中的磷脂为二肉蔻酸磷脂酰甘油、二月桂酸磷脂酰甘油、二 软脂酸磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二肉蔻酸磷脂酸、二月桂酸磷脂酸、二软脂酸磷 脂酸、二硬脂酸磷脂酸、二油酸磷脂酰丝氨酸、二亚油酸磷脂酰肌醇、二棕榈酸磷脂酰胆碱、 二月桂酸磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酸磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、单肉蔻酸磷脂酰甘 油、单月桂酸磷脂酰甘油、单软脂酸磷脂酰甘油、单硬脂酸磷脂酰甘油、单肉蔻酸磷脂酸、单 月桂酸磷脂酸、单软脂酸磷脂酸、单硬脂酸磷脂酸、单油酸磷脂酰丝氨酸、单亚油酸磷脂酰 肌醇、单棕榈酸磷脂酰胆碱、单月桂酸磷脂酰胆碱、单肉豆蔻酸磷脂酰胆碱、单硬脂酰磷脂 酰胆碱、长循环磷脂中的一种或多种。 进一步的，所述长循环磷脂为DSPE-PEG2000-NH2、DSPE-PEG2000-COOH、DSPE- PEG2000-NHS、DSPE-PEG2000-Mal、DSPE-MPEG2000(JXFL1100015)、DSPE-MPEG5000、DSPE- PEG1000-NHS、DSPE-PEG2000-NHS、DSPE-PEG3400-NHS、DSPE-PEG5000-NHS、DSPE-PEG1000- NHS、DSPE-PEG1000-Mal、DSPE-PEG2000-Mal、DSPE-PEG3400-Mal、DSPE-PEG5000-Mal、DSPE- PEG10000-Mal、DSPE-PEG1000-Biotin、DSPE-PEG2000-Biotin、DSPE-PEG3400-Biotin、 DSPE-PEG5000-Biotin、DSPE-PEG10000-Biotin、DSPE-PEG2000-OH、DSPE-PE3400-OH、DSPE- PEG5000-OH、DSPE-PEG2000-COOH、DSPE-PEG3400-COOH、DSPE-PEG5000-COOH、DSPE- PEG2000-NH2、DSPE-PEG3400-NH2、DSPE-PEG5000-NH2、DSPE-PEG2000-SH、DSPE-PEG3400- SH、DSPE-PEG5000-SH、DSPE-PEG2000-N3、DSPE-PEG3400-N3、DSPE-PEG5000-N3中的一种或 多种组合物。 进一步的，所述步骤S1中的空白脂质体、步骤S3中的阿霉素脂质体和步骤S4中的 表阿霉素脂质体均采用马尔文粒度测定仪测试平均粒度D，平均粒度D为50～400nm。 进一步的，所述步骤S1中超滤洗脱使用的超滤洗脱液包括浓度为1％～30％的糖 类，浓度为0.5％～3％氨基酸；所述糖类为海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化钠、乳糖、山 梨醇、右旋糖苷、甘油或甘氨酸中的一种或者多种组合物；所述氨基酸为丙氨酸、亮氨酸、异 亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、 天冬酰胺、谷酰胺、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸中的一种或多种组合物；所述洗脱倍数 为5～20倍。 进一步的，所述步骤S1中超滤洗脱使用的超滤洗脱液使用pH调节剂控制其pH为4 ～9；所述pH调节剂为盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸钠、磷酸二氢钠、磷 酸钾、磷酸氢钾及二氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠中的至少一种。 进一步的，所述步骤S3中的空白脂质体与表阿霉素溶液比例为(20～1):1。 本发明还提供了长循环表阿霉素脂质体注射液的产业化生产方法，具体方法如 下： A1、对生产过程中的挤压后空白脂质体、载药后表阿霉素脂质体、过滤除菌后表阿霉素 脂质体的中间体均进行粒径控制，采用光子相关光谱激光散射法测定粒径，控制所述中间 体粒径均50-400nm范围内； A2、对生产过程中的挤压后空白脂质体、超滤后空白脂质体、载药后表阿霉素脂质体、 过滤除菌后表阿霉素脂质体均进行磷脂含量控制； A3、对生产过程中的挤压后空白脂质体、超滤后空白脂质体、过滤除菌后表阿霉素脂质 5 CN 111588697 A 说 明 书 3/8 页 体均进行硫酸铵含量控制； A4、对生产过程中的表阿霉素溶液、载药后表阿霉素脂质体、过滤除菌后表阿霉素脂质 体均进行表阿霉素含量控制； A5、对生产过程中的超滤后空白脂质体、过滤除菌后表阿霉素脂质体的中间体均进行 乙醇残留控制，控制所述中间体乙醇残留； A6、对生产过程中的表阿霉素溶液、超滤后空白脂质体、过滤除菌后表阿霉素脂质体的 中间体均进行有关物质含量控制，控制所述中间体有关物质含量； A7、所述产品表阿霉素脂质体注射液的产量为1～100L，控制产品包封率大于90％。 与现有技术相比，本发明的有益效果为： 1、本发明中的表阿霉素脂质体注射液具有长循环特性，能够减弱脂质体长期贮存的聚 集，增加再分散性；并且可以延长脂质体在体循环时间，提高半衰期，从而可使药物有充分 时间能够被肿瘤组织部位所充分分布；同时，还能减少被单核吞噬细胞系统摄取的速度和 程度，并降低对这个主要宿主防御系统的不良反应； 2、本发明采用两亲线型聚合物作为长循环磷脂材料，制备出的长循环表阿霉素脂质体 注射液，辅料用量少，工艺简单安全，产业化生产产量能达到100L，产品的包封率可达到 90％以上；同时，本发明产品方便储存、运输、使用。
本发明提供了一种长循环表阿霉素脂质体的制备及其产业化生产方法，其包括了空白脂质体、表阿霉素溶液、载药、产品的制备工艺，以及长循环表阿霉素脂质体的产业化生产方法。其采用的两亲线型聚合物作为长循环磷脂材料，能够减弱脂质体长期贮存的聚集，增加再分散性；并 全部
背景技术：
表柔比星是通过半合成途径合成的一种蒽环类抗肿瘤抗生素，属于抗生素类抗肿 瘤药。目前有两种上市剂型，分别为盐酸表柔比星注射液和盐酸表柔比星粉针。多柔比星与 表柔比星互为同分异构体，区别在于其为氨基糖苷的4’位上羟基差向异构的产物。表柔比 星用于乳腺癌、卵巢癌等多种实体瘤。与多柔比星相比，其具有的抗肿瘤活性相对较高，毒 副作用较低，特别是对心脏的毒副作用更低。 脂质体作为药物载体，具有一定的靶向性，尤以与抗肿瘤药物的结合既增强治疗 作用又可以降低药物毒性。普通脂质体由磷脂和胆固醇组成，但靶向性差，为提高脂质体的 稳定性、靶向性和细胞内导入能力，可以采用某些功能基团修饰脂质体表面，如聚乙二醇链 修饰的脂质体(长循环脂质体，STEALTH技术)。STEALTH技术是采用PEG的磷脂作为载体，延 长药物在血液循环时间，使脂质体可以有效的达到病变部位。如盐酸多柔比星脂质体注射 液，与普通粉针和注射液相比，脂质体药物普遍具有精确的靶向性和较强的缓释作用，使药 物效力明显增强，并解决了很多药物伴随毒性以及特殊部位给药难的问题。
技术实现要素：
为此，本发明提供了一种具有长循环的表阿霉素脂质体注射液的制备及其产业化 生产方法。具体原理为：表阿霉素脂质体注射液采用PEG-DSPE两亲线型聚合物作为长循环 磷脂材料，能够在脂质体表面成有序且密集的立体型的构象云，且由于形成的位阻层为立 体的，位阻层较厚，阻碍了单核吞噬细胞系统的吞噬。而且PEG-DSPE有很长的极性基团，增 强脂质体的溶剂化作用，有效阻止其表面的调理作用，降低单核吞噬细胞系统对脂质体的 亲和力。使脂质体在循环系统中稳定存在并使半衰期延长，增加肿瘤组织对它的摄取。 一种长循环表阿霉素脂质体的制备方法，所述具体制备方法为： S1、空白脂质体的制备：取处方量的磷脂与胆固醇充分分散于乙醇溶液中，随即与硫酸 铵溶液混合，恒温40～90℃搅拌10～80min；将混合溶液进行过膜挤压、高压均质、超滤洗脱 后，即得空白脂质体； S2、表阿霉素溶液的制备：将表阿霉素原料药与保护剂按处方量溶解于注射灭菌用水 中，即得表阿霉素溶液； S3、载药：将步骤S1中的空白脂质体和步骤S2中的表阿霉素溶液按处方量混合均匀，恒 温40-80℃载药20～120min，即得载药阿霉素脂质体； S4、产品：将步骤S3中的载药阿霉素脂质体通过稀释剂稀释，依次过滤、除菌、封装，即 得浓度为0.5～6mg/mL的表阿霉素脂质体注射液。 进一步的，所述步骤S1中的磷脂浓度为10～100mg/mL，胆固醇的浓度为0.5～ 4 CN 111588697 A 说 明 书 2/8 页 100mg/mL，硫酸铵浓度在5～200mg/mL。 进一步的，所述步骤S1中的磷脂为二肉蔻酸磷脂酰甘油、二月桂酸磷脂酰甘油、二 软脂酸磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二肉蔻酸磷脂酸、二月桂酸磷脂酸、二软脂酸磷 脂酸、二硬脂酸磷脂酸、二油酸磷脂酰丝氨酸、二亚油酸磷脂酰肌醇、二棕榈酸磷脂酰胆碱、 二月桂酸磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酸磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、单肉蔻酸磷脂酰甘 油、单月桂酸磷脂酰甘油、单软脂酸磷脂酰甘油、单硬脂酸磷脂酰甘油、单肉蔻酸磷脂酸、单 月桂酸磷脂酸、单软脂酸磷脂酸、单硬脂酸磷脂酸、单油酸磷脂酰丝氨酸、单亚油酸磷脂酰 肌醇、单棕榈酸磷脂酰胆碱、单月桂酸磷脂酰胆碱、单肉豆蔻酸磷脂酰胆碱、单硬脂酰磷脂 酰胆碱、长循环磷脂中的一种或多种。 进一步的，所述长循环磷脂为DSPE-PEG2000-NH2、DSPE-PEG2000-COOH、DSPE- PEG2000-NHS、DSPE-PEG2000-Mal、DSPE-MPEG2000(JXFL1100015)、DSPE-MPEG5000、DSPE- PEG1000-NHS、DSPE-PEG2000-NHS、DSPE-PEG3400-NHS、DSPE-PEG5000-NHS、DSPE-PEG1000- NHS、DSPE-PEG1000-Mal、DSPE-PEG2000-Mal、DSPE-PEG3400-Mal、DSPE-PEG5000-Mal、DSPE- PEG10000-Mal、DSPE-PEG1000-Biotin、DSPE-PEG2000-Biotin、DSPE-PEG3400-Biotin、 DSPE-PEG5000-Biotin、DSPE-PEG10000-Biotin、DSPE-PEG2000-OH、DSPE-PE3400-OH、DSPE- PEG5000-OH、DSPE-PEG2000-COOH、DSPE-PEG3400-COOH、DSPE-PEG5000-COOH、DSPE- PEG2000-NH2、DSPE-PEG3400-NH2、DSPE-PEG5000-NH2、DSPE-PEG2000-SH、DSPE-PEG3400- SH、DSPE-PEG5000-SH、DSPE-PEG2000-N3、DSPE-PEG3400-N3、DSPE-PEG5000-N3中的一种或 多种组合物。 进一步的，所述步骤S1中的空白脂质体、步骤S3中的阿霉素脂质体和步骤S4中的 表阿霉素脂质体均采用马尔文粒度测定仪测试平均粒度D，平均粒度D为50～400nm。 进一步的，所述步骤S1中超滤洗脱使用的超滤洗脱液包括浓度为1％～30％的糖 类，浓度为0.5％～3％氨基酸；所述糖类为海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化钠、乳糖、山 梨醇、右旋糖苷、甘油或甘氨酸中的一种或者多种组合物；所述氨基酸为丙氨酸、亮氨酸、异 亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、 天冬酰胺、谷酰胺、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸中的一种或多种组合物；所述洗脱倍数 为5～20倍。 进一步的，所述步骤S1中超滤洗脱使用的超滤洗脱液使用pH调节剂控制其pH为4 ～9；所述pH调节剂为盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸钠、磷酸二氢钠、磷 酸钾、磷酸氢钾及二氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠中的至少一种。 进一步的，所述步骤S3中的空白脂质体与表阿霉素溶液比例为(20～1):1。 本发明还提供了长循环表阿霉素脂质体注射液的产业化生产方法，具体方法如 下： A1、对生产过程中的挤压后空白脂质体、载药后表阿霉素脂质体、过滤除菌后表阿霉素 脂质体的中间体均进行粒径控制，采用光子相关光谱激光散射法测定粒径，控制所述中间 体粒径均50-400nm范围内； A2、对生产过程中的挤压后空白脂质体、超滤后空白脂质体、载药后表阿霉素脂质体、 过滤除菌后表阿霉素脂质体均进行磷脂含量控制； A3、对生产过程中的挤压后空白脂质体、超滤后空白脂质体、过滤除菌后表阿霉素脂质 5 CN 111588697 A 说 明 书 3/8 页 体均进行硫酸铵含量控制； A4、对生产过程中的表阿霉素溶液、载药后表阿霉素脂质体、过滤除菌后表阿霉素脂质 体均进行表阿霉素含量控制； A5、对生产过程中的超滤后空白脂质体、过滤除菌后表阿霉素脂质体的中间体均进行 乙醇残留控制，控制所述中间体乙醇残留； A6、对生产过程中的表阿霉素溶液、超滤后空白脂质体、过滤除菌后表阿霉素脂质体的 中间体均进行有关物质含量控制，控制所述中间体有关物质含量； A7、所述产品表阿霉素脂质体注射液的产量为1～100L，控制产品包封率大于90％。 与现有技术相比，本发明的有益效果为： 1、本发明中的表阿霉素脂质体注射液具有长循环特性，能够减弱脂质体长期贮存的聚 集，增加再分散性；并且可以延长脂质体在体循环时间，提高半衰期，从而可使药物有充分 时间能够被肿瘤组织部位所充分分布；同时，还能减少被单核吞噬细胞系统摄取的速度和 程度，并降低对这个主要宿主防御系统的不良反应； 2、本发明采用两亲线型聚合物作为长循环磷脂材料，制备出的长循环表阿霉素脂质体 注射液，辅料用量少，工艺简单安全，产业化生产产量能达到100L，产品的包封率可达到 90％以上；同时，本发明产品方便储存、运输、使用。
