技术摘要：
本发明公开了一种液相色谱‑串联质谱法测定血浆中替诺福韦艾拉酚胺浓度的方法，包括如下步骤：（1）对血浆样品进行前处理；（2）采用液相色谱‑串联质谱法测定经前处理后的血浆样品中替诺福韦艾拉酚胺的浓度；所述液相色谱‑串联质谱法包括色谱条件和质谱条件，其中： 全部
背景技术：
替诺福韦艾拉酚胺（TAF）是一种新型的核苷酸逆转录酶抑制剂，其结构式如下： 是替诺福韦的前提药物。该药是吉利德公司已上市药物Viread ®的改良版，目前已被 美国批准用于治疗成人未失代偿期慢性乙肝的治疗。 相对于Viread ® 而言，替诺福韦艾拉酚胺的优点十分显著，其只对靶细胞中的特 异性酶敏感，如外周血单核细胞中的组织蛋白酶A及肝细胞中的羧酯酶1，替诺福韦艾拉酚 胺的非靶向稳定性有助于降低全身暴露量并提高靶细胞中的装载量，临床给药剂量更小， 从而提高了药物的安全性和有效性，使其快速成为治疗病毒感染的新一代明星药物，但目 前有关其血浆检测和药动学的研究报道较少。
技术实现要素：
针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种液相色谱-串联质谱法测定血浆中 替诺福韦艾拉酚胺浓度的方法。采用本发明的方法可以实现对血浆中替诺福韦艾拉酚胺的 快速、灵敏检测；而且血浆用量少，样品前处理简单。 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种液相色谱-串联质谱法测定血浆中替诺福韦艾拉酚胺浓度的方法，包括如下步骤： （1）对血浆样品进行前处理； （2）采用液相色谱-串联质谱法测定步骤（1）中经前处理后的血浆样品中替诺福韦艾拉 酚胺的浓度； 所述液相色谱-串联质谱法包括色谱条件和质谱条件，其中： 所述色谱条件包括：以含0.1%（体积百分比）甲酸的2mM醋酸铵水溶液为流动相A，以体 积比为1:1的乙腈-甲醇为流动相B；梯度洗脱，洗脱程序为：0-0 .3min，10%B相，0.3-1 .5 3 CN 111595967 A 说 明 书 2/4 页 min，10%-95%B相，1.5-4.0min，95% B相，4.0-4.6min，95%-10%B相，4.6-5.5min，10% B相；洗 脱时间为5.5min； 所述质谱条件包括：离子源：电喷雾电离正离子检测；喷雾气温度：550℃；雾化气：60 psi；加热辅助气：60 psi；气帘气：30 psi；碰撞气：8 psi；喷雾电压（IS）：5500 V；扫描时 间：100 ms；扫描方式：多反应监测（MRM）。用于定量的离子反应分别为：m/z 477.2 ® 346.1 （替诺福韦艾拉酚胺）和m/z 482.3 ® 351.2（替诺福韦艾拉酚胺-d5）；碰撞能量60 eV。 优选的，步骤（1）中，对血浆样品进行前处理的方法为：向100 µL血浆样品中加入 50 µL内标溶液，再加入300 µL乙腈，涡流振荡5min，4℃条件下以3900 rpm速度离心10 min，取上清液100 µL加入300 µL去离子水，混匀后，取20.0 µL进行LC-MS/MS分析。 更优选的，所述内标溶液为50 ng/mL的替诺福韦艾拉酚胺-d5溶液。 优选的，步骤（2）中，所述色谱条件还包括：分析柱为Eclipse Plus C18色谱柱，流 速：0.65mL/min；进样量：20.0 µL。 本发明的有益效果： （1）本发明针对替诺福韦艾拉酚胺的性质，建立了液相色谱-串联质谱法测定人血浆中 替诺福韦艾拉酚胺浓度的方法。血浆样品以沉淀蛋白法进行处理后可直接进样分析，样品 前处理简单。替诺福韦艾拉酚胺在液相色谱上保留显著，从而避免的内源性物质干扰。 （2）本发明对色谱条件进行了优化，增强了替诺福韦艾拉酚胺的色谱保留。 （3）经本发明优化后的色谱条件具有优异的分离能力，在质谱检测时可有效减少 样品基质的干扰，以及对待测组分离子化的抑制作用，有效提高了替诺福韦艾拉酚胺检测 的灵敏度。 附图说明 图1、图2：空白样品色谱图（左：替诺福韦艾拉酚胺；右：替诺福韦艾拉酚胺-d5）。 图3、图4：LLOQ样品色谱图（左：替诺福韦艾拉酚胺；右：替诺福韦艾拉酚胺-d5）。 图5：受试者空腹口服25 mg 替诺福韦艾拉酚胺片后的血浆浓度-时间曲线。
本发明公开了一种液相色谱‑串联质谱法测定血浆中替诺福韦艾拉酚胺浓度的方法，包括如下步骤：（1）对血浆样品进行前处理；（2）采用液相色谱‑串联质谱法测定经前处理后的血浆样品中替诺福韦艾拉酚胺的浓度；所述液相色谱‑串联质谱法包括色谱条件和质谱条件，其中： 全部
背景技术：
替诺福韦艾拉酚胺（TAF）是一种新型的核苷酸逆转录酶抑制剂，其结构式如下： 是替诺福韦的前提药物。该药是吉利德公司已上市药物Viread ®的改良版，目前已被 美国批准用于治疗成人未失代偿期慢性乙肝的治疗。 相对于Viread ® 而言，替诺福韦艾拉酚胺的优点十分显著，其只对靶细胞中的特 异性酶敏感，如外周血单核细胞中的组织蛋白酶A及肝细胞中的羧酯酶1，替诺福韦艾拉酚 胺的非靶向稳定性有助于降低全身暴露量并提高靶细胞中的装载量，临床给药剂量更小， 从而提高了药物的安全性和有效性，使其快速成为治疗病毒感染的新一代明星药物，但目 前有关其血浆检测和药动学的研究报道较少。
技术实现要素：
针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种液相色谱-串联质谱法测定血浆中 替诺福韦艾拉酚胺浓度的方法。采用本发明的方法可以实现对血浆中替诺福韦艾拉酚胺的 快速、灵敏检测；而且血浆用量少，样品前处理简单。 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种液相色谱-串联质谱法测定血浆中替诺福韦艾拉酚胺浓度的方法，包括如下步骤： （1）对血浆样品进行前处理； （2）采用液相色谱-串联质谱法测定步骤（1）中经前处理后的血浆样品中替诺福韦艾拉 酚胺的浓度； 所述液相色谱-串联质谱法包括色谱条件和质谱条件，其中： 所述色谱条件包括：以含0.1%（体积百分比）甲酸的2mM醋酸铵水溶液为流动相A，以体 积比为1:1的乙腈-甲醇为流动相B；梯度洗脱，洗脱程序为：0-0 .3min，10%B相，0.3-1 .5 3 CN 111595967 A 说 明 书 2/4 页 min，10%-95%B相，1.5-4.0min，95% B相，4.0-4.6min，95%-10%B相，4.6-5.5min，10% B相；洗 脱时间为5.5min； 所述质谱条件包括：离子源：电喷雾电离正离子检测；喷雾气温度：550℃；雾化气：60 psi；加热辅助气：60 psi；气帘气：30 psi；碰撞气：8 psi；喷雾电压（IS）：5500 V；扫描时 间：100 ms；扫描方式：多反应监测（MRM）。用于定量的离子反应分别为：m/z 477.2 ® 346.1 （替诺福韦艾拉酚胺）和m/z 482.3 ® 351.2（替诺福韦艾拉酚胺-d5）；碰撞能量60 eV。 优选的，步骤（1）中，对血浆样品进行前处理的方法为：向100 µL血浆样品中加入 50 µL内标溶液，再加入300 µL乙腈，涡流振荡5min，4℃条件下以3900 rpm速度离心10 min，取上清液100 µL加入300 µL去离子水，混匀后，取20.0 µL进行LC-MS/MS分析。 更优选的，所述内标溶液为50 ng/mL的替诺福韦艾拉酚胺-d5溶液。 优选的，步骤（2）中，所述色谱条件还包括：分析柱为Eclipse Plus C18色谱柱，流 速：0.65mL/min；进样量：20.0 µL。 本发明的有益效果： （1）本发明针对替诺福韦艾拉酚胺的性质，建立了液相色谱-串联质谱法测定人血浆中 替诺福韦艾拉酚胺浓度的方法。血浆样品以沉淀蛋白法进行处理后可直接进样分析，样品 前处理简单。替诺福韦艾拉酚胺在液相色谱上保留显著，从而避免的内源性物质干扰。 （2）本发明对色谱条件进行了优化，增强了替诺福韦艾拉酚胺的色谱保留。 （3）经本发明优化后的色谱条件具有优异的分离能力，在质谱检测时可有效减少 样品基质的干扰，以及对待测组分离子化的抑制作用，有效提高了替诺福韦艾拉酚胺检测 的灵敏度。 附图说明 图1、图2：空白样品色谱图（左：替诺福韦艾拉酚胺；右：替诺福韦艾拉酚胺-d5）。 图3、图4：LLOQ样品色谱图（左：替诺福韦艾拉酚胺；右：替诺福韦艾拉酚胺-d5）。 图5：受试者空腹口服25 mg 替诺福韦艾拉酚胺片后的血浆浓度-时间曲线。
