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一种牛支原体的SYBRGreenI荧光定量PCR检测方法


技术摘要:
本发明具体涉及一种牛支原体的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。牛支原体是一种严重威胁牛养殖业的病原体,目前尚没有有效的治疗药物及疫苗,提供高效精确的检测方法对于牛支原体的防治具有重要意义。本发明研究表明P59蛋白编码基因序列在牛支原体种内高度保守且与其  全部
背景技术:
公开该
技术实现要素:
部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解,而不必然 被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技 术。 牛支原体(Mycoplasma  bovis)易引起牛的局部炎症,如肺、乳房、生殖道、关节发 炎、各类呼吸系统疾病,甚至引起母牛不孕,是一种严重威胁牛养殖业的病原体。上个世纪 八十年代以来,牛支原体相关疾病快速蔓延到多个国家及地区的牛群,严重制约了畜牧业 和经济的快速增长。据报道,欧洲每年25.1%~33.8%的犊牛感染牛支原体肺炎,损失高达 1.43亿~1.93亿欧元。英国每年有190万头左右的牛感染牛支原体肺炎。据报道,美国牛场 的感染率达到了71%,因牛支原体引起的疾病如牛呼吸系统疾病、肺炎等产生的损失高达 1.40亿美元。继2008年之后,我国的多个地区也相继爆发了由牛支原体引起的传染病,主要 症状有发热、咳嗽、流鼻涕等。由于目前没有效果理想的治疗药物及疫苗,并且支原体具有 高度的传染性,对于牛支原体进行快速、精准的鉴别有助于早期发现及提供及时的治疗。 目前,牛支原体的诊断方法还没有国际化的标准,我国对牛支原体的诊断方法主 要是从病原分离培养后鉴定,血清学诊断和分子生物学三个大方向对该病原进行检测、鉴 定。牛支原体的分离培养主要是将感染牛支原体的患病牛肺脏等组织研磨后,将研磨均匀 悬液通过0.45μm滤膜接种于液体培养基中进行培养,该方法主要用于分离单独菌株,但是 分离培养需要时间较多,不能够作为一种常规快速的诊断方法。血清学诊断牛支原体病原 的方法主要包括酶联免疫相关技术(如ELISA、免疫酶技术等)、间接血凝抑制实验、化学发 光分析等,血清学检测诊断虽然具有一定的灵敏性,但是容易出现假阳性的情况。常规PCR 检测方法的灵敏度不够,有时肉眼观察具有明显临床病理变化的样品组织,却检测不出阳 性条带。基因诊断技术中,所述PCR方法为鉴别支原体的主要技术,但由于牛无乳支原体和 牛支原体的16SRNA具有极高的同源性,故利用PCR扩增16SRNA无法区分上述两种病原体。
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