技术摘要：
本发明提供了一种RIPA裂解液，包括如下原料：NP‑40、NaCl、Tris‑HCl、SDS、脱氧胆酸盐、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、β‑巯基乙醇。本发明还提供了一种RIPA裂解液的制备方法。本发明所述的RIPA裂解液，通过各成分的配合，能更好的兼顾蛋白溶解率与蛋白的稳定，以便提取到 全部
背景技术：
RIPA为英文Radio Immunoprecipitation Assay的简称，即放射性免疫沉淀法分 析，RIPA裂解液是为开展免疫沉淀法分析而对蛋白质进行抽提的试剂。 现有的RIPA裂解液中，选用不同的去垢剂对蛋白质进行提取。其中，去垢剂过于温 和时，无法达到较好的蛋白溶解率，蛋白质提取效率较低。而以SDS作为强离子型去垢剂与 脱氧胆酸盐配合使用，则可以达到较好的蛋白质溶解率，因此，含有SDS的RIPA裂解液得到 广泛的应用。但是，SDS的使用会对后续的免疫沉淀分析产生较大影响，使抗原抗体免疫复 合物的形成受到抑制。 鉴于此，目前亟待提出一种RIPA裂解液，能更好的兼顾蛋白溶解率与蛋白的稳定， 以便提取到的蛋白质在后续的免疫沉淀分析中，可有效地形成抗原抗体免疫复合物。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种RIPA裂解液，以解决蛋白溶解率与蛋白的稳定无法兼 顾的问题。 为了解决上述问题，本发明提供一种RIPA裂解液，包括如下原料：NP-40、NaCl、 Tris-HCl、SDS、脱氧胆酸盐、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、β-巯基乙醇。 优选地，所述的RIPA裂解液，由各原料组分与纯化水混合而成；各原料组分的终浓 度如下： NP-40为0.7-1.2％； NaCl为130-210mmol/L； Tris-HCl为40-60mmol/L； SDS为0.8-1.2％； 脱氧胆酸盐为0.3-0.7％； 泊洛沙姆为0.1-0.5％； 聚山梨醇酯为1-5％； β-巯基乙醇为3-5％。 需要说明的是，上述百分号均代表质量百分比。 进一步优选地，各原料组分的终浓度如下： NP-40为1％； NaCl为150mmol/L； Tris-HCl为50mmol/L； SDS为1％； 脱氧胆酸盐为0.5％； 3 CN 111610324 A 说 明 书 2/7 页 泊洛沙姆为0.3％； 聚山梨醇酯为2％； β-巯基乙醇为4％。 优选地，所述泊洛沙姆为泊洛沙姆188。所述Tris-HCl的pH值为8.0。 本发明还提供一种所述的RIPA裂解液的制备方法，包括如下步骤：按用量取NP- 40、NaCl、Tris-HCl、SDS、脱氧胆酸盐、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、β-巯基乙醇，将其与纯化水混 合均匀而成。 本发明与现有技术相比，具有以下有益效果： 本发明所述的RIPA裂解液，包括如下原料：NP-40、NaCl、Tris-HCl、SDS、脱氧胆酸 盐、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、β-巯基乙醇。通过各成分的配合，能更好的兼顾蛋白溶解率与蛋 白的稳定，以便提取到的蛋白质在后续的免疫沉淀分析中，可有效地形成抗原抗体免疫复 合物。 其中，各成分作用如下： NP-40为Nonidet P 40的缩写，中文名称为乙基苯基聚乙二醇，是一种温和的非离 子型去垢剂，与蛋白结合力强，用于防止物质分子疏水间相互作用，确保蛋白的充分溶解和 结构稳定，尤其适用于蛋白的非变性条件下的溶解。 SDS，中文名称为十二烷基硫酸钠，为强离子型去垢剂，可将疏水蛋白从其膜结构 中溶解下来，有效增加蛋白的溶解。 脱氧胆酸盐，为去垢剂，与SDS、NP-40配合，使蛋白被释放出来。 NaCl可保证整个蛋白提取过程中接近于生理盐水的浓度。 Tris-HCl是三(羟甲基)氨基甲烷与盐酸配置形成的缓冲液，可防止pH的大幅度变 化，保障裂解在适宜的pH值环境下进行。 泊洛沙姆，为聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，可与蛋白产生交联作用，对交联的 蛋白形成包裹，避免强离子型去垢剂SDS对蛋白结构的破坏，保障蛋白的稳定。同时，泊洛沙 姆具有的部分亲水性的聚氧丙烯链段，使得交联的蛋白的亲水性增强，从而促进蛋白在裂 解液中的分散与溶解。泊洛沙姆作为非离子表面活性剂，还可以与NP-40产生协同效应，共 同促进蛋白质的溶解。 聚山梨醇酯，为非离子型表面活性剂，可以防止溶解蛋白之间产生非特异性吸附， 可以使分散溶解的蛋白，随着时间推移不发生非特异性吸附。同时，聚山梨醇酯具有一定的 粘度，与泊洛沙姆配合，可以共同对蛋白起到保护作用。 β-巯基乙醇，具有弱还原作用，可以防止蛋白被氧化而失活。
本发明提供了一种RIPA裂解液，包括如下原料：NP‑40、NaCl、Tris‑HCl、SDS、脱氧胆酸盐、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、β‑巯基乙醇。本发明还提供了一种RIPA裂解液的制备方法。本发明所述的RIPA裂解液，通过各成分的配合，能更好的兼顾蛋白溶解率与蛋白的稳定，以便提取到 全部
背景技术：
RIPA为英文Radio Immunoprecipitation Assay的简称，即放射性免疫沉淀法分 析，RIPA裂解液是为开展免疫沉淀法分析而对蛋白质进行抽提的试剂。 现有的RIPA裂解液中，选用不同的去垢剂对蛋白质进行提取。其中，去垢剂过于温 和时，无法达到较好的蛋白溶解率，蛋白质提取效率较低。而以SDS作为强离子型去垢剂与 脱氧胆酸盐配合使用，则可以达到较好的蛋白质溶解率，因此，含有SDS的RIPA裂解液得到 广泛的应用。但是，SDS的使用会对后续的免疫沉淀分析产生较大影响，使抗原抗体免疫复 合物的形成受到抑制。 鉴于此，目前亟待提出一种RIPA裂解液，能更好的兼顾蛋白溶解率与蛋白的稳定， 以便提取到的蛋白质在后续的免疫沉淀分析中，可有效地形成抗原抗体免疫复合物。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种RIPA裂解液，以解决蛋白溶解率与蛋白的稳定无法兼 顾的问题。 为了解决上述问题，本发明提供一种RIPA裂解液，包括如下原料：NP-40、NaCl、 Tris-HCl、SDS、脱氧胆酸盐、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、β-巯基乙醇。 优选地，所述的RIPA裂解液，由各原料组分与纯化水混合而成；各原料组分的终浓 度如下： NP-40为0.7-1.2％； NaCl为130-210mmol/L； Tris-HCl为40-60mmol/L； SDS为0.8-1.2％； 脱氧胆酸盐为0.3-0.7％； 泊洛沙姆为0.1-0.5％； 聚山梨醇酯为1-5％； β-巯基乙醇为3-5％。 需要说明的是，上述百分号均代表质量百分比。 进一步优选地，各原料组分的终浓度如下： NP-40为1％； NaCl为150mmol/L； Tris-HCl为50mmol/L； SDS为1％； 脱氧胆酸盐为0.5％； 3 CN 111610324 A 说 明 书 2/7 页 泊洛沙姆为0.3％； 聚山梨醇酯为2％； β-巯基乙醇为4％。 优选地，所述泊洛沙姆为泊洛沙姆188。所述Tris-HCl的pH值为8.0。 本发明还提供一种所述的RIPA裂解液的制备方法，包括如下步骤：按用量取NP- 40、NaCl、Tris-HCl、SDS、脱氧胆酸盐、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、β-巯基乙醇，将其与纯化水混 合均匀而成。 本发明与现有技术相比，具有以下有益效果： 本发明所述的RIPA裂解液，包括如下原料：NP-40、NaCl、Tris-HCl、SDS、脱氧胆酸 盐、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、β-巯基乙醇。通过各成分的配合，能更好的兼顾蛋白溶解率与蛋 白的稳定，以便提取到的蛋白质在后续的免疫沉淀分析中，可有效地形成抗原抗体免疫复 合物。 其中，各成分作用如下： NP-40为Nonidet P 40的缩写，中文名称为乙基苯基聚乙二醇，是一种温和的非离 子型去垢剂，与蛋白结合力强，用于防止物质分子疏水间相互作用，确保蛋白的充分溶解和 结构稳定，尤其适用于蛋白的非变性条件下的溶解。 SDS，中文名称为十二烷基硫酸钠，为强离子型去垢剂，可将疏水蛋白从其膜结构 中溶解下来，有效增加蛋白的溶解。 脱氧胆酸盐，为去垢剂，与SDS、NP-40配合，使蛋白被释放出来。 NaCl可保证整个蛋白提取过程中接近于生理盐水的浓度。 Tris-HCl是三(羟甲基)氨基甲烷与盐酸配置形成的缓冲液，可防止pH的大幅度变 化，保障裂解在适宜的pH值环境下进行。 泊洛沙姆，为聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，可与蛋白产生交联作用，对交联的 蛋白形成包裹，避免强离子型去垢剂SDS对蛋白结构的破坏，保障蛋白的稳定。同时，泊洛沙 姆具有的部分亲水性的聚氧丙烯链段，使得交联的蛋白的亲水性增强，从而促进蛋白在裂 解液中的分散与溶解。泊洛沙姆作为非离子表面活性剂，还可以与NP-40产生协同效应，共 同促进蛋白质的溶解。 聚山梨醇酯，为非离子型表面活性剂，可以防止溶解蛋白之间产生非特异性吸附， 可以使分散溶解的蛋白，随着时间推移不发生非特异性吸附。同时，聚山梨醇酯具有一定的 粘度，与泊洛沙姆配合，可以共同对蛋白起到保护作用。 β-巯基乙醇，具有弱还原作用，可以防止蛋白被氧化而失活。
