技术摘要：
本发明涉及分子生物学领域，具体是一种自组装术后谵妄的代谢组学标记物试剂盒及其应用。本发明中预测术后谵妄的试剂盒含多种代谢组学相关的分子，能够迅速检测老年患者的代谢物的水平，有效区别并对术后谵妄作出预测。同时本发明已成功应用于术后谵妄患者血清中代谢物 全部
背景技术：
术后谵妄是老年患者的术后常见的并发症，指术后1周内出现注意力、意识和认知 的下降症状，符合第五版神经障碍手册诊断，通常高发于术后24-72小时，需要辅助专业的 神经心理学量表测定诊断。术后谵妄发病率高达52％，不仅延长患者的住院时间、增加治疗 成本，而且还增加患者死亡率。目前，术后谵妄的诊断主要根据第五版神经障碍手册诊断以 及神经心理学评估量表，耗时长，尚无明确的实验室诊断指标。因此，迫切需要一种灵敏度 高，特异性强，操作简便，经济实用的方法来早期诊断术后谵妄。 代谢组学是一种有高效、高通量检测代谢产物水平的技术，为机体生物提供正常 或病理生理状态表型潜在的信息。并可以揭示细胞代谢过程中特有的化学指标。代谢组学 平台对代谢组学生物标记物的发现以及疾病的早期诊断及预后判断等可能具有重要意义。 然而，目前代谢组学筛选的分子均为非靶向的检测，检测的分子多，既耗时长，成 本也较高。因此，限制了它的使用。
技术实现要素：
本发明的目的在于为了克服现有技术的缺陷，提供一种自组装代谢组学标记物试 剂盒，有助于提高术后谵妄早期诊断的灵敏度和准确性。本发明的另一目的在于提供本发 明试剂盒在术后谵妄诊断方面的应用，尤其是早期诊断，利用本发明检测术后谵妄诊断的 灵敏度和准确性。 为了克服现有技术的缺陷，我们发现术后谵妄组患者血浆中十种代谢标记物与正 常组相比具有显著的统计学差异，因此十种代谢标记物有效的用作术后谵妄疾病的标记 物。 本发明中预测术后谵妄的试剂盒含多种代谢组学相关的分子，能够迅速检测老年 患者的代谢物的水平，有效区别并对术后谵妄作出预测。同时本发明已成功应用于术后谵 妄患者血清中代谢物的检测，检测结果表明术后谵妄患者(n＝15)与术后非谵妄患者(n＝ 41)血清中十种代谢物的水平差别具有统计学意义(P<0.05)。 本发明的第一方面，提供一组代谢标记物在制备诊断或预测术后谵妄疾病试剂盒 中的应用，所述的代谢标记物为油酰胺、单甘油酯180/00/00(Monoglycerides 180/00/00， 一种食品乳化剂)、L-组氨酸、L-亮氨酸、单磷酸鸟苷、亚磷酸二氢神经鞘氨醇-1、溶血磷脂 酰胆碱150、L-谷氨酰胺、L-酰基肉碱、尿酸中的一种或两种以上。 进一步的，所述的试剂盒检测血清中所述的代谢标记物的表达水平。检测时，患者 术后血浆中十种代谢物的表达水平任一个较术前水平变化(升高或降低)即可预测患者术 后谵妄。 3 CN 111721882 A 说 明 书 2/4 页 本发明的第二方面，提供检测血清中油酰胺、单甘油酯180/00/00、L-组氨酸、L-亮 氨酸、单磷酸鸟苷、亚磷酸二氢神经鞘氨醇-1、溶血磷脂酰胆碱150、L-谷氨酰胺、L-酰基肉 碱、尿酸中的一种或两种以上表达水平的试剂在制备诊断或预测术后谵妄疾病试剂盒中的 应用。 本发明的第三方面，提供一种诊断或预测术后谵妄疾病的试剂盒，所述的试剂盒 中包含检测血清中的油酰胺、单甘油酯180/00/00、L-组氨酸、L-亮氨酸、单磷酸鸟苷、亚磷 酸二氢神经鞘氨醇-1、溶血磷脂酰胆碱150、L-谷氨酰胺、L-酰基肉碱、尿酸中的一种或两种 以上目标代谢物的表达水平的试剂。 进一步的，所述的试剂为通过Agilent 1290Infinity LC超高效液相色谱系统进 行分离，而后进行质谱分析的检测血清中目标代谢物表达水平的试剂。 进一步的，所述的试剂盒中还包括代谢物的标准品、乙腈、甲酸、甲醇。 进一步的，所述的试剂盒的检测方法包括以下步骤： (A)血清在4℃环境下缓慢解冻后，分别取100μL，加入400μL预冷甲醇/乙腈溶液 (1:1，v/v)，涡旋混合，-20℃静置30min，14000g 4℃离心20min； (B)取(A)离心后上清，真空干燥，质谱分析时加入100μL乙腈水溶液(乙腈：水＝1: 1，v/v)复溶，涡旋，14000g 4℃离心15min，取上清液进样分析； (C)样品采用Agilent 1290Infinity LC超高效液相色谱系统进行分离； (D)采用5500QTRAP质谱仪(AB SCIEX)在正离子模式下进行质谱分析； (E)采用Multiquant软件提取色谱峰面积及保留时间；采用代谢标记物的标准品 矫正保留时间，即可检测目的代谢标记物的表达水平。 本发明优点在于： 本发明利用自组装十种代谢标记物试剂盒(油酰胺、单甘油酯180/00/00、L-组氨 酸、L-亮氨酸、单磷酸鸟苷、亚磷酸二氢神经鞘氨醇-1、溶血磷脂酰胆碱150、L-谷氨酰胺、L- 酰基肉碱、尿酸)，提升对术后谵妄的诊断敏感度。应用所述的十种代谢标记物水平差异水 平可以区别正常患者和术后谵妄患者，实现对老年患者血清样品中十种代谢标记物水平高 灵敏度和高特异度的检测，实际检测结果表明该方法可有效用于早期诊断术后谵妄。 附图说明 图1.两组患者代谢标记物最小二乘法判别分析； A、B图术后谵妄组患者术前和术后样本的PLS分析，C、D图术后谵妄和术后非谵妄 组患者术后样本的PLS分析；横纵坐标分别是PLS分析主成分得分；图中的☆A代表术后谵妄 组患者术前样本、△B代表术后谵妄组患者术后样本、◇C代表术后非谵妄组患者术后样本。 图2.两组患者代谢物不同表达水平； A图术后谵妄组患者术前和术后样本代谢物热点图(阳离子)，B图术后谵妄组患者 术前和术后样本代谢物热点图(阴离子)，C图术后谵妄和术后非谵妄组患者术后样本代谢 物热点图(阳离子)，D图术后谵妄和术后非谵妄组患者术后样本代谢物热点图(阴离子)；红 色代表升高，绿色代表降低。 图3.使用SVM模型筛选出术后谵妄预测的代谢物。 A图SVM模型不同数字特征的预测准确性；B图代谢物的预测重要性分级；C图两组 4 CN 111721882 A 说 明 书 3/4 页 患者样本SVM分析；D图SVM模型的特异性和敏感性。
本发明涉及分子生物学领域，具体是一种自组装术后谵妄的代谢组学标记物试剂盒及其应用。本发明中预测术后谵妄的试剂盒含多种代谢组学相关的分子，能够迅速检测老年患者的代谢物的水平，有效区别并对术后谵妄作出预测。同时本发明已成功应用于术后谵妄患者血清中代谢物 全部
背景技术：
术后谵妄是老年患者的术后常见的并发症，指术后1周内出现注意力、意识和认知 的下降症状，符合第五版神经障碍手册诊断，通常高发于术后24-72小时，需要辅助专业的 神经心理学量表测定诊断。术后谵妄发病率高达52％，不仅延长患者的住院时间、增加治疗 成本，而且还增加患者死亡率。目前，术后谵妄的诊断主要根据第五版神经障碍手册诊断以 及神经心理学评估量表，耗时长，尚无明确的实验室诊断指标。因此，迫切需要一种灵敏度 高，特异性强，操作简便，经济实用的方法来早期诊断术后谵妄。 代谢组学是一种有高效、高通量检测代谢产物水平的技术，为机体生物提供正常 或病理生理状态表型潜在的信息。并可以揭示细胞代谢过程中特有的化学指标。代谢组学 平台对代谢组学生物标记物的发现以及疾病的早期诊断及预后判断等可能具有重要意义。 然而，目前代谢组学筛选的分子均为非靶向的检测，检测的分子多，既耗时长，成 本也较高。因此，限制了它的使用。
技术实现要素：
本发明的目的在于为了克服现有技术的缺陷，提供一种自组装代谢组学标记物试 剂盒，有助于提高术后谵妄早期诊断的灵敏度和准确性。本发明的另一目的在于提供本发 明试剂盒在术后谵妄诊断方面的应用，尤其是早期诊断，利用本发明检测术后谵妄诊断的 灵敏度和准确性。 为了克服现有技术的缺陷，我们发现术后谵妄组患者血浆中十种代谢标记物与正 常组相比具有显著的统计学差异，因此十种代谢标记物有效的用作术后谵妄疾病的标记 物。 本发明中预测术后谵妄的试剂盒含多种代谢组学相关的分子，能够迅速检测老年 患者的代谢物的水平，有效区别并对术后谵妄作出预测。同时本发明已成功应用于术后谵 妄患者血清中代谢物的检测，检测结果表明术后谵妄患者(n＝15)与术后非谵妄患者(n＝ 41)血清中十种代谢物的水平差别具有统计学意义(P<0.05)。 本发明的第一方面，提供一组代谢标记物在制备诊断或预测术后谵妄疾病试剂盒 中的应用，所述的代谢标记物为油酰胺、单甘油酯180/00/00(Monoglycerides 180/00/00， 一种食品乳化剂)、L-组氨酸、L-亮氨酸、单磷酸鸟苷、亚磷酸二氢神经鞘氨醇-1、溶血磷脂 酰胆碱150、L-谷氨酰胺、L-酰基肉碱、尿酸中的一种或两种以上。 进一步的，所述的试剂盒检测血清中所述的代谢标记物的表达水平。检测时，患者 术后血浆中十种代谢物的表达水平任一个较术前水平变化(升高或降低)即可预测患者术 后谵妄。 3 CN 111721882 A 说 明 书 2/4 页 本发明的第二方面，提供检测血清中油酰胺、单甘油酯180/00/00、L-组氨酸、L-亮 氨酸、单磷酸鸟苷、亚磷酸二氢神经鞘氨醇-1、溶血磷脂酰胆碱150、L-谷氨酰胺、L-酰基肉 碱、尿酸中的一种或两种以上表达水平的试剂在制备诊断或预测术后谵妄疾病试剂盒中的 应用。 本发明的第三方面，提供一种诊断或预测术后谵妄疾病的试剂盒，所述的试剂盒 中包含检测血清中的油酰胺、单甘油酯180/00/00、L-组氨酸、L-亮氨酸、单磷酸鸟苷、亚磷 酸二氢神经鞘氨醇-1、溶血磷脂酰胆碱150、L-谷氨酰胺、L-酰基肉碱、尿酸中的一种或两种 以上目标代谢物的表达水平的试剂。 进一步的，所述的试剂为通过Agilent 1290Infinity LC超高效液相色谱系统进 行分离，而后进行质谱分析的检测血清中目标代谢物表达水平的试剂。 进一步的，所述的试剂盒中还包括代谢物的标准品、乙腈、甲酸、甲醇。 进一步的，所述的试剂盒的检测方法包括以下步骤： (A)血清在4℃环境下缓慢解冻后，分别取100μL，加入400μL预冷甲醇/乙腈溶液 (1:1，v/v)，涡旋混合，-20℃静置30min，14000g 4℃离心20min； (B)取(A)离心后上清，真空干燥，质谱分析时加入100μL乙腈水溶液(乙腈：水＝1: 1，v/v)复溶，涡旋，14000g 4℃离心15min，取上清液进样分析； (C)样品采用Agilent 1290Infinity LC超高效液相色谱系统进行分离； (D)采用5500QTRAP质谱仪(AB SCIEX)在正离子模式下进行质谱分析； (E)采用Multiquant软件提取色谱峰面积及保留时间；采用代谢标记物的标准品 矫正保留时间，即可检测目的代谢标记物的表达水平。 本发明优点在于： 本发明利用自组装十种代谢标记物试剂盒(油酰胺、单甘油酯180/00/00、L-组氨 酸、L-亮氨酸、单磷酸鸟苷、亚磷酸二氢神经鞘氨醇-1、溶血磷脂酰胆碱150、L-谷氨酰胺、L- 酰基肉碱、尿酸)，提升对术后谵妄的诊断敏感度。应用所述的十种代谢标记物水平差异水 平可以区别正常患者和术后谵妄患者，实现对老年患者血清样品中十种代谢标记物水平高 灵敏度和高特异度的检测，实际检测结果表明该方法可有效用于早期诊断术后谵妄。 附图说明 图1.两组患者代谢标记物最小二乘法判别分析； A、B图术后谵妄组患者术前和术后样本的PLS分析，C、D图术后谵妄和术后非谵妄 组患者术后样本的PLS分析；横纵坐标分别是PLS分析主成分得分；图中的☆A代表术后谵妄 组患者术前样本、△B代表术后谵妄组患者术后样本、◇C代表术后非谵妄组患者术后样本。 图2.两组患者代谢物不同表达水平； A图术后谵妄组患者术前和术后样本代谢物热点图(阳离子)，B图术后谵妄组患者 术前和术后样本代谢物热点图(阴离子)，C图术后谵妄和术后非谵妄组患者术后样本代谢 物热点图(阳离子)，D图术后谵妄和术后非谵妄组患者术后样本代谢物热点图(阴离子)；红 色代表升高，绿色代表降低。 图3.使用SVM模型筛选出术后谵妄预测的代谢物。 A图SVM模型不同数字特征的预测准确性；B图代谢物的预测重要性分级；C图两组 4 CN 111721882 A 说 明 书 3/4 页 患者样本SVM分析；D图SVM模型的特异性和敏感性。
