技术摘要：
本发明公开了提供一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法，剪取蝴蝶兰品种中下部叶片，用酒精将叶片及叶柄伤口擦拭一遍，自然晾干。将病原菌株接种于NA培养液，用无菌水配制成细菌悬浮液。用无菌大头针在叶片中央密集轻刺，在针刺处滴细菌悬浮液，放入磁盘中保湿密封，黑暗培养 全部
背景技术：
蝴蝶兰软腐病(phalaenopsis soft rot disease)，由迪克氏细菌Dickeya dieffenbachiae引起，为蝴蝶兰的主要病害之一，分布广泛且全国各蝴蝶兰生产区均有发 生。发病后，病原菌分泌果胶酶，溶解细胞壁中的果胶质，使组织软腐，且蔓延迅速，造成严 重的经挤损失。抗病品种的选育是控制该病害的主要手段。但是目前国内外尚未有关于蝴 蝶兰批准抗性鉴定的方法，因此，发明准确评价品种的抗性的方法显得尤其重要。
技术实现要素：
鉴于现有技术的不足，本发明旨在于提供一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法。 为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下： 一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法，所述方法包括以下步骤： S1病原菌分离和准备，获取蝴蝶兰软腐病样品，按常规消毒，再用无菌刀将病健交 接处的组织切成薄片移到NA培养基上培养，经分离纯化，并经柯赫氏法则验证确定；于32℃ 下在NA平板上培养，获病原菌纯培养；将病原菌株接种于NA培养液，在32℃转速150r/min培 养36h，用无菌水配制成106-107CFU/mL的细菌悬浮液； S2将灭菌后的滤纸置于培养皿中，喷无菌水至滤纸湿润后备用； S3品种准备，选28个蝴蝶兰品种，每品种准备5片叶子，大小直径为50mm-70mm，清 洗晾干后用质量浓度75％的酒精消毒，用高感软腐病GD1做对照；将消毒后的蝴蝶兰叶片分 别置于保湿好的消毒平板中； S4接种鉴定，用无菌大头针在叶片中央密集轻刺5下，在针刺处滴0.2mL步骤S1获 得的细菌悬浮液，每个处理4次重复，每个重复5片叶； S5调查评价，放入磁盘中保湿密封，30℃黑暗培养。当叶片出现水渍状病斑时，每 24h观察并记录叶片发病情况； S6按分级标准进行分级并计算病情指数，根据病情指数进行品种的抗感特性评 价. 优选的，蝴蝶兰品种软腐病病抗性水平按照以下标准进行确定： 高抗：病情指数≤20； 抗病：20＜病情指数≤40； 中抗：40＜病情指数≤60； 感病：60＜病情指数≤80； 高感：80＜病情指数； 优选的，分级标准是： 3 CN 111593088 A 说 明 书 2/8 页 0级，针刺处无水渍状病斑；1级，针刺处见水渍状病斑，病斑不扩散到针刺范围外 0.2cm距离外； 2级，病斑扩散到针刺范围外0.2cm距离外，同时病斑面积≤25％叶片面积； 3级，25％叶片面积＜病斑面积≤50％叶片面积； 4级，50％叶片面积＜病斑面积≤75％叶片面积； 5级，75％叶片面积＜病斑面积。 优选的，病情指数计算公式为： 需要指出的是，本发明所使用的NA培养基配方为：牛肉浸膏0 .3％，酵母浸膏 0.1％，蛋白胨0.5％，葡萄糖1.0％，琼脂1.8％，水1000ml，pH6.8-7.0； 本发明的有益效果在于，该鉴定方法科学，省时省力，过程简单易于操作，根据病 斑分级并计算病情指数进行抗性评价最为有效。
本发明公开了提供一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法，剪取蝴蝶兰品种中下部叶片，用酒精将叶片及叶柄伤口擦拭一遍，自然晾干。将病原菌株接种于NA培养液，用无菌水配制成细菌悬浮液。用无菌大头针在叶片中央密集轻刺，在针刺处滴细菌悬浮液，放入磁盘中保湿密封，黑暗培养 全部
背景技术：
蝴蝶兰软腐病(phalaenopsis soft rot disease)，由迪克氏细菌Dickeya dieffenbachiae引起，为蝴蝶兰的主要病害之一，分布广泛且全国各蝴蝶兰生产区均有发 生。发病后，病原菌分泌果胶酶，溶解细胞壁中的果胶质，使组织软腐，且蔓延迅速，造成严 重的经挤损失。抗病品种的选育是控制该病害的主要手段。但是目前国内外尚未有关于蝴 蝶兰批准抗性鉴定的方法，因此，发明准确评价品种的抗性的方法显得尤其重要。
技术实现要素：
鉴于现有技术的不足，本发明旨在于提供一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法。 为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下： 一种蝴蝶兰软腐病抗性鉴定方法，所述方法包括以下步骤： S1病原菌分离和准备，获取蝴蝶兰软腐病样品，按常规消毒，再用无菌刀将病健交 接处的组织切成薄片移到NA培养基上培养，经分离纯化，并经柯赫氏法则验证确定；于32℃ 下在NA平板上培养，获病原菌纯培养；将病原菌株接种于NA培养液，在32℃转速150r/min培 养36h，用无菌水配制成106-107CFU/mL的细菌悬浮液； S2将灭菌后的滤纸置于培养皿中，喷无菌水至滤纸湿润后备用； S3品种准备，选28个蝴蝶兰品种，每品种准备5片叶子，大小直径为50mm-70mm，清 洗晾干后用质量浓度75％的酒精消毒，用高感软腐病GD1做对照；将消毒后的蝴蝶兰叶片分 别置于保湿好的消毒平板中； S4接种鉴定，用无菌大头针在叶片中央密集轻刺5下，在针刺处滴0.2mL步骤S1获 得的细菌悬浮液，每个处理4次重复，每个重复5片叶； S5调查评价，放入磁盘中保湿密封，30℃黑暗培养。当叶片出现水渍状病斑时，每 24h观察并记录叶片发病情况； S6按分级标准进行分级并计算病情指数，根据病情指数进行品种的抗感特性评 价. 优选的，蝴蝶兰品种软腐病病抗性水平按照以下标准进行确定： 高抗：病情指数≤20； 抗病：20＜病情指数≤40； 中抗：40＜病情指数≤60； 感病：60＜病情指数≤80； 高感：80＜病情指数； 优选的，分级标准是： 3 CN 111593088 A 说 明 书 2/8 页 0级，针刺处无水渍状病斑；1级，针刺处见水渍状病斑，病斑不扩散到针刺范围外 0.2cm距离外； 2级，病斑扩散到针刺范围外0.2cm距离外，同时病斑面积≤25％叶片面积； 3级，25％叶片面积＜病斑面积≤50％叶片面积； 4级，50％叶片面积＜病斑面积≤75％叶片面积； 5级，75％叶片面积＜病斑面积。 优选的，病情指数计算公式为： 需要指出的是，本发明所使用的NA培养基配方为：牛肉浸膏0 .3％，酵母浸膏 0.1％，蛋白胨0.5％，葡萄糖1.0％，琼脂1.8％，水1000ml，pH6.8-7.0； 本发明的有益效果在于，该鉴定方法科学，省时省力，过程简单易于操作，根据病 斑分级并计算病情指数进行抗性评价最为有效。
