技术摘要：
公开了用于增加轮状病毒产量的组合物和方法。
背景技术：
疫苗是抵抗传染病最重要的防御手段之一。这些疫苗在细胞培养中产生的数量更 多。为了实现这一点，将特征明显的细胞系(例如，Vero细胞)(例如)在确定成分培养基配方 中生长，然后用活的或减毒的活病毒感染。随后，收集并处理含有原始病毒颗粒后代的上清 液，以产生高免疫原性剂量的疫苗，然后将其分配到种群中。 当前，一系列复杂的因素(种群动态、生物生产、成本等)限制了在全球范围内提供 足够的免疫覆盖率的能力。特别地，疫苗的生物生产可能是昂贵的，并且提供所需数量的疫 苗所需的时间会显著影响社会的医疗福利。该问题与轮状病毒疫苗特别相关。因此，需要以 大大降低的成本增加疫苗产量的新技术。
技术实现要素：
公开了与增加细胞中的轮状病毒产量有关的方法和组合物。所公开的方法和组合 物包括减少至少一种基因的表达，所述至少一种基因选自ZNF205、NEU2、NAT9、SVOPL、COQ9、 BTN2A1、PYCR1、EP300、SEC61G、NDUFA9、RAD51AP1、COX20、MAPK6、WDR62、LRGUK、CDK6、 KIAA1683、CRISP3、GRPR、DPH7、GEMIN8、KIAA1407、RFXAP、SMARRCA4、CCDC147、AACS、CDK9、 C7ORF26、ZDHHC14、RNUT1、GAB1、EMC3、FAM96A、FAM36A、DEFB126、MGC955、EPHX2、SRGAP1、 PPP5C、MET、SELM、TSPYL2、TSARG6、NDUFB2、PLAU、ADORA2B、FLJ22875、HMMR、NRK、LRIT3、 FLJ44691、GPR154、ZGPAT、DRD1、FLJ27505、EDG5、SNRNP40、GPA33、JDP2、FLJ20010、FOXJ1、 SCT、CHD1L、SULT1C1、STN2、MRS2L、RAD51AP1、DPH7、CLPP、ZNF37、AP3B2、DEGS2、PIR、D2LIC、 CNTF、PAM、MYH9、PRPF4、SLC4A11、LRRCC1、FZD9、GPR43、LTF、ARIH1、PIK3R3、PTGFRN、 HSPA5BP1、ZDHHC16、KIAA1764、C19ORF14、DKFZP434K046、C9ORF112和/或PIR51基因，其减少 会增加轮状病毒的产量。 在一方面，本文公开了包含表达减少的至少一种基因的细胞，所述至少一种基因 选自ZNF205、NEU2、NAT9、SVOPL、COQ9、BTN2A1、PYCR1、EP300、SEC61G、NDUFA9、RAD51AP1、 COX20、MAPK6、WDR62、LRGUK、CDK6、KIAA1683、CRISP3、GRPR、DPH7、GEMIN8、KIAA1407、RFXAP、 SMARRCA4、CCDC147、AACS、CDK9、C7ORF26、ZDHHC14、RNUT1、GAB1、EMC3、FAM96A、FAM36A、 DEFB126、MGC955、EPHX2、SRGAP1、PPP5C、MET、SELM、TSPYL2、TSARG6、NDUFB2、PLAU、ADORA2B、 FLJ22875、HMMR、NRK、LRIT3、FLJ44691、GPR154、ZGPAT、DRD1、FLJ27505、EDG5、SNRNP40、 GPA33、JDP2、FLJ20010、FOXJ1、SCT、CHD1L、SULT1C1、STN2、MRS2L、RAD51AP1、DPH7、CLPP、 ZNF37、AP3B2、DEGS2、PIR、D2LIC、CNTF、PAM、MYH9、PRPF4、SLC4A11、LRRCC1、FZD9、GPR43、 LTF、ARIH1、PIK3R3、PTGFRN、HSPA5BP1、ZDHHC16、KIAA1764、C19ORF14、DKFZP434K046、 C9ORF112和/或PIR51。 在一方面，本文公开了增加一种或多种轮状病毒的轮状病毒产量的方法，包括用 7 CN 111601615 A 说　明　书 2/38 页 轮状病毒感染细胞；其中所述细胞包含表达减少的至少一种基因，所述至少一种基因选自 ZNF205、NEU2、NAT9、SVOPL、COQ9、BTN2A1、PYCR1、EP300、SEC61G、NDUFA9、RAD51AP1、COX20、 MAPK6、WDR62、LRGUK、CDK6、KIAA1683、CRISP3、GRPR、DPH7、GEMIN8、KIAA1407、RFXAP、 SMARRCA4、CCDC147、AACS、CDK9、C7ORF26、ZDHHC14、RNUT1、GAB1、EMC3、FAM96A、FAM36A、 DEFB126、MGC955、EPHX2、SRGAP1、PPP5C、MET、SELM、TSPYL2、TSARG6、NDUFB2、PLAU、ADORA2B、 FLJ22875、HMMR、NRK、LRIT3、FLJ44691、GPR154、ZGPAT、DRD1、FLJ27505、EDG5、SNRNP40、 GPA33、JDP2、FLJ20010、FOXJ1、SCT、CHD1L、SULT1C1、STN2、MRS2L、RAD51AP1、DPH7、CLPP、 ZNF37、AP3B2、DEGS2、PIR、D2LIC、CNTF、PAM、MYH9、PRPF4、SLC4A11、LRRCC1、FZD9、GPR43、 LTF、ARIH1、PIK3R3、PTGFRN、HSPA5BP1、ZDHHC16、KIAA1764、C19ORF14、DKFZP434K046、 C9ORF112和/或PIR51基因。 附图说明 并入本说明书并构成本说明书一部分的附图示出了几个实施例，并且与说明书一 起示出了所公开的组合物和方法。 图1显示了全基因组RNAi筛选的Z评分，其设计用于检测i)增强或ii)抑制MA104细 胞中的轮状病毒复制的宿主基因调控事件。如通过ELISA判断的，76个基因抑制事件显著增 强了轮状病毒复制(Z评分大于或等于3.0)。121个基因抑制事件显著降低RV3产量。 图2显示了对前20个基因靶标的抑制如何影响Vero细胞中轮状病毒产生。Y轴代表 ELISA读数中的O.D.读数。X轴标识由RNAi靶向的基因。“NTC”＝非靶向对照。 图3显示了siRNA转染对细胞中靶基因水平的影响。Y轴代表测量的mRNA水平。X轴 标识对照和靶基因信号。 图4显示了两种不同的CRISPR基因编辑方法。Sigma  CRISPR系统共表达gRNA和 Cas9，以及用于细胞分选的GFP标记蛋白。B)gRNA(cRNA：tracRNA)和Cas9质粒的GE  Dharmacon系统共转染。 图5A和5B显示WT/KO  Vero细胞被96孔格式中的Rotarix(MOI  0.2)感染了3天(5A) 或5天(5B)，然后将上清液转移至新鲜细胞(WT/KO)中16小时。用4％福尔马林固定细胞，然 后使用抗RV兔多克隆血清对RV抗原染色。细胞(n>20,000)在Arrayscan  VTI上成像。数据代 表来自六个独立重复样品的±SEM。使用单因素方差分析比较荧光病灶的差异*p< 0.01；****p<0.0001。 图6A和6B显示WT/KO  Vero细胞被96孔格式中的Rotarix(MOI  0.1)感染了3天(6A) 或5天(6B)，然后将上清液转移至新鲜细胞中16小时。使用抗-RV兔多克隆血清收集上清液 用于RV抗原的ELISA。数据代表来自六个独立重复样品的±SEM。使用单因素方差分析比较 吸光度的差异****p<0.0001。 图7A和7B显示WT/KO  Vero细胞被96孔格式中的CDC9(MOI  0.1)感染了3天(7A)或5 天(7B)，然后将上清液转移至新鲜细胞中16小时。用4％福尔马林固定细胞，然后使用抗RV 兔多克隆血清对RV抗原染色。细胞(n>20,000)在Arrayscan  VTI上成像。数据代表来自六个 独立重复样品的±SEM。使用单因素方差分析比较荧光病灶的差异***p<0 .01，****p< 0.0001。 图8A和8B显示WT/KO  Vero细胞被96孔格式中的CDC9(MOI  0.1)感染了3天(8A)或5 8 CN 111601615 A 说　明　书 3/38 页 天(8B)，然后将上清液转移至新鲜细胞中16小时。使用抗-RV兔多克隆血清收集上清液用于 RV抗原的ELISA。数据代表来自六个独立重复样品的±SEM。使用单因素方差分析比较吸光 度的差异****p<0.0001。 图9A和9B显示WT/KO  Vero细胞被96孔格式中的116E(MOI  0.1)感染了3天(9A)或5 天(9B)，然后将上清液转移至新鲜细胞中16小时。用4％福尔马林固定细胞，然后使用抗RV 兔多克隆血清对RV抗原染色。细胞(n>20,000)在Arrayscan  VTI上成像。数据代表来自六个 独立重复样品的±SEM。使用单因素方差分析比较荧光病灶的差异**p<0 .01，****p< 0.0001。 图10A和10B显示WT/KO  Vero细胞被96孔格式中的116E(MOI  0.1)感染了3天(10A) 或5天(10B)，然后将上清液转移至新鲜细胞中16小时。使用抗-RV兔多克隆血清收集上清液 用于RV抗原的ELISA。数据代表来自六个独立重复样品的±SEM。使用单因素方差分析比较 吸光度的差异****p<0.0001