技术摘要：
本发明公开了一种桔梅奇酵母液体制剂及其制备方法和应用，属于果蔬保护剂技术领域。桔梅奇酵母液体制剂包括糖保护剂，抗氧化剂，乳化剂，增效剂，其余为桔梅奇酵母菌悬浮液。其制备方法为：将桔梅奇酵母进行接种培养，得到酵母菌悬浮液；然后与溶解后的糖保护剂，抗氧  全部
背景技术：
具有拮抗作用的梅奇酵母属菌株是广泛存在于自然界的一类酵母菌种，主要存在 于含糖量较为丰富的果实表面和花上，是果蔬防止采后病原菌侵染的天然屏障。国内外大 量研究表明，该属菌株能用于桃、葡萄、樱桃、草莓、柑橘等果实采后病害的防治。该菌生长 速度快，营养简单，生长力强。在作为生防菌应用方面，它拥有自己独特的优势：1)对环境的 污染较少，不产生毒素；2)不产生抗生素，对人类相对比较安全；3)相对于其他真菌而言，不 产生致敏孢子；4)所需营养比较简单；5)适合商业化大规模生产。 桔梅奇酵母(Metschnikowia  citriensis)是从柑橘叶片表面分离得到的一株新 种酵母，对柑橘采后青霉病、绿霉病以及酸腐病有极好的防治效果，其主要生防机制是对病 原菌菌丝的附着并形成生物膜，以及通过栗色素的形成消耗病原菌生长所需的铁离子。但 是，关于该菌株在采后领域的商业化应用少有研究报道。 拮抗酵母制剂按形式分类，通常可以分为干制剂和液体制剂两种形式，其中液体 制剂具有制备简单、价格低廉、方便使用等优点，常无需活化即可使用。由于采后生物防治 拮抗菌是活体微生物的特点，生物制剂在制备时需确保能够达到或接近原种拮抗酵母的活 力和效力。然而，在液体制剂制备以及保存过程中，微生物常受到氧化损伤、渗透压胁迫等 作用，造成微生物存活率降低，使得生防效力大大减弱。因此，需添加生物活性保护剂，增强 酵母胁迫耐受性，提高存活率。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种桔梅奇酵母液体制剂及其制备方法。 经研究，本发明提供以下技术方案： 1、一种桔梅奇酵母液体制剂，所述桔梅奇酵母液体制剂按重量百分比计，包括1～ 20％糖保护剂，0.05～2％抗氧化剂，1～20％乳化剂，0.5～5％增效剂，其余为桔梅奇酵母 菌悬浮液。 优选的，所述糖保护剂为乳糖或海藻糖。 优选的，所述抗氧化剂为L-抗坏血酸或谷氨酸钠。 优选的，所述乳化剂为阿拉伯树胶或吐温80。 优选的，所述增效剂为脯氨酸或氯化钙。 优选的，所述糖保护剂为海藻糖；所述抗氧化剂为谷氨酸钠；所述乳化剂为吐温 80；所述增效剂为脯氨酸。 更优选的，所述桔梅奇酵母液体制剂按重量百分比计，包括19 .74％海藻糖， 1.05％谷氨酸钠，4.24％吐温80，1.11％脯氨酸，其余为桔梅奇酵母菌悬浮液。 3 CN 111718860 A 说　明　书 2/7 页 2、上述桔梅奇酵母液体制剂的制备方法，包括以下步骤： 将桔梅奇酵母接种到酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基上，活化培养； 用接种环挑取2环酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基上的酵母单菌落至酵母膏胨 葡萄糖(YPD)琼脂液体培养基中进行培养，得发酵液； 将发酵液按5％的比例加入酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基中进行培养，结束后 将培养液离心，收集菌体，洗涤，重悬，得酵母菌悬浮液； 将糖保护剂，抗氧化剂，乳化剂和增效剂溶解到磷酸缓冲盐溶液(PBS)中，然后与 酵母菌悬浮液混合，即得。 其中，桔梅奇酵母液体制剂的制备方法中的发酵液即作为种子液进行后续培养。 优选的，所述活化培养的温度为28℃，时间为48h。 优选的，所述发酵液和所述酵母菌悬浮液的培养均为摇床培养，温度为28℃，转速 为200r/min。 优选的，所述发酵液的摇床培养的时间为20～24h。 优选的，所述酵母菌悬浮液的摇床培养的时间为48h。 优选的，所述培养液在4℃条件下，以转速为4000r/min进行离心10min。 优选的，所述洗涤采用无菌水洗涤两次。 优选的，所述重悬采用0.05mol/L，pH为6.5的PBS溶液重悬菌体。 优选的，所述酵母菌悬浮液中细胞浓度为2×109CFU/mL。 3、上述桔梅奇酵母液体制剂在采后果蔬中作为保护剂的应用。 桔梅奇酵母(Metschnikowia  citriensis)由西南大学食品贮藏与物流研究中心 提供，保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CICC  NO.33213。该菌种接种于 NYDA斜面，4℃条件下保藏，每两个月活化一次。 本发明的有益效果在于： 1)本发明的桔梅奇酵母液体制剂，通过在桔梅奇酵母菌液中加入糖保护剂以提高 酵母的生物活性，抗氧化剂以提高抗氧化损伤，同时，加入具有良好分散和稳定溶液的乳化 剂，以增强酵母菌的胁迫耐受性，以及提高酵母生防效力的辅助因子—增效剂，且通过优化 配比及其相互之间的协同作用，从而提高桔梅奇酵母菌在保存过程中的存活率和生物防治 效力； 2)本发明的桔梅奇酵母液体制剂的制备方法，通过将桔梅奇酵母接种到酵母膏胨 葡萄糖(YPD)琼脂培养基上活化培养后，在接种环上挑取2环酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培 养基上的酵母单菌落至酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂液体培养基中进行培养，得发酵液，以发 酵液为种子液，加入酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基中进行扩大培养，处理后得酵母菌悬 浮液，具有操作简单、条件温和、安全环保等优点； 3)本发明的桔梅奇酵母液体制剂，以桔梅奇酵母菌为主要原料，并辅以安全无毒 的保护剂，相比于现有的化学保鲜剂，具有安全环保，方便使用，生防效力高等优点，在采后 果蔬病原菌浸染的防治方面，具有实用价值，适宜推广应用。 附图说明 图1为本发明的不同糖保护剂及其添加量对桔梅奇酵母菌存活率的影响结果图； 4 CN 111718860 A 说　明　书 3/7 页 图2为本发明的不同抗氧化剂及其添加量对桔梅奇酵母菌存活率的影响结果图； 图3为本发明的不同乳化剂及其添加量对桔梅奇酵母菌存活率的影响结果图； 图4为本发明的不同增效剂及其添加量对桔梅奇酵母菌存活率的影响结果图。