技术摘要：
本发明涉及医药与保健品技术领域，涉及麦吊云杉提取物及其制备方法和在制药中的用途，本发明公开了麦吊云杉提取物包括粗提取物和单一成分的制备方法，以及作为腺苷三磷酸‑柠檬酸裂解酶[adenosine triphosphate(ATP)‑citrate lyase，ACL]抑制剂的药物用途。本发明从松 全部
背景技术：
现有技术公开了腺苷三磷酸-柠檬酸裂解酶[adenosine triphosphate(ATP)- citrate lyase，ACL]是肝脏脂肪合成通路上的由介导瘦素调节糖脂代谢平衡的关键效应 基因之一。ACL位于细胞质中，能将胞质内的柠檬酸催化转变成为乙酰辅酶A，进而产生脂肪 酸合成的前体分子-丙二酸单酰辅酶A，因此ACL是连接细胞内葡萄糖分解代谢与脂肪酸合 成通路的重要代谢酶，是糖代谢与产生脂肪酸之间的桥梁(Elshourbagy et al .，Eur J Biochem 1992,204:491-499)。研究表明，ACL异常升高在糖脂代谢紊乱中扮演重要角色， ACL表达的改变能使细胞糖、脂代谢发生异常，导致机体发生肥胖症、Ⅱ型糖尿病、高脂血 症、非酒精脂肪肝等代谢型疾病或癌症。 研究还表明代谢综合征(metabolic syndrome,MS)是以中心型肥胖、高血压、血脂 异常、代谢异常等多种代谢异常集簇为内涵，以胰岛素抵抗为共同病理生理基础的一组临 床症候群；近年来临床上MS的发病率呈增高趋势，严重侵害患者身心健康。 有关研究报道了II型糖尿病(non-insulin-dependent diabetes mellitus)和肥 胖症(obesity)是严重威胁人类身体健康的内分泌紊乱性代谢类疾病，常伴随着外周组织 细胞对胰岛素敏感性的降低(即胰岛素抵抗)，引起肌肉、肝脏及脂肪组织中的糖脂代谢平 衡失调；研究表明基因沉默或抑制ACL能降低葡萄糖诱导的胰岛素分泌，游离脂肪酸的升高 能抑制ACL活性从而导致胰腺细胞的应激和凋亡，脂肪酸和胆固醇合成离不开细胞质中的 乙酰辅酶A参与；因此，ACL可视为治疗糖尿病和肥胖症疾病的重要药物靶点(Guay et al., J Bio Chem 2007,282:35657-35665；Chu et al.,J Bio Chem 2010,285:32606–32615； Pearce et al.,Biochem J 1998,334:113–119)。 研究报道了高脂血症是由于全身脂肪代谢紊乱引起血浆中一种或几种脂质结构 失衡的疾病，主要是血中总胆固醇(totalcholesterol,TC)或甘油三酯(triglyceride,TG) 过高或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)过低；ACL抑制剂能明显降低血浆中胆固醇和甘油三酯 水平(Pearce et al.,Biochem J 1998,334,113-119)，因此，ACL可视为治疗高血脂症的重 要药物靶点。 研究报道了非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic Fatty Liver Disease，NAFLD) 是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病 理综合征，与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤，研究显示，在 非酒精性脂肪肝疾病中ACL是过度表达的，并导致甘油三酯和肝细胞脂肪变性(Wang et al.,Hepatology 2009,49:1166-1175)，因此，ACL也是治疗高血脂症的重要药物靶点。 寻找ACL的特异性抑制剂成为本领域技术人员的共识，通过抑制ACL的活性调节脂 肪细胞中脂肪酸和胆固醇合成，对代谢紊乱疾病，如II型糖尿病和肥胖症、高血脂症或非酒 3 CN 111544458 A 说 明 书 2/5 页 精性脂肪肝的预防和治疗有着重要的应用前景。 研究认为，恶性肿瘤的发生与异常脂类代谢有关，异常脂类代谢途径参与肿瘤细 胞的物质、能量合成、生长和耐药的信号转导等的过程；有研究发现ACL与数种肿瘤的恶性 进程相关，且在多种肿瘤细胞中活性是上调的，ACY抑制可使体内和体外的绝大多数肿瘤细 胞停止生长，因此，有关ACL的抑制剂可用于治疗或预防癌症或在癌症发展时用于减缓其进 展。 麦吊云杉(Picea brachytyla)隶属松科(Pinaceae)云杉属(Picea)植物，是一种 常绿乔木，成年后高达30余米，是我国特有的面临濒危灭绝的珍稀树种之一，于1992年10月 被列为国家珍稀树种第一批保护树种(Fu et al.,China Plant Red Data Book,Science Press:Beijing；New York,1992)，主要分布于我国秦岭、大巴山脉及四川北部，目前其化学 成分和药理活性尚未有任何报道。 基于现有技术的现状和基础，本申请的发明人拟进行保护性地采集少许麦吊云杉 植物样品研发其在制药中的新用途，具体的，本申请拟提供麦吊云杉提取物及其制备方法 和在制药中的用途，尤其是作为ACL抑制剂在制备治疗ATP-柠檬酸裂解酶介导疾病药物中 的用途。
技术实现要素：
本发明的目的在于基于现有技术的现状和基础，提供麦吊云杉提取物及其制备方 法和在制药中的用途，尤其是作为ACL抑制剂在制备治疗ATP-柠檬酸裂解酶介导疾病药物 中的用途。本发明提供了一种麦吊云杉提取物，包括有粗提取物和单成分，及其作为ACL抑 制剂的药物用途，可进一步用于制备治疗高血脂、心血管疾病及其他ACL介导的疾病的药物 或保健品中应用。 本发明的进一步目的是提供了所述麦吊云杉提取物包括粗提取物和萜类单体化 合物的制备方法。 本发明所述提取物由麦吊云杉枝叶经由本领域所涉常规的提取分离方法制备而 得，其中粗提取物步骤可用下述方法制得：取干燥的麦吊云杉枝叶粉碎机粉粹；用8倍量的 90％甲醇浸渍提取3次，每次24小时，得麦吊云杉提取液；麦吊云杉提取液用布氏漏斗抽滤， 合并滤液，减压浓缩成浸膏，得麦吊云杉醇提物；其中萜类单体化合物采用以下方法制得： 麦吊云杉粗提取物加适量水混悬后，先后用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别得石油醚 部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分，浓缩后真空干燥，分别得醇提物的石油醚部位、乙酸乙 酯部位和正丁醇部位；取上述乙酸乙酯部位，经反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱 及反相半制备高效液相色谱(semi-RP-HPLC)分离制备，分别得到单体化合物brachytylin F(I) ,brachytylin G(II) ,23-hydroxyisomangiferolic acid A(III) ,abiesadine J (IV)，abietic acid(V)和isopimaric acid(VI)。 本发明所述萜类单体化合物结构如下所示： 4 CN 111544458 A 说 明 书 3/5 页 本发明采用体外抑制ACL活性模型考察了麦吊云杉枝叶醇提物及醇提物石油醚部 位、乙酸乙酯部分、正丁醇部分对ACL的抑制作用；并针对抑制活性最优的乙酸乙酯部分进 行分离纯化，得到具有新化学结构和已知化学结构的萜类化合物，经体外多次生物活性测 试研究表明，制得的植物粗提取物、有效部位及萜类化合物均具有抑制ACL的活性。 可进一步制备预防或治疗由ACL介导的糖脂代谢紊乱相关疾病，如高脂血症、动脉 粥样硬化、非酒精性脂肪肝、Ⅱ型糖尿病、肥胖或癌症的药物或保健品。 本发明的优点是： 从麦吊云杉枝叶提取的麦吊云杉粗提取物以及从中分离得到的两个新三萜化合 物(b r a c h y t y l i n F和b r a c h y t y l i n G)以及四个已知结构萜类化合物23 - hydroxyisomangiferolic acid A,abiesadine J,abietic acid及isopimaric acid均可 作为ACL抑制剂，对开发成为具有预防或治疗由ACL介导的糖脂代谢紊乱相关疾病，如高脂 血症、动脉粥样硬化、非酒精性脂肪肝、Ⅱ型糖尿病、肥胖或癌症的药物或保健品，具有广阔 的应用前景。 附图说明 图1为化合物23-hydroxyisomangiferolic acid A的1H NMR谱图。 图2为化合物abiesadine J的1H NMR谱图。 图3为化合物abietic acid的1H NMR谱图。 图4为化合物isopimaric acid的1H NMR谱图。
本发明涉及医药与保健品技术领域，涉及麦吊云杉提取物及其制备方法和在制药中的用途，本发明公开了麦吊云杉提取物包括粗提取物和单一成分的制备方法，以及作为腺苷三磷酸‑柠檬酸裂解酶[adenosine triphosphate(ATP)‑citrate lyase，ACL]抑制剂的药物用途。本发明从松 全部
背景技术：
现有技术公开了腺苷三磷酸-柠檬酸裂解酶[adenosine triphosphate(ATP)- citrate lyase，ACL]是肝脏脂肪合成通路上的由介导瘦素调节糖脂代谢平衡的关键效应 基因之一。ACL位于细胞质中，能将胞质内的柠檬酸催化转变成为乙酰辅酶A，进而产生脂肪 酸合成的前体分子-丙二酸单酰辅酶A，因此ACL是连接细胞内葡萄糖分解代谢与脂肪酸合 成通路的重要代谢酶，是糖代谢与产生脂肪酸之间的桥梁(Elshourbagy et al .，Eur J Biochem 1992,204:491-499)。研究表明，ACL异常升高在糖脂代谢紊乱中扮演重要角色， ACL表达的改变能使细胞糖、脂代谢发生异常，导致机体发生肥胖症、Ⅱ型糖尿病、高脂血 症、非酒精脂肪肝等代谢型疾病或癌症。 研究还表明代谢综合征(metabolic syndrome,MS)是以中心型肥胖、高血压、血脂 异常、代谢异常等多种代谢异常集簇为内涵，以胰岛素抵抗为共同病理生理基础的一组临 床症候群；近年来临床上MS的发病率呈增高趋势，严重侵害患者身心健康。 有关研究报道了II型糖尿病(non-insulin-dependent diabetes mellitus)和肥 胖症(obesity)是严重威胁人类身体健康的内分泌紊乱性代谢类疾病，常伴随着外周组织 细胞对胰岛素敏感性的降低(即胰岛素抵抗)，引起肌肉、肝脏及脂肪组织中的糖脂代谢平 衡失调；研究表明基因沉默或抑制ACL能降低葡萄糖诱导的胰岛素分泌，游离脂肪酸的升高 能抑制ACL活性从而导致胰腺细胞的应激和凋亡，脂肪酸和胆固醇合成离不开细胞质中的 乙酰辅酶A参与；因此，ACL可视为治疗糖尿病和肥胖症疾病的重要药物靶点(Guay et al., J Bio Chem 2007,282:35657-35665；Chu et al.,J Bio Chem 2010,285:32606–32615； Pearce et al.,Biochem J 1998,334:113–119)。 研究报道了高脂血症是由于全身脂肪代谢紊乱引起血浆中一种或几种脂质结构 失衡的疾病，主要是血中总胆固醇(totalcholesterol,TC)或甘油三酯(triglyceride,TG) 过高或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)过低；ACL抑制剂能明显降低血浆中胆固醇和甘油三酯 水平(Pearce et al.,Biochem J 1998,334,113-119)，因此，ACL可视为治疗高血脂症的重 要药物靶点。 研究报道了非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic Fatty Liver Disease，NAFLD) 是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病 理综合征，与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤，研究显示，在 非酒精性脂肪肝疾病中ACL是过度表达的，并导致甘油三酯和肝细胞脂肪变性(Wang et al.,Hepatology 2009,49:1166-1175)，因此，ACL也是治疗高血脂症的重要药物靶点。 寻找ACL的特异性抑制剂成为本领域技术人员的共识，通过抑制ACL的活性调节脂 肪细胞中脂肪酸和胆固醇合成，对代谢紊乱疾病，如II型糖尿病和肥胖症、高血脂症或非酒 3 CN 111544458 A 说 明 书 2/5 页 精性脂肪肝的预防和治疗有着重要的应用前景。 研究认为，恶性肿瘤的发生与异常脂类代谢有关，异常脂类代谢途径参与肿瘤细 胞的物质、能量合成、生长和耐药的信号转导等的过程；有研究发现ACL与数种肿瘤的恶性 进程相关，且在多种肿瘤细胞中活性是上调的，ACY抑制可使体内和体外的绝大多数肿瘤细 胞停止生长，因此，有关ACL的抑制剂可用于治疗或预防癌症或在癌症发展时用于减缓其进 展。 麦吊云杉(Picea brachytyla)隶属松科(Pinaceae)云杉属(Picea)植物，是一种 常绿乔木，成年后高达30余米，是我国特有的面临濒危灭绝的珍稀树种之一，于1992年10月 被列为国家珍稀树种第一批保护树种(Fu et al.,China Plant Red Data Book,Science Press:Beijing；New York,1992)，主要分布于我国秦岭、大巴山脉及四川北部，目前其化学 成分和药理活性尚未有任何报道。 基于现有技术的现状和基础，本申请的发明人拟进行保护性地采集少许麦吊云杉 植物样品研发其在制药中的新用途，具体的，本申请拟提供麦吊云杉提取物及其制备方法 和在制药中的用途，尤其是作为ACL抑制剂在制备治疗ATP-柠檬酸裂解酶介导疾病药物中 的用途。
技术实现要素：
本发明的目的在于基于现有技术的现状和基础，提供麦吊云杉提取物及其制备方 法和在制药中的用途，尤其是作为ACL抑制剂在制备治疗ATP-柠檬酸裂解酶介导疾病药物 中的用途。本发明提供了一种麦吊云杉提取物，包括有粗提取物和单成分，及其作为ACL抑 制剂的药物用途，可进一步用于制备治疗高血脂、心血管疾病及其他ACL介导的疾病的药物 或保健品中应用。 本发明的进一步目的是提供了所述麦吊云杉提取物包括粗提取物和萜类单体化 合物的制备方法。 本发明所述提取物由麦吊云杉枝叶经由本领域所涉常规的提取分离方法制备而 得，其中粗提取物步骤可用下述方法制得：取干燥的麦吊云杉枝叶粉碎机粉粹；用8倍量的 90％甲醇浸渍提取3次，每次24小时，得麦吊云杉提取液；麦吊云杉提取液用布氏漏斗抽滤， 合并滤液，减压浓缩成浸膏，得麦吊云杉醇提物；其中萜类单体化合物采用以下方法制得： 麦吊云杉粗提取物加适量水混悬后，先后用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别得石油醚 部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分，浓缩后真空干燥，分别得醇提物的石油醚部位、乙酸乙 酯部位和正丁醇部位；取上述乙酸乙酯部位，经反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱 及反相半制备高效液相色谱(semi-RP-HPLC)分离制备，分别得到单体化合物brachytylin F(I) ,brachytylin G(II) ,23-hydroxyisomangiferolic acid A(III) ,abiesadine J (IV)，abietic acid(V)和isopimaric acid(VI)。 本发明所述萜类单体化合物结构如下所示： 4 CN 111544458 A 说 明 书 3/5 页 本发明采用体外抑制ACL活性模型考察了麦吊云杉枝叶醇提物及醇提物石油醚部 位、乙酸乙酯部分、正丁醇部分对ACL的抑制作用；并针对抑制活性最优的乙酸乙酯部分进 行分离纯化，得到具有新化学结构和已知化学结构的萜类化合物，经体外多次生物活性测 试研究表明，制得的植物粗提取物、有效部位及萜类化合物均具有抑制ACL的活性。 可进一步制备预防或治疗由ACL介导的糖脂代谢紊乱相关疾病，如高脂血症、动脉 粥样硬化、非酒精性脂肪肝、Ⅱ型糖尿病、肥胖或癌症的药物或保健品。 本发明的优点是： 从麦吊云杉枝叶提取的麦吊云杉粗提取物以及从中分离得到的两个新三萜化合 物(b r a c h y t y l i n F和b r a c h y t y l i n G)以及四个已知结构萜类化合物23 - hydroxyisomangiferolic acid A,abiesadine J,abietic acid及isopimaric acid均可 作为ACL抑制剂，对开发成为具有预防或治疗由ACL介导的糖脂代谢紊乱相关疾病，如高脂 血症、动脉粥样硬化、非酒精性脂肪肝、Ⅱ型糖尿病、肥胖或癌症的药物或保健品，具有广阔 的应用前景。 附图说明 图1为化合物23-hydroxyisomangiferolic acid A的1H NMR谱图。 图2为化合物abiesadine J的1H NMR谱图。 图3为化合物abietic acid的1H NMR谱图。 图4为化合物isopimaric acid的1H NMR谱图。
