技术摘要：
公开了一种包含植物乳杆菌的组合物，用于预防和/或治疗哺乳动物的心理疾病、影响心理健康的症状和/或与慢性压力相关的病症。所述组合物可用于恢复、维持和/或促进心理(包括认知)健康，且特别是在膳食和食物补充剂和药物领域具有潜在应用。
背景技术：
心理健康与情绪、心理、身体和社会福祉有关。我们的心理健康状况决定了我们如 何处理压力。心理疾病可以定义为如下健康状况，所述健康状况改变了一个人的思维、感情 或行为(或所有这三者)，并导致其在社会、工作或家庭活动中的苦恼和功能性问题。心理疾 病包括与焦虑、情绪、精神病、饮食行为、冲动控制和成瘾、个性、社交能力、分离、强迫和创 伤后压力有关的大范围的障碍。每种疾病都以不同的方式改变一个人的思想、感情和/或行 为。帕金森病、癫痫和多发性硬化症等障碍都是脑部障碍，但它们被认为是神经系统疾病而 不是心理疾病。有趣的是，心理疾病和神经疾病(包括记忆障碍(如轻度认知损害、痴呆和阿 尔茨海默病))之间的界限并没有明确界定，并且现在越来越多的证据表明心理疾病与脑结 构、化学和功能的变化有关，而这些变化可能是神经障碍发展的基础。例如，神经认知缺陷 和情绪障碍之间的联系已被充分确定，使得在严重抑郁中，认知损害可以模仿在痴呆中观 察到的情况(Rabins等人Br J Psychiatry[英国精神病学杂志]1984；144:488-92)。 此外，未经治疗的慢性压力会导致严重的健康状况，如焦虑、肌肉疼痛、高血压和 免疫系统减弱。研究表明，压力会导致心脏病、抑郁和肥胖等重大疾病的发展。急性和慢性 压力症状可在胃肠道中表现出来，分别对胃肠道功能造成短期和长期影响。暴露于压力导 致肠-脑轴中的改变，最终导致一系列胃肠障碍的发展，包括炎症性肠病(IBD)、肠易激综合 征(IBS)和其他功能性胃肠道疾病、食物抗原相关的不良反应、消化性溃疡和胃食管反流病 (GERD)。压力对肠道生理的主要影响包括：1)胃肠动力改变；2)内脏感觉增加；3)胃肠道分 泌的变化；4)肠通透性增加；5)对胃肠粘膜再生能力和粘膜血流量的负面影响；和6)肠道微 生物组成的改变(Konturek等人J.Physiol Pharmacol.[生理与药理学]2011；62(6):591- 9)。 关于心理疾病和相关的神经认知功能减退和神经障碍，现在明确强调实现积极的 心理和认知健康的战略，以实现充实和健康的生活。对用以实现积极的心理健康而且没有 副作用的营养疗法的需求增加。目前治疗影响心理健康的心理疾病症状的药物有许多负面 的副作用，如恶心、食欲增加和体重增加、疲劳和胃肠道症状。膳食补充剂可能代表了一种 有吸引力的手段，以实现积极的心理健康和防止心理疾病的症状和相关病症的发展。 肠-脑轴描述了存在于脑和肠之间的双向交流，而微生物-肠-脑轴支持肠微生物 组在这种交流系统中的作用。如上文所述，影响心理健康的心理疾病和症状与胃肠障碍共 病，由此情绪和日常生活压力可扰乱消化功能，反之亦然。越来越多的证据表明，肠道微生 3 CN 111601608 A 说 明 书 2/31 页 物群对脑生理、心理反应和最终行为产生深远影响(Dinan等人J.Psychiatr Res.[精神病 学研究杂志]2015；63:1-9)。新出现的证据表明，益生菌可以影响中枢神经系统功能并且调 节情绪、心理症状(如焦虑和抑郁)，以及生理、行为和脑功能方面与压力有关的变化。 发明目的 本发明的目的是提供用于预防和/或治疗心理疾病、影响心理健康的症状和/或治 疗与慢性压力相关的病症的手段。因此，本发明的目的是提供一种手段，通过所述手段可以 促进、维持和/或恢复个体的心理健康。
技术实现要素：
本发明基于植物乳杆菌的新颖菌株，特别是基于本文所述的研究，这些研究令人 惊讶地证明，这些菌株可以显著抵消压力对行为(焦虑、抑郁和认知功能)、生化和功能结局 的影响。 因此，在一个方面，本发明提供了一种组合物，其包含于2018年1月9日以保藏号 DSM 32721保藏在DSMZ的植物乳杆菌菌株LP12151。 在另一方面，本发明提供了包含植物乳杆菌菌株LP12418的组合物，所述菌株于 2017年9月27日以保藏号DSM 32655保藏在DSMZ。 在另一方面，本发明提供了包含植物乳杆菌菌株LP12407的组合物，所述菌株于 2017年9月27日以保藏号DSM 32654保藏在DSMZ。 在又一方面，本发明提供一种组合物，其包含以下各项的组合：(a)至少两种选自 由以下组成的组的植物乳杆菌菌株：植物乳杆菌菌株LP12418、植物乳杆菌菌株LP12407和 植物乳杆菌菌株LP12151，和(b)于2017年10月5日以保藏号DSM 32661保藏在DSMZ的副干酪 乳杆菌(Lactobacillus paracasei)菌株Lpc-37。 在另一方面，本发明提供包含植物乳杆菌菌株LP12418、植物乳杆菌菌株LP12151 和/或植物乳杆菌菌株LP12407的组合物，用于预防和/或治疗哺乳动物中的心理疾病、影响 心理健康的症状和/或与慢性压力相关的病症。 另一方面，本发明提供一种治疗和/或预防心理疾病、影响心理疾病的症状和/或 与慢性压力相关的病症的方法，其中所述方法包括向有需要的哺乳动物施用组合物，所述 组合物包含： a.于2018年1月9日以保藏号DSM 32721保藏在DSMZ的植物乳杆菌菌株LP12151 b.于2017年9月27日以保藏号DSM 32655保藏在DSMZ的植物乳杆菌菌株LP12418； 和/或 c.于2017年9月27日以保藏号DSM 32654保藏在DSMZ的植物乳杆菌菌株LP12407。 在又另一方面，本发明提供包含植物乳杆菌菌株LP12151、植物乳杆菌菌株 LP12418和/或植物乳杆菌菌株LP12407的组合物在制备用于预防和/或治疗哺乳动物中的 心理疾病、影响心理健康的症状和/或与慢性压力相关的病症的药物中的用途。 在又一方面，本发明提供了植物乳杆菌菌株LP12418、和/或植物乳杆菌菌株 LP12407和/或植物乳杆菌菌株LP12151的组合，用于分开地、顺序地或同时地用于预防和/ 或治疗哺乳动物中的心理疾病、影响心理健康的症状和/或与慢性压力相关的病症。 4 CN 111601608 A 说 明 书 3/31 页 附图说明 图1.细菌对肠粘液粘附的测定。从结直肠癌患者中收集肠结肠粘液样品，并在体 外细菌粘附测定中鉴定十种不同益生细菌对人肠粘液的粘附。如下测定粘附％(A)：(粘附 后荧光-空白)/(最大荧光-空白)*100。HEPES-汉克缓冲液(HEPES-Hank’s buffer)作为空 白。如下测定粘附比(B)：与粘液的粘附/与BSA的粘附。值大于1(虚线)表示与粘液的亲和力 高于BSA，这表明粘液特异性结合能力。数据显示为来自五个单独粘液样品的数据的平均值 /-SD。 图2.在单独使用媒剂或使用选择的细菌菌株处理的组中，3周慢性压力对小鼠体 重的影响。所有组N＝12，但压力/媒剂组(其中N＝11)和压力/LP12418组(其中N＝11)除外。 统计分析：双因素ANOVA；体重(时间)：F(12 ,636)＝30.38，p<0.0001；体重(治疗)：F(4 ,636)＝ 6.54，p<0.0001 图3.在高架十字迷宫程序中，用选择的细菌菌株治疗对小鼠慢性压力诱导性焦虑 的影响。测量了三个参数；开放臂中的时间(A)、自主活动(B)和开放臂进入(C)。所有组N＝ 12，但压力/媒剂组(其中N＝11)和压力/LP12418组(其中N＝11)除外。统计分析：单因素 ANOVA；开放臂中的时间：F(4,57)＝10.68，p<0.0001；自主活动：F(4,57)＝1.057，p>0.05；开放 臂进入：F(4,57)＝1.074，p>0.05；成对比较:*p<0.05，***p<0.001相比于无压力/媒剂组，#p< 0.05，#p<0.01相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 图4.在旷场程序中，用选择的细菌菌株治疗对小鼠慢性压力诱导性焦虑的影响。 测量了三个参数；自主活动(A)，在区域中心的运动探索(B)和后腿直立/理毛行为(刻板行 为C)。对于刻板行为，数据被表示为任意单位(A.U.)，相应于在10分钟的旷场程序中后腿直 立行为的数量加上理毛行为的数量。所有组N＝12，但压力/媒剂组(其中N＝11)和压力/ LP12418组(其中N＝11)除外。统计分析：单因素ANOVA；自主活动：F(4,57)＝0.4278，p>0.05； 在中心的运动探索：F(4 ,57)＝58.20，p<0.0001；刻板行为：F(4 ,57)＝0.3330，p>0.05；成对比 较:***p<0.001相比于无压力/媒剂组，###p<0.001相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 图5.选择的细菌菌株治疗对慢性压力诱导的小鼠识别记忆缺陷的影响。测量的参 数包括对象交互频率(A，C)和对象交互时间(B，D)，针对同一对象识别(A，B)和新对象识别 (C，D)。所有组N＝12，但压力/媒剂组(其中N＝11)和压力/LP12418组(其中N＝11)除外。统 计分析：单因素ANOVA；第2天同一对象频率：F(4,57)＝0.1884，p>0.05；第2天同一对象时间： F(4 ,57)＝1.627，p>0.05；第3天新对象频率：F(4 ,56)＝4.715，p＝0.0025；第3天新对象时间： F(4,56)＝6.839，p＝0.0002；成对比较:*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001相比于无压力/媒剂 组(邓尼特检验) 图6.用选定的细菌菌株治疗对小鼠慢性压力诱导的行为绝望的影响，如在强迫游 泳试验中测量。测量了三个参数；游泳时间(A)，挣扎时间(B)和静止时间(C)。所有组N＝12， 但压力/媒剂组(其中N＝11)和压力/LP12418组(其中N＝11)除外。统计分析：单因素ANOVA； 游泳时间：F(4,57)＝7.596，p<0.0001；挣扎时间：F(4,57)＝0.8225，p>0.05；静止时间：F(4,57)＝ 28.10，p<0.0001；成对比较:**p<0.01，***p<0.001相比于无压力/媒剂组，##p<0.01，###p< 0.001相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 图7.慢性压力和用选择的细菌菌株治疗对血浆皮质酮浓度的影响。所有组N＝12， 但压力/媒剂组(其中N＝11)和压力/LP12418组(其中N＝11)除外。统计分析：单因素ANOVA； 5 CN 111601608 A 说 明 书 4/31 页 皮质酮浓度：F(4 ,57)＝6.618，p＝0.0002。成对比较**p<0.01相比于无压力/媒剂组，###p< 0.001相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 图8.在单独使用媒剂或选择的细菌菌株处理的组中，3周慢性压力对小鼠体重的 影响。对于所有组N＝10-18。统计分析：双因素ANOVA；体重(时间)：F(9 ,643)＝17 .46，p< 0.0001；体重(治疗)：F(4,643)＝74.39，p<0.0001 图9.用选择的菌株治疗对小鼠慢性压力诱导的焦虑的影响。对于所有组N＝10- 18。统计分析：单因素ANOVA；开放臂中的时间(A)：F(4,67)＝78.92，p<0.0001；自主活动(B)： F(4,67)＝0.3718，p>0.05；开放臂进入(C)：F(4,67)＝1.19，p>0.05；封闭臂中的时间(D)：F(4,67) ＝10 .85，p<0 .0001；封闭臂进入(E)：F(4 ,67)＝1.19，p>0 .05；成对比较:*p<0 .05，**p< 0.01，***p<0.0001相比于无压力/媒剂组，#p<0.05，###p<0.0001相比于慢性压力/媒剂组 (邓尼特检验) 图10.在旷场程序中，用选择的细菌菌株治疗对小鼠慢性压力诱导性焦虑的影响。 测量了五个参数；自主活动(A)，在活动场所中心的运动探索(B)，后腿直立/理毛行为(刻板 行为C)，在内区花费的时间(s)(D)和在外区花费的时间(s)(E)。对于刻板行为，数据被表示 为任意单位(A.U.)，相应于在10分钟的旷场程序中后腿直立行为的数量加上理毛行为的数 量。对于所有组N＝10-18。统计分析：单因素ANOVA；自主活动：F(4,67)＝0.4977，p>0.05；在中 心的运动探索：F(4,67)＝21.5，p<0.0001；刻板行为：F(4.67)＝0.2328，p>0.05；在内区花费的 时间：F(4 .67)＝16 .42，p<0 .0001；在外区花费的时间：F(4 .67)＝16.42，p<0 .0001；成对比 较:***p<0.001相比于无压力/媒剂组，###p<0.001相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 图11.选择的细菌菌株治疗对慢性压力诱导的小鼠识别记忆缺陷的影响。测量的 参数包括对象交互频率(A，B)和对象交互时间(D，E)，针对同一对象识别(A，D)和新对象识 别(B，E)。对新对象的辨别指数(DI)为小鼠在新对象和熟悉对象之间所花费的交互频率(C) 和交互时间(F)的差除以探索这两个对象的总频率和总时间。“辨别指数，DI＝(新对象探索 频率/时间-熟悉对象探索频率/时间)/(新对象探索频率/时间 熟悉对象探索频率/时 间)”。对于所有组N＝10-18。统计分析：单因素ANOVA；第2天同一对象频率：F(4,59)＝1.54，p> 0.05；第2天同一对象时间：F(4 ,59)＝0.5006，p>0.05；第3天新对象频率：F(4 ,59)＝14.18，p< 0 .001；第3天新对象时间：F(4 ,59)＝15 .02，p<0 .001；辨别指数频率：F(4 ,59)＝14 .18，p< 0.0001，辨别指数时间：F(4,59)＝15.02，p<0.0001；成对比较:***p<0.001相比于无压力/媒 剂组，###p<0.001相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 图12.用选定的细菌菌株治疗对小鼠慢性压力诱导的行为绝望的影响，如在强迫 游泳试验中测量。测量了三个参数；静止时间(A)，游泳时间(B)和挣扎时间(C)。对于所有组 N＝10-18。统计分析：单因素ANOVA；静止时间：F(4,59)＝26.82，p<0.0001；游泳时间：F(4,59)＝ 15.97，p<0.0001；挣扎时间：F(4 ,59)＝0.7128，p>0.05；成对比较:***p<0.0001相比于无压 力/媒剂组，###p<0.0001相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 图13 .慢性压力和用选择的菌株治疗对血浆皮质酮(A)和促肾上腺皮质激素 (ACTH)浓度(B)和海马脑源性神经营养因子(BDNF)浓度(C)的影响。对于所有组N＝8-18。统 计分析：单因素ANOVA；皮质酮浓度：F(4 ,67)＝7.592，p<0.001；ACTH浓度：F(4 ,67)＝5.75，p< 0.001；BDNF浓度：F(4,67)＝1.23，p>0.05；成对比较:*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001相比于 无压力/媒剂组，##p<0.01相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 6 CN 111601608 A 说 明 书 5/31 页 图14：用选择的细菌菌株治疗对慢性压力诱导的皮层GABAAα2(A)和GABAB1β(B)受体 基因表达倍数变化的影响。对于所有组N＝6。采用2-DDCT法进行差异表达分析。因样品数少 而选择非参数检验，经夏皮罗-威尔克(Shapiro wilk)正态性检验显示p值<0.05。*p<0.05 相比于无压力/媒剂组，#p<0 .05相比于慢性压力/媒剂组(克鲁斯卡尔-沃利斯(Kruskal Wallis)检验和奈米易(Nemenyi)事后检验)
公开了一种包含植物乳杆菌的组合物，用于预防和/或治疗哺乳动物的心理疾病、影响心理健康的症状和/或与慢性压力相关的病症。所述组合物可用于恢复、维持和/或促进心理(包括认知)健康，且特别是在膳食和食物补充剂和药物领域具有潜在应用。
背景技术：
心理健康与情绪、心理、身体和社会福祉有关。我们的心理健康状况决定了我们如 何处理压力。心理疾病可以定义为如下健康状况，所述健康状况改变了一个人的思维、感情 或行为(或所有这三者)，并导致其在社会、工作或家庭活动中的苦恼和功能性问题。心理疾 病包括与焦虑、情绪、精神病、饮食行为、冲动控制和成瘾、个性、社交能力、分离、强迫和创 伤后压力有关的大范围的障碍。每种疾病都以不同的方式改变一个人的思想、感情和/或行 为。帕金森病、癫痫和多发性硬化症等障碍都是脑部障碍，但它们被认为是神经系统疾病而 不是心理疾病。有趣的是，心理疾病和神经疾病(包括记忆障碍(如轻度认知损害、痴呆和阿 尔茨海默病))之间的界限并没有明确界定，并且现在越来越多的证据表明心理疾病与脑结 构、化学和功能的变化有关，而这些变化可能是神经障碍发展的基础。例如，神经认知缺陷 和情绪障碍之间的联系已被充分确定，使得在严重抑郁中，认知损害可以模仿在痴呆中观 察到的情况(Rabins等人Br J Psychiatry[英国精神病学杂志]1984；144:488-92)。 此外，未经治疗的慢性压力会导致严重的健康状况，如焦虑、肌肉疼痛、高血压和 免疫系统减弱。研究表明，压力会导致心脏病、抑郁和肥胖等重大疾病的发展。急性和慢性 压力症状可在胃肠道中表现出来，分别对胃肠道功能造成短期和长期影响。暴露于压力导 致肠-脑轴中的改变，最终导致一系列胃肠障碍的发展，包括炎症性肠病(IBD)、肠易激综合 征(IBS)和其他功能性胃肠道疾病、食物抗原相关的不良反应、消化性溃疡和胃食管反流病 (GERD)。压力对肠道生理的主要影响包括：1)胃肠动力改变；2)内脏感觉增加；3)胃肠道分 泌的变化；4)肠通透性增加；5)对胃肠粘膜再生能力和粘膜血流量的负面影响；和6)肠道微 生物组成的改变(Konturek等人J.Physiol Pharmacol.[生理与药理学]2011；62(6):591- 9)。 关于心理疾病和相关的神经认知功能减退和神经障碍，现在明确强调实现积极的 心理和认知健康的战略，以实现充实和健康的生活。对用以实现积极的心理健康而且没有 副作用的营养疗法的需求增加。目前治疗影响心理健康的心理疾病症状的药物有许多负面 的副作用，如恶心、食欲增加和体重增加、疲劳和胃肠道症状。膳食补充剂可能代表了一种 有吸引力的手段，以实现积极的心理健康和防止心理疾病的症状和相关病症的发展。 肠-脑轴描述了存在于脑和肠之间的双向交流，而微生物-肠-脑轴支持肠微生物 组在这种交流系统中的作用。如上文所述，影响心理健康的心理疾病和症状与胃肠障碍共 病，由此情绪和日常生活压力可扰乱消化功能，反之亦然。越来越多的证据表明，肠道微生 3 CN 111601608 A 说 明 书 2/31 页 物群对脑生理、心理反应和最终行为产生深远影响(Dinan等人J.Psychiatr Res.[精神病 学研究杂志]2015；63:1-9)。新出现的证据表明，益生菌可以影响中枢神经系统功能并且调 节情绪、心理症状(如焦虑和抑郁)，以及生理、行为和脑功能方面与压力有关的变化。 发明目的 本发明的目的是提供用于预防和/或治疗心理疾病、影响心理健康的症状和/或治 疗与慢性压力相关的病症的手段。因此，本发明的目的是提供一种手段，通过所述手段可以 促进、维持和/或恢复个体的心理健康。
技术实现要素：
本发明基于植物乳杆菌的新颖菌株，特别是基于本文所述的研究，这些研究令人 惊讶地证明，这些菌株可以显著抵消压力对行为(焦虑、抑郁和认知功能)、生化和功能结局 的影响。 因此，在一个方面，本发明提供了一种组合物，其包含于2018年1月9日以保藏号 DSM 32721保藏在DSMZ的植物乳杆菌菌株LP12151。 在另一方面，本发明提供了包含植物乳杆菌菌株LP12418的组合物，所述菌株于 2017年9月27日以保藏号DSM 32655保藏在DSMZ。 在另一方面，本发明提供了包含植物乳杆菌菌株LP12407的组合物，所述菌株于 2017年9月27日以保藏号DSM 32654保藏在DSMZ。 在又一方面，本发明提供一种组合物，其包含以下各项的组合：(a)至少两种选自 由以下组成的组的植物乳杆菌菌株：植物乳杆菌菌株LP12418、植物乳杆菌菌株LP12407和 植物乳杆菌菌株LP12151，和(b)于2017年10月5日以保藏号DSM 32661保藏在DSMZ的副干酪 乳杆菌(Lactobacillus paracasei)菌株Lpc-37。 在另一方面，本发明提供包含植物乳杆菌菌株LP12418、植物乳杆菌菌株LP12151 和/或植物乳杆菌菌株LP12407的组合物，用于预防和/或治疗哺乳动物中的心理疾病、影响 心理健康的症状和/或与慢性压力相关的病症。 另一方面，本发明提供一种治疗和/或预防心理疾病、影响心理疾病的症状和/或 与慢性压力相关的病症的方法，其中所述方法包括向有需要的哺乳动物施用组合物，所述 组合物包含： a.于2018年1月9日以保藏号DSM 32721保藏在DSMZ的植物乳杆菌菌株LP12151 b.于2017年9月27日以保藏号DSM 32655保藏在DSMZ的植物乳杆菌菌株LP12418； 和/或 c.于2017年9月27日以保藏号DSM 32654保藏在DSMZ的植物乳杆菌菌株LP12407。 在又另一方面，本发明提供包含植物乳杆菌菌株LP12151、植物乳杆菌菌株 LP12418和/或植物乳杆菌菌株LP12407的组合物在制备用于预防和/或治疗哺乳动物中的 心理疾病、影响心理健康的症状和/或与慢性压力相关的病症的药物中的用途。 在又一方面，本发明提供了植物乳杆菌菌株LP12418、和/或植物乳杆菌菌株 LP12407和/或植物乳杆菌菌株LP12151的组合，用于分开地、顺序地或同时地用于预防和/ 或治疗哺乳动物中的心理疾病、影响心理健康的症状和/或与慢性压力相关的病症。 4 CN 111601608 A 说 明 书 3/31 页 附图说明 图1.细菌对肠粘液粘附的测定。从结直肠癌患者中收集肠结肠粘液样品，并在体 外细菌粘附测定中鉴定十种不同益生细菌对人肠粘液的粘附。如下测定粘附％(A)：(粘附 后荧光-空白)/(最大荧光-空白)*100。HEPES-汉克缓冲液(HEPES-Hank’s buffer)作为空 白。如下测定粘附比(B)：与粘液的粘附/与BSA的粘附。值大于1(虚线)表示与粘液的亲和力 高于BSA，这表明粘液特异性结合能力。数据显示为来自五个单独粘液样品的数据的平均值 /-SD。 图2.在单独使用媒剂或使用选择的细菌菌株处理的组中，3周慢性压力对小鼠体 重的影响。所有组N＝12，但压力/媒剂组(其中N＝11)和压力/LP12418组(其中N＝11)除外。 统计分析：双因素ANOVA；体重(时间)：F(12 ,636)＝30.38，p<0.0001；体重(治疗)：F(4 ,636)＝ 6.54，p<0.0001 图3.在高架十字迷宫程序中，用选择的细菌菌株治疗对小鼠慢性压力诱导性焦虑 的影响。测量了三个参数；开放臂中的时间(A)、自主活动(B)和开放臂进入(C)。所有组N＝ 12，但压力/媒剂组(其中N＝11)和压力/LP12418组(其中N＝11)除外。统计分析：单因素 ANOVA；开放臂中的时间：F(4,57)＝10.68，p<0.0001；自主活动：F(4,57)＝1.057，p>0.05；开放 臂进入：F(4,57)＝1.074，p>0.05；成对比较:*p<0.05，***p<0.001相比于无压力/媒剂组，#p< 0.05，#p<0.01相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 图4.在旷场程序中，用选择的细菌菌株治疗对小鼠慢性压力诱导性焦虑的影响。 测量了三个参数；自主活动(A)，在区域中心的运动探索(B)和后腿直立/理毛行为(刻板行 为C)。对于刻板行为，数据被表示为任意单位(A.U.)，相应于在10分钟的旷场程序中后腿直 立行为的数量加上理毛行为的数量。所有组N＝12，但压力/媒剂组(其中N＝11)和压力/ LP12418组(其中N＝11)除外。统计分析：单因素ANOVA；自主活动：F(4,57)＝0.4278，p>0.05； 在中心的运动探索：F(4 ,57)＝58.20，p<0.0001；刻板行为：F(4 ,57)＝0.3330，p>0.05；成对比 较:***p<0.001相比于无压力/媒剂组，###p<0.001相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 图5.选择的细菌菌株治疗对慢性压力诱导的小鼠识别记忆缺陷的影响。测量的参 数包括对象交互频率(A，C)和对象交互时间(B，D)，针对同一对象识别(A，B)和新对象识别 (C，D)。所有组N＝12，但压力/媒剂组(其中N＝11)和压力/LP12418组(其中N＝11)除外。统 计分析：单因素ANOVA；第2天同一对象频率：F(4,57)＝0.1884，p>0.05；第2天同一对象时间： F(4 ,57)＝1.627，p>0.05；第3天新对象频率：F(4 ,56)＝4.715，p＝0.0025；第3天新对象时间： F(4,56)＝6.839，p＝0.0002；成对比较:*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001相比于无压力/媒剂 组(邓尼特检验) 图6.用选定的细菌菌株治疗对小鼠慢性压力诱导的行为绝望的影响，如在强迫游 泳试验中测量。测量了三个参数；游泳时间(A)，挣扎时间(B)和静止时间(C)。所有组N＝12， 但压力/媒剂组(其中N＝11)和压力/LP12418组(其中N＝11)除外。统计分析：单因素ANOVA； 游泳时间：F(4,57)＝7.596，p<0.0001；挣扎时间：F(4,57)＝0.8225，p>0.05；静止时间：F(4,57)＝ 28.10，p<0.0001；成对比较:**p<0.01，***p<0.001相比于无压力/媒剂组，##p<0.01，###p< 0.001相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 图7.慢性压力和用选择的细菌菌株治疗对血浆皮质酮浓度的影响。所有组N＝12， 但压力/媒剂组(其中N＝11)和压力/LP12418组(其中N＝11)除外。统计分析：单因素ANOVA； 5 CN 111601608 A 说 明 书 4/31 页 皮质酮浓度：F(4 ,57)＝6.618，p＝0.0002。成对比较**p<0.01相比于无压力/媒剂组，###p< 0.001相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 图8.在单独使用媒剂或选择的细菌菌株处理的组中，3周慢性压力对小鼠体重的 影响。对于所有组N＝10-18。统计分析：双因素ANOVA；体重(时间)：F(9 ,643)＝17 .46，p< 0.0001；体重(治疗)：F(4,643)＝74.39，p<0.0001 图9.用选择的菌株治疗对小鼠慢性压力诱导的焦虑的影响。对于所有组N＝10- 18。统计分析：单因素ANOVA；开放臂中的时间(A)：F(4,67)＝78.92，p<0.0001；自主活动(B)： F(4,67)＝0.3718，p>0.05；开放臂进入(C)：F(4,67)＝1.19，p>0.05；封闭臂中的时间(D)：F(4,67) ＝10 .85，p<0 .0001；封闭臂进入(E)：F(4 ,67)＝1.19，p>0 .05；成对比较:*p<0 .05，**p< 0.01，***p<0.0001相比于无压力/媒剂组，#p<0.05，###p<0.0001相比于慢性压力/媒剂组 (邓尼特检验) 图10.在旷场程序中，用选择的细菌菌株治疗对小鼠慢性压力诱导性焦虑的影响。 测量了五个参数；自主活动(A)，在活动场所中心的运动探索(B)，后腿直立/理毛行为(刻板 行为C)，在内区花费的时间(s)(D)和在外区花费的时间(s)(E)。对于刻板行为，数据被表示 为任意单位(A.U.)，相应于在10分钟的旷场程序中后腿直立行为的数量加上理毛行为的数 量。对于所有组N＝10-18。统计分析：单因素ANOVA；自主活动：F(4,67)＝0.4977，p>0.05；在中 心的运动探索：F(4,67)＝21.5，p<0.0001；刻板行为：F(4.67)＝0.2328，p>0.05；在内区花费的 时间：F(4 .67)＝16 .42，p<0 .0001；在外区花费的时间：F(4 .67)＝16.42，p<0 .0001；成对比 较:***p<0.001相比于无压力/媒剂组，###p<0.001相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 图11.选择的细菌菌株治疗对慢性压力诱导的小鼠识别记忆缺陷的影响。测量的 参数包括对象交互频率(A，B)和对象交互时间(D，E)，针对同一对象识别(A，D)和新对象识 别(B，E)。对新对象的辨别指数(DI)为小鼠在新对象和熟悉对象之间所花费的交互频率(C) 和交互时间(F)的差除以探索这两个对象的总频率和总时间。“辨别指数，DI＝(新对象探索 频率/时间-熟悉对象探索频率/时间)/(新对象探索频率/时间 熟悉对象探索频率/时 间)”。对于所有组N＝10-18。统计分析：单因素ANOVA；第2天同一对象频率：F(4,59)＝1.54，p> 0.05；第2天同一对象时间：F(4 ,59)＝0.5006，p>0.05；第3天新对象频率：F(4 ,59)＝14.18，p< 0 .001；第3天新对象时间：F(4 ,59)＝15 .02，p<0 .001；辨别指数频率：F(4 ,59)＝14 .18，p< 0.0001，辨别指数时间：F(4,59)＝15.02，p<0.0001；成对比较:***p<0.001相比于无压力/媒 剂组，###p<0.001相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 图12.用选定的细菌菌株治疗对小鼠慢性压力诱导的行为绝望的影响，如在强迫 游泳试验中测量。测量了三个参数；静止时间(A)，游泳时间(B)和挣扎时间(C)。对于所有组 N＝10-18。统计分析：单因素ANOVA；静止时间：F(4,59)＝26.82，p<0.0001；游泳时间：F(4,59)＝ 15.97，p<0.0001；挣扎时间：F(4 ,59)＝0.7128，p>0.05；成对比较:***p<0.0001相比于无压 力/媒剂组，###p<0.0001相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 图13 .慢性压力和用选择的菌株治疗对血浆皮质酮(A)和促肾上腺皮质激素 (ACTH)浓度(B)和海马脑源性神经营养因子(BDNF)浓度(C)的影响。对于所有组N＝8-18。统 计分析：单因素ANOVA；皮质酮浓度：F(4 ,67)＝7.592，p<0.001；ACTH浓度：F(4 ,67)＝5.75，p< 0.001；BDNF浓度：F(4,67)＝1.23，p>0.05；成对比较:*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001相比于 无压力/媒剂组，##p<0.01相比于慢性压力/媒剂组(邓尼特检验) 6 CN 111601608 A 说 明 书 5/31 页 图14：用选择的细菌菌株治疗对慢性压力诱导的皮层GABAAα2(A)和GABAB1β(B)受体 基因表达倍数变化的影响。对于所有组N＝6。采用2-DDCT法进行差异表达分析。因样品数少 而选择非参数检验，经夏皮罗-威尔克(Shapiro wilk)正态性检验显示p值<0.05。*p<0.05 相比于无压力/媒剂组，#p<0 .05相比于慢性压力/媒剂组(克鲁斯卡尔-沃利斯(Kruskal Wallis)检验和奈米易(Nemenyi)事后检验)
