技术摘要：
本发明属于生物医药领域，发现了黑老虎提取物具有抑制α‑葡萄糖苷酶性和酪氨酸酶活性，博落回提取物具有抑制α‑葡萄糖苷酶活性的作用，特别是提供了上述两种物质在制备美白和降血糖的药物方面的应用。
背景技术：
糖尿病(Diabetes mellitus，DM)是一种因为胰岛素不能满足人体正常需求或者 机体对胰岛素的作用产生抵抗而引起的疾病，属于常见的内分泌疾病。糖尿病是一种多病 因的代谢性疾病，其特点是慢性高血糖、糖、脂肪、蛋白质代谢紊乱等。主要的特征是血糖升 高。糖尿病患者在全球范围内高达4.63亿，其中2型糖尿病约占90％，仅中国约有1.16亿，占 总人口的11.6％。糖尿药物有多种治疗机制，其中延缓肠道吸收葡萄糖是主要的治疗机制 之一，以阿卡波糖(Acarbose)和伏格列波糖(Voglibose)等α-葡萄糖苷酶抑制剂为主。α-葡 萄糖苷酶能与4-对硝基甲苯-α-吡喃葡萄糖苷(PNPG)反应生成硝基苯，在碱性条件下显黄 色，在405nm左右有最大吸收，在一定浓度范围内，最终反应物的OD值与α-葡萄糖苷酶的活 性呈正相关。α-葡萄糖苷酶能够将聚合度较低的糖分解成为葡萄糖，通过抑制其活力可以 使糖尿病患者的血糖上升得到减缓，从而使血糖平稳，从而达到降血糖的目的。 酪氨酸是酪氨酸酶单酚酶的功能催化底物，是最终形成棕色黑色素和优黑素的主 要原料。酪氨酸酶与黑色素的产生有着密不可分的关系。在黑色素形成的整个过程中，其中 最为主的一类要限速酶就是酪氨酸酶。黑色素形成数量的多少由酪氨酸酶的活性决定着。 而酪氨酸是酪氨酸酶的功能催化底物，是最终形成棕色黑色素和优黑素的主要原料。酪氨 酸酶与酪氨酸反应后的产物在475m有最大吸收，通过紫外仪检测可测出两者产物在475m的 吸光度。目前的化妆品市场上，大部分的美白产品都是以酪氨酸酶活性抑制剂为主要成分 的，并且随着研究的发展，每年都在以较快的速度接连不断发现新的该类化合物。 天然药物具有安全性高的特点，因此从天然药物中寻找抑制α-葡萄糖苷酶和酪氨 酸酶活性的成分是相关医药化学领域的研究热点。到目前为止，有关于天然α-葡萄糖苷酶 活性抑制剂和酪氨酸酶活性抑制剂的文献报道甚少，多种具有降血糖和美白功能的中药材 亟待开发研究。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，我们进一步研究发现，黑老虎提取物具有抑制α-葡萄糖苷 酶活性和酪氨酸酶活性、博落回提取物具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用，为降血糖药品 及保健品或者美白护肤品的开发提供了新的依据。 本发明的技术方案之一： 本发明提供了黑老虎提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。 优选方案，所述黑老虎提取物在制备降糖药物中的应用。 优选方案，所述黑老虎提取物为黑老虎的醇提物和/或黑老虎的水提物，固液比为 3 CN 111603518 A 说 明 书 2/11 页 1：50-200，进一步优选的固液比为1：100。 进一步优选方案，所述黑老虎提取物中黑老虎叶提取物的效果最好，优选黑老虎 叶提取物在制备降糖药物中的应用。 本发明的技术方案之二： 本发明提供了黑老虎叶提取物在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用。 优选方案，所述黑老虎叶提取物在制备美白药药物中的应用。 优选方案，所述黑老虎叶提取物为黑老虎叶的醇提物和/或黑老虎叶的水提物，固 液比为1：50-200，进一步优选的固液比为1：100。 本发明所述黑老虎提取物可以为市售的现有产品。进一步优选方案，所述黑老虎 醇提物醇提方法为：将药材粉碎，过80-100目筛，于40℃-50℃烘干至恒重，用石油醚在35 ℃-45℃下回流30-40min，脱去原料中的脂，回收石油醚，得各样品粉末，称取样品粉末 1.0000g，加入100mL-200mL 75％-95％乙醇回流提取1-2h，取适量提取液离心，上层的清液 即是样品醇提物； 进一步优选方案，所述黑老虎水提物的水提方法为：将药材粉碎，过80-100目筛， 于40℃-50℃烘干至恒重，用石油醚在35℃-45℃下回流30-40min，脱去原料中的脂，回收石 油醚，得各样品粉末，精准称取样品粉末1.0000g，加入100mL-200mL蒸馏水回流提取1h-2h， 取适量提取液离心，上层的清液即是样品水提物。 本发明的技术方案之三： 本发明提供了博落回提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。 优选方案，所述博落回提取物在制备降糖药物中的应用。 优选方案，所述博落回提取物为博落回醇提物和/或博落回水提物，固液比为1： 50-200，进一步优选的固液比为1：100。 本发明所述博落回提取物可以为市售的现有产品。进一步优选方案，所述博落回 醇提物醇的提取方法为：将药材粉碎，过80-100目筛，于40℃-50℃烘干至恒重，用石油醚在 35℃-45℃下回流30-40min，脱去原料中的脂，回收石油醚，得各样品粉末，称取样品粉末 1.0000g，加入100mL-200mL 75％-95％乙醇回流提取1-2h，取适量提取液离心，上层的清液 即是样品醇提物； 进一步优选方案，所述博落回水提物的提取方法为：将药材粉碎，过80-100目筛， 于40℃-50℃烘干至恒重，用石油醚在35℃-45℃下回流30-40min，脱去原料中的脂，回收石 油醚，得各样品粉末，精准称取样品粉末1.0000g，加入100mL-200mL蒸馏水回流提取1h-2h， 取适量提取液离心，上层的清液即是样品水提物。 进一步解释和说明： 本发明所述酪氨酸酶和α-葡萄糖苷酶用PBS溶液配制。 本发明所述提取物以浓度计，酪氨酸酶溶液为0.2-0.8mg/mL；以活力计，所述α-葡 萄糖苷酶溶液为0.5-5U/mL。优选方案，所述酪氨酸酶溶液为0.4mg/mL，所述α-葡萄糖苷酶 为1U/mL。 本发明所述提取物，以体积计，醇和/或水提物与酪氨酸酶和α-葡萄糖苷酶溶液的 混合比为1：0.5-5。优选方案，以体积计，醇和/或水提物与酪氨酸酶和α-葡萄糖苷酶溶液的 混合比为1：1。 4 CN 111603518 A 说 明 书 3/11 页 与现有技术相比，本发明的有益效果： 通过做药材的醇提液和水提液对α-葡萄糖苷酶活性抑制实验，得知在固液比为1: 100的前提下，黑老虎叶的水提液和果皮的醇提液以及博落回水溶液和醇溶液均对α-葡萄 糖苷酶有较高的抑制率，其中黑老虎叶的水提液的抑制率为75.51％，果皮的醇提液的抑制 率为64.90％，对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用最为显著，说明其可能具有良好的降血糖活 性。本发明为新降血糖药物的开发提供了方向依据，为天然α-葡萄糖苷酶抑制剂的开发研 究数据基础。 通过实验，对抑制酪氨酸酶活性实验的方法进行了优化，得出酪氨酸酶活性抑制 实验的最佳反应条件为温度37℃，反应时长1h，酪氨酸酶浓度为0.04mg/ml，酪氨酸浓度为 0.4mg/ml。在此条件下对不同天然成分对酪氨酸酶抑制效果进行实验，结果发现：黑老虎果 皮的醇提液对酪氨酸酶有较高的抑制率，提示有进一步研究开发的意义。本发明为天然美 白护肤品的开发提供了方向依据，为天然酪氨酸酶抑制剂的开发研究提供了数据基础。 附图说明 图1是Lineweave-Burkf双倒数图； 图2是斜率对阿卡波糖浓度的二次倒数图； 图3是酪氨酸酶不同反应时长的吸光度曲线； 图4是酪氨酸酶动力学线性方程； 图5是黑老虎叶液相色谱-质谱分析图； 图6是LC-MS鉴定黑老虎叶部分化学成分结构式。
本发明属于生物医药领域，发现了黑老虎提取物具有抑制α‑葡萄糖苷酶性和酪氨酸酶活性，博落回提取物具有抑制α‑葡萄糖苷酶活性的作用，特别是提供了上述两种物质在制备美白和降血糖的药物方面的应用。
背景技术：
糖尿病(Diabetes mellitus，DM)是一种因为胰岛素不能满足人体正常需求或者 机体对胰岛素的作用产生抵抗而引起的疾病，属于常见的内分泌疾病。糖尿病是一种多病 因的代谢性疾病，其特点是慢性高血糖、糖、脂肪、蛋白质代谢紊乱等。主要的特征是血糖升 高。糖尿病患者在全球范围内高达4.63亿，其中2型糖尿病约占90％，仅中国约有1.16亿，占 总人口的11.6％。糖尿药物有多种治疗机制，其中延缓肠道吸收葡萄糖是主要的治疗机制 之一，以阿卡波糖(Acarbose)和伏格列波糖(Voglibose)等α-葡萄糖苷酶抑制剂为主。α-葡 萄糖苷酶能与4-对硝基甲苯-α-吡喃葡萄糖苷(PNPG)反应生成硝基苯，在碱性条件下显黄 色，在405nm左右有最大吸收，在一定浓度范围内，最终反应物的OD值与α-葡萄糖苷酶的活 性呈正相关。α-葡萄糖苷酶能够将聚合度较低的糖分解成为葡萄糖，通过抑制其活力可以 使糖尿病患者的血糖上升得到减缓，从而使血糖平稳，从而达到降血糖的目的。 酪氨酸是酪氨酸酶单酚酶的功能催化底物，是最终形成棕色黑色素和优黑素的主 要原料。酪氨酸酶与黑色素的产生有着密不可分的关系。在黑色素形成的整个过程中，其中 最为主的一类要限速酶就是酪氨酸酶。黑色素形成数量的多少由酪氨酸酶的活性决定着。 而酪氨酸是酪氨酸酶的功能催化底物，是最终形成棕色黑色素和优黑素的主要原料。酪氨 酸酶与酪氨酸反应后的产物在475m有最大吸收，通过紫外仪检测可测出两者产物在475m的 吸光度。目前的化妆品市场上，大部分的美白产品都是以酪氨酸酶活性抑制剂为主要成分 的，并且随着研究的发展，每年都在以较快的速度接连不断发现新的该类化合物。 天然药物具有安全性高的特点，因此从天然药物中寻找抑制α-葡萄糖苷酶和酪氨 酸酶活性的成分是相关医药化学领域的研究热点。到目前为止，有关于天然α-葡萄糖苷酶 活性抑制剂和酪氨酸酶活性抑制剂的文献报道甚少，多种具有降血糖和美白功能的中药材 亟待开发研究。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，我们进一步研究发现，黑老虎提取物具有抑制α-葡萄糖苷 酶活性和酪氨酸酶活性、博落回提取物具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用，为降血糖药品 及保健品或者美白护肤品的开发提供了新的依据。 本发明的技术方案之一： 本发明提供了黑老虎提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。 优选方案，所述黑老虎提取物在制备降糖药物中的应用。 优选方案，所述黑老虎提取物为黑老虎的醇提物和/或黑老虎的水提物，固液比为 3 CN 111603518 A 说 明 书 2/11 页 1：50-200，进一步优选的固液比为1：100。 进一步优选方案，所述黑老虎提取物中黑老虎叶提取物的效果最好，优选黑老虎 叶提取物在制备降糖药物中的应用。 本发明的技术方案之二： 本发明提供了黑老虎叶提取物在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用。 优选方案，所述黑老虎叶提取物在制备美白药药物中的应用。 优选方案，所述黑老虎叶提取物为黑老虎叶的醇提物和/或黑老虎叶的水提物，固 液比为1：50-200，进一步优选的固液比为1：100。 本发明所述黑老虎提取物可以为市售的现有产品。进一步优选方案，所述黑老虎 醇提物醇提方法为：将药材粉碎，过80-100目筛，于40℃-50℃烘干至恒重，用石油醚在35 ℃-45℃下回流30-40min，脱去原料中的脂，回收石油醚，得各样品粉末，称取样品粉末 1.0000g，加入100mL-200mL 75％-95％乙醇回流提取1-2h，取适量提取液离心，上层的清液 即是样品醇提物； 进一步优选方案，所述黑老虎水提物的水提方法为：将药材粉碎，过80-100目筛， 于40℃-50℃烘干至恒重，用石油醚在35℃-45℃下回流30-40min，脱去原料中的脂，回收石 油醚，得各样品粉末，精准称取样品粉末1.0000g，加入100mL-200mL蒸馏水回流提取1h-2h， 取适量提取液离心，上层的清液即是样品水提物。 本发明的技术方案之三： 本发明提供了博落回提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。 优选方案，所述博落回提取物在制备降糖药物中的应用。 优选方案，所述博落回提取物为博落回醇提物和/或博落回水提物，固液比为1： 50-200，进一步优选的固液比为1：100。 本发明所述博落回提取物可以为市售的现有产品。进一步优选方案，所述博落回 醇提物醇的提取方法为：将药材粉碎，过80-100目筛，于40℃-50℃烘干至恒重，用石油醚在 35℃-45℃下回流30-40min，脱去原料中的脂，回收石油醚，得各样品粉末，称取样品粉末 1.0000g，加入100mL-200mL 75％-95％乙醇回流提取1-2h，取适量提取液离心，上层的清液 即是样品醇提物； 进一步优选方案，所述博落回水提物的提取方法为：将药材粉碎，过80-100目筛， 于40℃-50℃烘干至恒重，用石油醚在35℃-45℃下回流30-40min，脱去原料中的脂，回收石 油醚，得各样品粉末，精准称取样品粉末1.0000g，加入100mL-200mL蒸馏水回流提取1h-2h， 取适量提取液离心，上层的清液即是样品水提物。 进一步解释和说明： 本发明所述酪氨酸酶和α-葡萄糖苷酶用PBS溶液配制。 本发明所述提取物以浓度计，酪氨酸酶溶液为0.2-0.8mg/mL；以活力计，所述α-葡 萄糖苷酶溶液为0.5-5U/mL。优选方案，所述酪氨酸酶溶液为0.4mg/mL，所述α-葡萄糖苷酶 为1U/mL。 本发明所述提取物，以体积计，醇和/或水提物与酪氨酸酶和α-葡萄糖苷酶溶液的 混合比为1：0.5-5。优选方案，以体积计，醇和/或水提物与酪氨酸酶和α-葡萄糖苷酶溶液的 混合比为1：1。 4 CN 111603518 A 说 明 书 3/11 页 与现有技术相比，本发明的有益效果： 通过做药材的醇提液和水提液对α-葡萄糖苷酶活性抑制实验，得知在固液比为1: 100的前提下，黑老虎叶的水提液和果皮的醇提液以及博落回水溶液和醇溶液均对α-葡萄 糖苷酶有较高的抑制率，其中黑老虎叶的水提液的抑制率为75.51％，果皮的醇提液的抑制 率为64.90％，对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用最为显著，说明其可能具有良好的降血糖活 性。本发明为新降血糖药物的开发提供了方向依据，为天然α-葡萄糖苷酶抑制剂的开发研 究数据基础。 通过实验，对抑制酪氨酸酶活性实验的方法进行了优化，得出酪氨酸酶活性抑制 实验的最佳反应条件为温度37℃，反应时长1h，酪氨酸酶浓度为0.04mg/ml，酪氨酸浓度为 0.4mg/ml。在此条件下对不同天然成分对酪氨酸酶抑制效果进行实验，结果发现：黑老虎果 皮的醇提液对酪氨酸酶有较高的抑制率，提示有进一步研究开发的意义。本发明为天然美 白护肤品的开发提供了方向依据，为天然酪氨酸酶抑制剂的开发研究提供了数据基础。 附图说明 图1是Lineweave-Burkf双倒数图； 图2是斜率对阿卡波糖浓度的二次倒数图； 图3是酪氨酸酶不同反应时长的吸光度曲线； 图4是酪氨酸酶动力学线性方程； 图5是黑老虎叶液相色谱-质谱分析图； 图6是LC-MS鉴定黑老虎叶部分化学成分结构式。
