技术摘要：
本发明公开了一种高产灵芝多糖的灵芝菌丝体培养基，该培养基可以提供灵芝菌丝体生长所需的营养物质，促进灵芝菌丝的生长，增加灵芝多糖的合成，还提高对灵芝对金属的耐受性。本发明简单有效，易于操作，可提高生产效率，缩短培养时间，有利于高产多糖的灵芝菌丝体的工 全部
背景技术：
灵芝(Ganoderma lucidum)，属于担子菌纲、多孔菌科、灵芝属，具有多种有效成 分，如：多糖类、多糖类、蛋白质类、氨基酸多肽类、核苷类、微量成分等，其中灵芝多糖是灵 芝中重要的组成成分，具有广泛的生物活性，如增强免疫力、清除人体自由基、保护心血管、 抗辐射、保护肝脏、抗肿瘤等作用。 传统栽培灵芝易受环境、人工种植方式等外在因素影响比较大，且生长周期长，难 以实现大规模工业化生产。液体发酵灵芝菌丝体是在适当培养基及培养参数控制下，通入 无菌空气于摇瓶或发酵罐，能保证菌丝体质量、数量及多糖含量的增加、且快速产生大量次 级代谢产物的一种培养方式，具有产量高、周期短、成本低、适于工业化生产等优点。 灵芝多糖作为灵芝重要的生物活性成分，大量研究证明该类多糖能够激活免疫细 胞、调节细胞因子分泌，参与宿主特异性免疫与非特异性免疫，从而提高机体免疫功能。灵 芝多糖主要存在于灵芝细胞壁内壁，对灵芝多糖的进一步研究将有利于灵芝中有效成分的 寻找和进一步探索新的活性并阐明其药理活性机制，如何通过调整发酵培养基及培养条件 使灵芝多糖产量和灵芝菌丝生物量增加，是目前急需解决的技术问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种高产灵芝多糖的培养基，该培养基可以提供灵芝菌丝 体生长所需的营养物质，灵芝菌丝生长好，还能提高灵芝菌丝多糖类物质，提高对灵芝对金 属的耐受性。 本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的： 一种高产多糖的灵芝菌丝体培养基，所述培养基包括种子培养基和发酵培养基， 所述种子培养基为，按质量百分数比由以下成分组成：1％-5％的葡萄糖，0.5～1.5％的蛋 白胨，0.01～3.0％的酵母粉，0.01％-1.0％的磷酸二氢钾，0.01％-2.5％的七水合硫酸镁， 0.15％-0.2％维生素B1，余量为水，使得组份含量百分数之和为100％； 所述发酵培养基，按质量百分数比由以下成分组成：2％-10％的低聚半乳糖，0.5 ～1.5％的茁霉多糖，1％-5％的促进剂，2.5％-5％的蛋白胨，3％-4％的酵母粉，0.01％- 1.0％磷酸二氢钾，0.01％-2.5％的七水合硫酸镁，0.15％-0.2％的维生素B1，余量为水，使 得组份含量百分数之和为100％。 优选的，所述种子培养基,按质量百分数比由以下成分组成：4％的葡萄糖，1％的 蛋白胨，1.0％的酵母粉，0.5％的磷酸二氢钾，1.5％的七水合硫酸镁，0.16％维生素B1，余 量为水，使得组份含量百分数之和为100％； 所述发酵培养基，按质量百分数比由以下成分组成:6％的低聚半乳糖，0.9％的茁 霉多糖，3％的N-十四烷基-N甲基-2吡咯烷酮溴化盐，3.5％的蛋白胨，3.6％的酵母粉， 3 CN 111607553 A 说 明 书 2/6 页 0.6％的磷酸二氢钾，1％的七水合硫酸镁，0.18％的维生素B1，0.05％-0.1％的岩芹酸，余 量为水，使得组份含量百分数之和为100％。 实验发现，以低聚半乳糖和茁霉多糖为碳源、以蛋白胨为氮源能够提高灵芝菌丝 体中灵芝多糖的产量；并且，向发酵培养基中添加岩芹酸，能够进一步促进灵芝多糖的产 量。同时，茁霉多糖还起到促进灵芝胞外多聚物的积累，提高对金属离子的耐受性，能够显 著增加显著灵芝多糖的转化率；此外，N-十四烷基-N甲基-2吡咯烷酮溴化盐在培养基中可 以降低培养基的黏度，促进氧的传递，防止培养基高黏度导致的菌体生长停止和灵芝多糖 的转化受到抑制。 优选的，所述促进剂选自N-十四烷基-N甲基-2吡咯烷酮溴化盐、N-十六烷基-N甲 基-2吡咯烷酮溴化盐、吐温20和聚乙二醇-4000。 本发明还提供一种高产多糖的灵芝菌丝体的培养方法，包括以下步骤： S1、按配方比例称取葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、磷酸二氢钾、七水合硫酸镁、维生素 B1，加入水溶解，灭菌后制备得到种子培养基，将灵芝菌丝接种到种子培养基中培养，获得 种子液； S2、按配方比例称取低聚半乳糖、茁霉多糖、促进剂、蛋白胨、酵母粉、磷酸二氢钾、 七水合硫酸镁、维生素B1，加入水溶解后灭菌得到发酵培养基，将种子液接入种接入装有发 酵培养基的发酵罐中进行发酵罐培养，种子液接种时往发酵培养基中添加岩芹酸，发酵完 成后，过滤，得灵芝菌丝体。 优选的，所述步骤S1中将灵芝菌丝接种到种子培养基中培养的接种量5-10％。 优选的，所述步骤S2中将种子液接入发酵培养基中进行发酵培养的接种量为10- 15％。 优选的，所述步骤S1中将灵芝菌丝接种到种子培养基中培养的条件为：温度25-30 ℃，转速100-180r/min，压力0.03-0.05MPa,空气流流量1:0.3-0.7v/v.min，暗培养2-5天。 优选的，所述步骤S1中将灵芝菌丝接种到种子培养基中培养的条件为：温度25-30 ℃，转速80-180r/min，压力0.03-0.05MPa,空气流流量1:0.5-1.8v/v.min，暗培养3-7天。 在培养基中加入合适的岩芹酸和促进剂，能够共同发挥大幅度提高培养基中的溶 解氧浓度和细胞膜的通透性的作用，并且不会影响菌种的生产能力，改变了细胞与环境进 行物质交换的过程，从而促进灵芝多糖的合成。 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果： (1)本发明采用以低聚半乳糖和茁霉多糖为碳源、以蛋白胨为氮源作为发酵培养 基培养灵芝菌体，并在发酵过程中添加适量岩芹酸，可大幅度提高灵芝菌丝体中灵芝多糖 的产量。 (2)本发明采用培养基添加短梗霉多糖培养灵芝菌体，可大幅度提高灵芝菌丝体 中对金属离子的耐受性，促进灵芝菌丝的生长。 (3)本发明简单有效，易于操作，可提高生产效率，缩短培养周期，有利于高产多糖 灵芝菌丝的工业化生产。
本发明公开了一种高产灵芝多糖的灵芝菌丝体培养基，该培养基可以提供灵芝菌丝体生长所需的营养物质，促进灵芝菌丝的生长，增加灵芝多糖的合成，还提高对灵芝对金属的耐受性。本发明简单有效，易于操作，可提高生产效率，缩短培养时间，有利于高产多糖的灵芝菌丝体的工 全部
背景技术：
灵芝(Ganoderma lucidum)，属于担子菌纲、多孔菌科、灵芝属，具有多种有效成 分，如：多糖类、多糖类、蛋白质类、氨基酸多肽类、核苷类、微量成分等，其中灵芝多糖是灵 芝中重要的组成成分，具有广泛的生物活性，如增强免疫力、清除人体自由基、保护心血管、 抗辐射、保护肝脏、抗肿瘤等作用。 传统栽培灵芝易受环境、人工种植方式等外在因素影响比较大，且生长周期长，难 以实现大规模工业化生产。液体发酵灵芝菌丝体是在适当培养基及培养参数控制下，通入 无菌空气于摇瓶或发酵罐，能保证菌丝体质量、数量及多糖含量的增加、且快速产生大量次 级代谢产物的一种培养方式，具有产量高、周期短、成本低、适于工业化生产等优点。 灵芝多糖作为灵芝重要的生物活性成分，大量研究证明该类多糖能够激活免疫细 胞、调节细胞因子分泌，参与宿主特异性免疫与非特异性免疫，从而提高机体免疫功能。灵 芝多糖主要存在于灵芝细胞壁内壁，对灵芝多糖的进一步研究将有利于灵芝中有效成分的 寻找和进一步探索新的活性并阐明其药理活性机制，如何通过调整发酵培养基及培养条件 使灵芝多糖产量和灵芝菌丝生物量增加，是目前急需解决的技术问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种高产灵芝多糖的培养基，该培养基可以提供灵芝菌丝 体生长所需的营养物质，灵芝菌丝生长好，还能提高灵芝菌丝多糖类物质，提高对灵芝对金 属的耐受性。 本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的： 一种高产多糖的灵芝菌丝体培养基，所述培养基包括种子培养基和发酵培养基， 所述种子培养基为，按质量百分数比由以下成分组成：1％-5％的葡萄糖，0.5～1.5％的蛋 白胨，0.01～3.0％的酵母粉，0.01％-1.0％的磷酸二氢钾，0.01％-2.5％的七水合硫酸镁， 0.15％-0.2％维生素B1，余量为水，使得组份含量百分数之和为100％； 所述发酵培养基，按质量百分数比由以下成分组成：2％-10％的低聚半乳糖，0.5 ～1.5％的茁霉多糖，1％-5％的促进剂，2.5％-5％的蛋白胨，3％-4％的酵母粉，0.01％- 1.0％磷酸二氢钾，0.01％-2.5％的七水合硫酸镁，0.15％-0.2％的维生素B1，余量为水，使 得组份含量百分数之和为100％。 优选的，所述种子培养基,按质量百分数比由以下成分组成：4％的葡萄糖，1％的 蛋白胨，1.0％的酵母粉，0.5％的磷酸二氢钾，1.5％的七水合硫酸镁，0.16％维生素B1，余 量为水，使得组份含量百分数之和为100％； 所述发酵培养基，按质量百分数比由以下成分组成:6％的低聚半乳糖，0.9％的茁 霉多糖，3％的N-十四烷基-N甲基-2吡咯烷酮溴化盐，3.5％的蛋白胨，3.6％的酵母粉， 3 CN 111607553 A 说 明 书 2/6 页 0.6％的磷酸二氢钾，1％的七水合硫酸镁，0.18％的维生素B1，0.05％-0.1％的岩芹酸，余 量为水，使得组份含量百分数之和为100％。 实验发现，以低聚半乳糖和茁霉多糖为碳源、以蛋白胨为氮源能够提高灵芝菌丝 体中灵芝多糖的产量；并且，向发酵培养基中添加岩芹酸，能够进一步促进灵芝多糖的产 量。同时，茁霉多糖还起到促进灵芝胞外多聚物的积累，提高对金属离子的耐受性，能够显 著增加显著灵芝多糖的转化率；此外，N-十四烷基-N甲基-2吡咯烷酮溴化盐在培养基中可 以降低培养基的黏度，促进氧的传递，防止培养基高黏度导致的菌体生长停止和灵芝多糖 的转化受到抑制。 优选的，所述促进剂选自N-十四烷基-N甲基-2吡咯烷酮溴化盐、N-十六烷基-N甲 基-2吡咯烷酮溴化盐、吐温20和聚乙二醇-4000。 本发明还提供一种高产多糖的灵芝菌丝体的培养方法，包括以下步骤： S1、按配方比例称取葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、磷酸二氢钾、七水合硫酸镁、维生素 B1，加入水溶解，灭菌后制备得到种子培养基，将灵芝菌丝接种到种子培养基中培养，获得 种子液； S2、按配方比例称取低聚半乳糖、茁霉多糖、促进剂、蛋白胨、酵母粉、磷酸二氢钾、 七水合硫酸镁、维生素B1，加入水溶解后灭菌得到发酵培养基，将种子液接入种接入装有发 酵培养基的发酵罐中进行发酵罐培养，种子液接种时往发酵培养基中添加岩芹酸，发酵完 成后，过滤，得灵芝菌丝体。 优选的，所述步骤S1中将灵芝菌丝接种到种子培养基中培养的接种量5-10％。 优选的，所述步骤S2中将种子液接入发酵培养基中进行发酵培养的接种量为10- 15％。 优选的，所述步骤S1中将灵芝菌丝接种到种子培养基中培养的条件为：温度25-30 ℃，转速100-180r/min，压力0.03-0.05MPa,空气流流量1:0.3-0.7v/v.min，暗培养2-5天。 优选的，所述步骤S1中将灵芝菌丝接种到种子培养基中培养的条件为：温度25-30 ℃，转速80-180r/min，压力0.03-0.05MPa,空气流流量1:0.5-1.8v/v.min，暗培养3-7天。 在培养基中加入合适的岩芹酸和促进剂，能够共同发挥大幅度提高培养基中的溶 解氧浓度和细胞膜的通透性的作用，并且不会影响菌种的生产能力，改变了细胞与环境进 行物质交换的过程，从而促进灵芝多糖的合成。 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果： (1)本发明采用以低聚半乳糖和茁霉多糖为碳源、以蛋白胨为氮源作为发酵培养 基培养灵芝菌体，并在发酵过程中添加适量岩芹酸，可大幅度提高灵芝菌丝体中灵芝多糖 的产量。 (2)本发明采用培养基添加短梗霉多糖培养灵芝菌体，可大幅度提高灵芝菌丝体 中对金属离子的耐受性，促进灵芝菌丝的生长。 (3)本发明简单有效，易于操作，可提高生产效率，缩短培养周期，有利于高产多糖 灵芝菌丝的工业化生产。
