技术摘要：
本发明涉及扦插育苗技术领域，尤其是一种利用球囊霉素相关土壤蛋白扦插繁育茶苗的方法，对扦插繁育茶苗，经叶面喷施球囊霉素相关土壤蛋白溶液。促进了茶苗扦插繁育效果，实现减少农药、化肥施用量，有助于提高茶苗质量，尤其能够促进茶苗生长以及保证高质量茶苗的产量 全部
背景技术：
球囊霉素相关土壤蛋白(Glomalin-related soil protein，GRSP)是丛枝菌根真 菌(arbuscular mycorrhiza fungi，AMF)随着宿主植物根系生长分泌产生的糖蛋白，内含 有金属离子，且主要为铁离子，存在于AMF菌丝体和孢子壁层结构中，随着菌丝体和孢子降 解而进入土壤。GRSP为土壤有机质的主要组成成分，是土壤有机碳的重要来源，且难溶于 水，不易分解，在自然状态下稳定性较强，因此是土壤稳定性有机碳库的重要组成部分。 GRSP是1996年被Wright等首次发现，普遍存在于各种生态系统土壤中，具有改良土壤有机 结构、土壤特性和促进土壤物质循环等作用。 目前，GRSP提取方法较为普遍，例如专利申请号为201810597831 .X、谢小林等在 2011年的菌物学报30(1)：92-99中所发表的《球囊霉素相关土壤蛋白的提取条件》等文献中 所进行的提取工艺与条件的研究。在所提取得到的产物中，均发现：GRPS中含有蛋白质、腐 殖酸、脂质、无机物质等的混合物，还含有类酪氨酸、类色氨酸、类腐殖酸、类富里酸、类可溶 性微生物代谢产物等，能够吸附或螯合土壤中金属元素养分，含有C、Al、K、P、O、Si、Ca、Fe、 Mg、N、Na等对植物有益的营养元素，其中Fe含量高达0.8-8.8％，C含量高达36-59％，N含量 高达3-5％，P含量高达0.03-0.1％，能够为植物生长补充丰富的营养元素，保障植物的正常 生长，提高植物的生长性能。尤其是在土壤中金属离子含量下降时，球囊霉素相关蛋白能够 通过可逆反应释放相应的金属离子，故而被看作是土壤中金属离子的储备库和营养库。 茶树(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)属山茶科、山茶属茶树种，为灌木或小乔 木，嫩枝无毛，是重要的经济作物之一。目前，茶树繁育方式主要为扦插繁育，即选用2.5- 3cm半木质化，且具有一片完整的成熟叶片和一个饱满腋芽为扦插穗。相较于传统播种育苗 来说，扦插繁育能够保留母穗的优良性状，便于茶园标准化生产和管理；可是，该方法也存 在着：扦插插穗成活率低，生长缓慢，生根率低，茶苗移栽之后适应性差，导致移栽成活率低 等缺陷。 基于此，现有技术中出现了大量关于改善茶树扦插繁育成活率，改善生长性能的 研究，例如：专利申请号为201710942127.9的茶苗菌根化扦插繁育新方法中，公开了通过接 种丛枝菌根真菌，以促进茶苗扦插繁育目的，且是经种植白三叶草，实现丛枝菌根真菌菌种 扩繁，在苗床上接种扩繁的菌土，以促进茶苗根系生长，提高繁育茶苗质量，缩短茶苗繁育 周期。但是经该文献研究显示可见，对不同AMF将对不同品种的茶树根的长度(cm)，造成不 同影响，具体为下表1所示(具体参见文献说明书具体实施例部分：接种105天调查根长)： 表1 3 CN 111567243 A 说 明 书 2/8 页 。 再例如：专利申请号为201910097626.1的提高茶苗田间菌根化扦插繁育效果的方 法中，公开了预先在扦插苗床上撒施AMF高效菌株根内根孢囊酶，再在扦插后喷施独角金内 脂，从而提高茶苗田间菌根化扦插繁育效果，使得AMF对茶苗浸染率增加，提高茶苗发芽率、 愈伤组织出现率和成活率，进而提高茶苗茎高、根长、干鲜重。且在文献中开展了以福鼎大 白茶树品种进行扦插育苗实现，相关指标见下表2所示(详细内容见文件说明书实施例部分 介绍：接种250天，调查株高、根长、干鲜重)： 表2 可见，目前对于茶树扦插育苗方面改善，以丛枝菌根真菌接种处理，能够在一定程 度上改善茶树扦插枝条的生长性能，使得扦插枝条根生长性能得到了一定幅度的改善，以 此来提高茶树扦插育苗的成活率。 据相关文献报道研究，茶园土壤中含有丰富的GRSP，能够直接中茶园土壤中提取 分离获得。GRSP不仅含有AMF分泌产生的糖蛋白，还含有大量的类氨基酸、类腐殖酸以及其 他营养成分和金属阳离子成分，能够为作物生长补充营养，改善作物生长性能。目前，GRSP 促茶苗繁育技术的研究未见报道。
技术实现要素：
为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种利用球囊霉素相关土 壤蛋白扦插繁育茶苗的方法。 具体是通过以下技术方案得以实现的： 本发明创造的目的之一是提供利用球囊霉素相关土壤蛋白扦插繁育茶苗的方法， 对扦插繁育茶苗，经叶面喷施球囊霉素相关土壤蛋白溶液。促进了茶苗扦插繁育效果，实现 减少农药、化肥施用量，有助于提高茶苗质量，尤其能够促进茶苗生长。 采用的球囊霉素相关土壤蛋白是经采集茶园中土壤，并根据Wright and Upadhyaya(1998)的方法分离所得，其球囊霉素相关土壤蛋白浓度能够达到12.96mg/g，该 浓度下，优选加入清水配制成浓度为6.48mg/g的溶液之后，再用于喷施。 具体在制备过程中：是将茶园采集来的土壤风干，称取10 .00g风干土壤，加入 100mL离心管中，其中，离心管中加入有摩尔浓度为20mmol/L、pH7.0的柠檬酸钠溶液8mL，充 分摇匀，再在121℃、0.1MPa下灭菌30min，冷却至常温后，在4750r/min下离心10min，取棕红 色上清液；再向离心管中加入与第一次等体积量的相同柠檬酸钠溶液，重复提取，直至上清 4 CN 111567243 A 说 明 书 3/8 页 液棕红色消失为止，合并上清液，即得球囊霉素相关土壤蛋白溶液。经该法所得的溶液，优 选，加入清水，调配至球囊霉素相关土壤蛋白浓度为6.48mg/g的溶液后，再将其喷施。 优选，所述的叶面喷施是在扦插繁育茶苗时，待扦插在苗床上60-80d后，再采用球 囊霉素相关土壤蛋白溶液进行叶面喷施。在该条件下喷施，能够充分利用叶片的光合作用， 促进茶苗的改善，从而提高茶苗繁育效果，改善生长性能。 优选，所述的扦插，是选择半木质化的嫩侧枝作为扦插穗，扦插穗长为2.5-3cm，且 含一片成熟叶片和一个饱满腋芽；扦插穗顶端的剪口距腋芽2mm；所述苗床，长8-10m，宽 1.2-1.3m，高20-25cm，且在相邻苗床间预留10-15cm宽的人行道。 优选，所述的方法还包括在叶面喷施球囊霉素相关土壤蛋白溶液后，对茶园人工 除草、喷洒1次浓度为8mL/25kg的联苯菊酯溶液来防治茶苗虫害和在追施一次尿素，追施量 为20kg/亩。 本发明创造的目的之二是还提供上述的利用球囊霉素相关土壤蛋白扦插繁育茶 苗的方法应用于福鼎大白、湄潭苔茶、都匀毛尖、石阡苔茶的品种扦插繁育茶苗中。 本发明创造的目的之三是提供球囊霉素相关土壤蛋白在扦插繁育茶苗中的应用。 优选，所述的应用，制备成球囊霉素相关土壤蛋白溶液后，再以叶面喷施方式喷洒 在扦插苗上。 与现有技术相比，本发明创造的技术效果体现在： ①采用GRSP喷施在茶苗中，充分利用茶苗光合作用，结合GRSP中养分，实现对养分 吸收，为茶苗生长补充养分，减少了农药、尿素的使用，提高了茶苗质量，改善了茶苗生长性 能，提高了达到国家二级茶苗标准的茶苗亩产量。 ②利用茶园土壤作为球囊霉素相关土壤蛋白提取原料，不仅原料来源丰富，而且 环保，经济，同时能够加快茶苗生长，提高茶苗的环境适应能力，保障茶苗移栽后的成活率。
本发明涉及扦插育苗技术领域，尤其是一种利用球囊霉素相关土壤蛋白扦插繁育茶苗的方法，对扦插繁育茶苗，经叶面喷施球囊霉素相关土壤蛋白溶液。促进了茶苗扦插繁育效果，实现减少农药、化肥施用量，有助于提高茶苗质量，尤其能够促进茶苗生长以及保证高质量茶苗的产量 全部
背景技术：
球囊霉素相关土壤蛋白(Glomalin-related soil protein，GRSP)是丛枝菌根真 菌(arbuscular mycorrhiza fungi，AMF)随着宿主植物根系生长分泌产生的糖蛋白，内含 有金属离子，且主要为铁离子，存在于AMF菌丝体和孢子壁层结构中，随着菌丝体和孢子降 解而进入土壤。GRSP为土壤有机质的主要组成成分，是土壤有机碳的重要来源，且难溶于 水，不易分解，在自然状态下稳定性较强，因此是土壤稳定性有机碳库的重要组成部分。 GRSP是1996年被Wright等首次发现，普遍存在于各种生态系统土壤中，具有改良土壤有机 结构、土壤特性和促进土壤物质循环等作用。 目前，GRSP提取方法较为普遍，例如专利申请号为201810597831 .X、谢小林等在 2011年的菌物学报30(1)：92-99中所发表的《球囊霉素相关土壤蛋白的提取条件》等文献中 所进行的提取工艺与条件的研究。在所提取得到的产物中，均发现：GRPS中含有蛋白质、腐 殖酸、脂质、无机物质等的混合物，还含有类酪氨酸、类色氨酸、类腐殖酸、类富里酸、类可溶 性微生物代谢产物等，能够吸附或螯合土壤中金属元素养分，含有C、Al、K、P、O、Si、Ca、Fe、 Mg、N、Na等对植物有益的营养元素，其中Fe含量高达0.8-8.8％，C含量高达36-59％，N含量 高达3-5％，P含量高达0.03-0.1％，能够为植物生长补充丰富的营养元素，保障植物的正常 生长，提高植物的生长性能。尤其是在土壤中金属离子含量下降时，球囊霉素相关蛋白能够 通过可逆反应释放相应的金属离子，故而被看作是土壤中金属离子的储备库和营养库。 茶树(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)属山茶科、山茶属茶树种，为灌木或小乔 木，嫩枝无毛，是重要的经济作物之一。目前，茶树繁育方式主要为扦插繁育，即选用2.5- 3cm半木质化，且具有一片完整的成熟叶片和一个饱满腋芽为扦插穗。相较于传统播种育苗 来说，扦插繁育能够保留母穗的优良性状，便于茶园标准化生产和管理；可是，该方法也存 在着：扦插插穗成活率低，生长缓慢，生根率低，茶苗移栽之后适应性差，导致移栽成活率低 等缺陷。 基于此，现有技术中出现了大量关于改善茶树扦插繁育成活率，改善生长性能的 研究，例如：专利申请号为201710942127.9的茶苗菌根化扦插繁育新方法中，公开了通过接 种丛枝菌根真菌，以促进茶苗扦插繁育目的，且是经种植白三叶草，实现丛枝菌根真菌菌种 扩繁，在苗床上接种扩繁的菌土，以促进茶苗根系生长，提高繁育茶苗质量，缩短茶苗繁育 周期。但是经该文献研究显示可见，对不同AMF将对不同品种的茶树根的长度(cm)，造成不 同影响，具体为下表1所示(具体参见文献说明书具体实施例部分：接种105天调查根长)： 表1 3 CN 111567243 A 说 明 书 2/8 页 。 再例如：专利申请号为201910097626.1的提高茶苗田间菌根化扦插繁育效果的方 法中，公开了预先在扦插苗床上撒施AMF高效菌株根内根孢囊酶，再在扦插后喷施独角金内 脂，从而提高茶苗田间菌根化扦插繁育效果，使得AMF对茶苗浸染率增加，提高茶苗发芽率、 愈伤组织出现率和成活率，进而提高茶苗茎高、根长、干鲜重。且在文献中开展了以福鼎大 白茶树品种进行扦插育苗实现，相关指标见下表2所示(详细内容见文件说明书实施例部分 介绍：接种250天，调查株高、根长、干鲜重)： 表2 可见，目前对于茶树扦插育苗方面改善，以丛枝菌根真菌接种处理，能够在一定程 度上改善茶树扦插枝条的生长性能，使得扦插枝条根生长性能得到了一定幅度的改善，以 此来提高茶树扦插育苗的成活率。 据相关文献报道研究，茶园土壤中含有丰富的GRSP，能够直接中茶园土壤中提取 分离获得。GRSP不仅含有AMF分泌产生的糖蛋白，还含有大量的类氨基酸、类腐殖酸以及其 他营养成分和金属阳离子成分，能够为作物生长补充营养，改善作物生长性能。目前，GRSP 促茶苗繁育技术的研究未见报道。
技术实现要素：
为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种利用球囊霉素相关土 壤蛋白扦插繁育茶苗的方法。 具体是通过以下技术方案得以实现的： 本发明创造的目的之一是提供利用球囊霉素相关土壤蛋白扦插繁育茶苗的方法， 对扦插繁育茶苗，经叶面喷施球囊霉素相关土壤蛋白溶液。促进了茶苗扦插繁育效果，实现 减少农药、化肥施用量，有助于提高茶苗质量，尤其能够促进茶苗生长。 采用的球囊霉素相关土壤蛋白是经采集茶园中土壤，并根据Wright and Upadhyaya(1998)的方法分离所得，其球囊霉素相关土壤蛋白浓度能够达到12.96mg/g，该 浓度下，优选加入清水配制成浓度为6.48mg/g的溶液之后，再用于喷施。 具体在制备过程中：是将茶园采集来的土壤风干，称取10 .00g风干土壤，加入 100mL离心管中，其中，离心管中加入有摩尔浓度为20mmol/L、pH7.0的柠檬酸钠溶液8mL，充 分摇匀，再在121℃、0.1MPa下灭菌30min，冷却至常温后，在4750r/min下离心10min，取棕红 色上清液；再向离心管中加入与第一次等体积量的相同柠檬酸钠溶液，重复提取，直至上清 4 CN 111567243 A 说 明 书 3/8 页 液棕红色消失为止，合并上清液，即得球囊霉素相关土壤蛋白溶液。经该法所得的溶液，优 选，加入清水，调配至球囊霉素相关土壤蛋白浓度为6.48mg/g的溶液后，再将其喷施。 优选，所述的叶面喷施是在扦插繁育茶苗时，待扦插在苗床上60-80d后，再采用球 囊霉素相关土壤蛋白溶液进行叶面喷施。在该条件下喷施，能够充分利用叶片的光合作用， 促进茶苗的改善，从而提高茶苗繁育效果，改善生长性能。 优选，所述的扦插，是选择半木质化的嫩侧枝作为扦插穗，扦插穗长为2.5-3cm，且 含一片成熟叶片和一个饱满腋芽；扦插穗顶端的剪口距腋芽2mm；所述苗床，长8-10m，宽 1.2-1.3m，高20-25cm，且在相邻苗床间预留10-15cm宽的人行道。 优选，所述的方法还包括在叶面喷施球囊霉素相关土壤蛋白溶液后，对茶园人工 除草、喷洒1次浓度为8mL/25kg的联苯菊酯溶液来防治茶苗虫害和在追施一次尿素，追施量 为20kg/亩。 本发明创造的目的之二是还提供上述的利用球囊霉素相关土壤蛋白扦插繁育茶 苗的方法应用于福鼎大白、湄潭苔茶、都匀毛尖、石阡苔茶的品种扦插繁育茶苗中。 本发明创造的目的之三是提供球囊霉素相关土壤蛋白在扦插繁育茶苗中的应用。 优选，所述的应用，制备成球囊霉素相关土壤蛋白溶液后，再以叶面喷施方式喷洒 在扦插苗上。 与现有技术相比，本发明创造的技术效果体现在： ①采用GRSP喷施在茶苗中，充分利用茶苗光合作用，结合GRSP中养分，实现对养分 吸收，为茶苗生长补充养分，减少了农药、尿素的使用，提高了茶苗质量，改善了茶苗生长性 能，提高了达到国家二级茶苗标准的茶苗亩产量。 ②利用茶园土壤作为球囊霉素相关土壤蛋白提取原料，不仅原料来源丰富，而且 环保，经济，同时能够加快茶苗生长，提高茶苗的环境适应能力，保障茶苗移栽后的成活率。
