技术摘要：
本发明公开了一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物，包括GIV‑M病毒引物和GIV‑R病毒引物；其中GIV‑R病毒引物包括SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的反向引物和SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列的正向引物组成；GIV‑R，由SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列的正向引物和SEQ ID NO：6  全部
背景技术：
石斑鱼是全球分布的名贵海洋鱼类，具有重要的经济价值。中国是世界上石斑鱼 的主产国，自2014年以来的年总产量稳定在10万吨左右(2016年中国渔业统计年鉴)，占世 界石斑鱼总产量约60％，产值超过100亿元人民币。但是，随着石斑鱼养殖业的快速发展，病 害发生日益频繁，其中，病毒性病害尤为严重，成为限制石斑鱼产业健康发展的瓶颈之一。 石斑鱼虹彩病毒(grouperiridovirus，GIV)是石斑鱼养殖中危害严重的一类病原，能够感 染30多种石斑鱼，导致严重致死，在过去十年对东南亚各国造成了严重的经济损失。虹彩病 毒科共包括五个病毒属 ，其中对石斑鱼危害较大的 主要是 肿大细胞 病毒属 (genusMegalocytivirus)和蛙病毒属(genusRanavirus)，分别简称GIV-M和GIV-R (Maetal.,2012)。GIV-M/R可危害各种规格的石斑鱼，致死率皆可达70％以上。 目前已有一些检测方法如核酸探针、常规PCR、RT-PCR、荧光定量PCR、环介导等温 扩增(LAMP)等，这些方法虽然能检测鱼类病毒，但都存在着的缺陷：核酸探针方法检测灵敏 度低，低于105拷贝的病毒无法检出，不能满足防控疾病的需求；常规PCR、RT-PCR、荧光定量 PCR、环介导等温扩增(LAMP)等方法，因引物相互干扰，各病毒基因的扩增必须在不同的反 应管中进行，故通常仅能对一种或几种病毒进行检测，无法对上述多种鱼类病毒同步、快速 检测，检测效率低等； 现有试剂通过放置在试管中，并防止在试剂盒中进行存放，但现有的存放盒在使 用过程中，拿取试管后，由于一个试剂盒中通常放置有多个试管，经常出现，在拿取试管后， 忘记将试剂盒关闭，使试管暴露在外部。
技术实现要素：
(一)解决的技术问题 针对现有技术的不足，本发明提供了一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物、检测方 法及试剂盒，解决了现有试剂盒在拿取试管后容易忘记关闭试剂盒的问题。 (二)技术方案 为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种石斑鱼虹彩病毒的双 重PCR引物，包括GIV-M病毒引物和GIV-R病毒引物； 其中GIV-R病毒引物包括SEQID  NO：2所示的核苷酸序列的反向引物和SEQID  NO：3 所示的核苷酸序列的正向引物组成； GIV-R，由SEQID  NO：5所示的核苷酸序列的正向引物和SEQIDNO：6所示的核苷酸序 列的反向引物组成。 一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR检测方法，包括以下方法： 3 CN 111575408 A 说　明　书 2/5 页 S1：从待检样品制备基因组总DNA； S2：以制备的基因组DNA为模板，利用如权利要求1所述的双重PCR引物，在同一反 应体系中进行双重PCR扩增，且反应温度在50-70℃，反应时间15-20min，得到扩增产物； S3：扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，获得检测结果。 一种石斑鱼虹彩病毒试剂盒，包括存放盒，所述存放盒两侧均开设有存放腔，所述 存放腔内表面的两侧均开设有矩形腔，所述存放腔的内部设置有放置组件，所述放置组件 包括放置台，所述放置台上对称开设有放置槽，所述存放腔的内部设置有弹性拉伸组件，所 述弹性拉伸组件与所述放置台的一侧传动连接，所述放置台的另一侧固定连接有密封板， 所述存放盒上且位于所述存放腔的两侧均设置有卡锁组件。 通过设置弹性拉伸组件，当放置台被拉出后，松开放置台后，可以自动收回至存放 腔中。 进一步地，所述放置槽的内表面粘接有橡胶圈，所述放置台的顶部且位于所述放 置槽的两侧均开设有拿取槽，所述拿取槽的内表面的一侧与所述放置槽的内部连通。 通过在放置槽内表面设置橡胶圈，可以试管放置后更加的稳定，起到缓冲保护的 作用，通过设置拿取槽可以方便将试管取出。 进一步地，所述弹性拉伸组件包括连接杆，所述连接杆固定于所述矩形腔内壁的 两侧之间，所述连接杆表面的两侧均套设有滑块，所述连接杆的表面且位于两个所述滑块 之间套设有弹性件。 进一步地，两个所述滑块的一侧均固定连接有弹性绳，所述弹性绳的一端与所述 放置台的一侧固定连接。 进一步地，所述卡锁组件包括支撑轴，所述支撑轴的一端固定连接有连接杆，所述 连接杆的表面套设有转动轴，所述转动轴表面的一侧固定连接有限为块。 进一步地，所述密封板上且位于放置台的两侧均粘接有硅胶块，所述密封板的两 侧均开设有固定孔； 通过在密封板的两侧粘接硅胶块，可以对当在弹性伸缩组件的作用下密封板与存 放盒的撞击时的冲击进行减震，使其更加的稳定，且在固定时通过硅胶块的弹性势能，使密 封板与卡锁组件固定更加的稳定。 进一步地，所述固定孔内表面的一侧连通有限位槽，所述密封板上开设有连接孔， 所述连接孔与所述固定孔的内部连通。 进一步地，所述密封板的一侧固定连接有带动柄，所述存放盒的顶部固定连接有 把手。 通过设置把手，方便携带存放盒。 (三)有益效果 本发明具有以下有益效果： 该石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物、检测方法及试剂盒，通过将存放盒设置为抽拉 式，当放置台拉出进行取试管后，且通过配合弹性拉伸组件，可以自动使存放台收回至放置 槽内部，不会存在当拿取试管后，忘记关闭试剂盒的情况，且试管的放置和取出操作简单方 便。 当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。 4 CN 111575408 A 说　明　书 3/5 页 附图说明 图1为本发明试剂盒的剖视图； 图2为本发明试剂盒的正视图； 图3为本发明图1中A部的放大图； 图中，1-存放盒、2-存放腔、3-矩形腔、4-放置组件、41-放置台、42-放置槽、43-橡 胶圈、44-拿取槽、5-弹性拉伸组件、51-连接杆、52-滑块、53-弹性件、54-弹性绳、6-密封板、 7-带动柄、8-固定孔、9-卡锁组件、91-支撑轴、92-连接杆、93-转动轴、94-限位块、10-连接 孔、11-限位槽、12-硅胶块、13-把手。